2016年度湖南省永州市活禽市场H7N9流感监测分析与防控措施研究

禹小芳，郝知友，邹玖零，屈蓓蓓，李英明，尹秋元

（湖南省永州市畜牧水产局，湖南永州425000）

畜产品安全

2016年度湖南省永州市活禽市场H7N9流感监测分析与防控措施研究

禹小芳，郝知友，邹玖零，屈蓓蓓，李英明，尹秋元※

（湖南省永州市畜牧水产局，湖南永州425000）

［目的］监测湖南省永州市城乡活禽市场中禽流感病毒的分布状况，为H7H9流感防控措施的落实提供理论参考依据。［方法］2016年11～12月，从各县区监测点采集880份外环境拭子样品(禽类粪便、笼具表面擦拭、禽类饮水、清洗禽类的污水等标本)，以实时荧光定量RT-PCR方法检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒核酸，并对结果数据统计分析。［结果］H5、H7、H9亚型核酸均有检出率，H9亚型核酸总体检出率最高；多发于湿冷季节；城区活禽交易市场的流感病毒阳性检出率要高于郊区活禽农贸市场；在外环境标本中，冲洗禽类的污水为禽流感病毒核酸检出率最高。［结论］落实“一日一消毒、一日一清洗，一月一休市”措施，提高整洁度，有利于控制清洗禽类的污水里禽流感病毒的传播，加强执行的同时，还应从禽流感亚型、季节、区域环境等因素综合考量，突出重点，统筹兼顾，全方位对禽流感进行防控。

H7N9；禽流感；实时荧光定量PCR；活禽市场；禽流感防控

禽流感是由禽流感病毒 (Avian influenza virus，AIV)引起的一种禽类传染病，鸡、火鸡、鸭和鹌鹑等家禽均可感染，发病情况差别较大，有的出现急性死亡，有的无症状带毒[1]。水禽是AIV的自然宿主，也是流感病毒的天然基因库，几乎所有亚型的流感病毒都可以在水禽中分离到[2]。在世界范围内，家禽中流行的主要有H5、H6、H7、H9等亚型。H5和H7亚型的某些毒株可以造成禽类很高的发病率和死亡率，被称为高致病性禽流感(HPAI)病毒。OIE将高致病性禽流感列为A类动物疫病，我国也将其列为一类动物疫病[3]。2017年1月，全国(不含港澳台)共报告法定传染病482 019例，死亡1 121人。其中，人感染H7N9流感发病数192例，死亡数79人。与2016年12月份数据相比，2017年1月的H7N9疫情明显上升。截至到2月20日，湖南省2017年报告24例人感染H7N9流感病例，5例死亡。另外，湖南家禽养殖业因遭受禽流感影响，造成直接经济损失超过10亿。因此，流感不仅给人类健康和公共安全带来严重威胁，还制约着经济的健康发展。所以，在严峻的流感防控形势下，加强对H7N9流感监测分析与防控措施的研究是十分有必要的。

1 材料与方法

1.1 标本样品的采集

采集时间和地点：本次采集样品按时间可分为2016年11月上半月、下半月，12月上半月、下半月四个阶段，前三个阶段主要针对部分县区的城区活禽交易市场进行随机采样。最后一个阶段是针对全市城区活禽交易以及乡镇农贸市场进行随机采样。

采集样本：采集外环境拭子样品，如粪便标本、笼具表面擦拭标本、禽类饮水、清洗禽类的污水标本等。11月上半月，永州市动物疫病防控中心在11个县区城区活禽交易市场，共随机采集粪便标本、笼具表面擦拭标本、禽类饮水、清洗禽类的污水标本，共计53份。11月下半月，在11个县区的城区活禽交易市场共随机采集113份标本。12月上半月在6个县区城区活禽交易，共采集32份标本。12月下半月在全市13个县区城乡活禽交易市场随机采取监测样品，每个县区的禽拭子对样品与环境样品各不低于20份，共采集了686份外环境样品进行实验室检测。

1.2 检测试剂

禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原（Re-6株）（哈尔滨维科生物技术开发公司出品，批号：2013001、2013005、2014005、2015015），禽流感病毒H5/H7/H9型实时荧光RT-PCR检测试剂盒（分别为中山大学达安基因股份有限公司、深圳科生源生物科技有限公司产品）。

1.3 检测方法

禽流感病原检测按禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法（GB/T19438.1-2004）。从环境标本中提取病毒RNA后，以实时荧光定量反转录－聚合酶链反应法(real-time RT-PCR)检测H5、H7、H9亚型核酸，并记录相关数据。

1.4 数据处理

将有关数据录入Excel 2003软件进行整理，通过SPSS 13.0软件进行统计分析，并使用GraphPad Prism5软件制图。

2 结果与分析

2.1 亚型分布

在永州市城乡活禽市场外环境监测中，四个时间段的样品标本检测实验结果分别见表1～表4。

表1 2016年11月(上半月)外环境中各亚型监测数据/%

表2 2016年11月(下半月)外环境中各亚型监测数据/%

表3 2016年12月（上半月）外环境中各亚型监测数据/%

表4 2016年12月（下半月）外环境中各亚型监测数据/%

结合表1～表4可以发现，H5、H7、H9亚型流感病毒在外环境样本中均有检出，且H5、H7、H9亚型核酸阳性平均检出率分别为2.39%、1.25%和10.8%。结果表明，H5、H7、H9亚型流感病毒在湖南永州均有存在，且H9亚型流感病毒的检出阳性率总体水平要远高于其他亚型，在防控H7N9流感病毒的同时，也要警惕其它亚型的发生。

2.2 季节分布

表5为2016年4月永州市活禽交易市场禽流感监测数据表，对比表4与表5的数据，发现表4内的H5、H7、H9亚型核酸的平均检出率均高于表5，表明2016年12月在活禽交易市场潜伏的流感病毒比4月份要高，也验证了禽流感多发于湿冷季节。

表5 2016年4月活禽交易市场外环境中各亚型监测数据/%

2.3 区域分布

把第四时间段的样品标按照城郊区域划分，城郊区按相同的标本类型比例（禽类粪便、笼具表面擦拭标本、禽类饮水、清洗禽类污水）在城区活禽交易市场采集了462份样品，在郊区农贸市场采集了224份样品，检测结果如表6。城区活禽交易市场H5、H7、H9亚型核酸的平均阳性检出率均高于郊区乡镇的农贸市场，而且城区H7亚型核酸阳性检出率与郊区具有显著差异（P＜0.05），城区H9亚型核酸阳性检出率与郊区具有极显著差异（P＜0.01）的统计学意义。

表6 2016年12月（下半月）外环境中各亚型监测数据

2.4 标本类型分布

在表1～表4中，H5亚型核酸检出率最高的为清洗禽类污水(23.53%)，平均检出率为2.39%。H7亚型流感病毒只在12月清洗禽类污水里有检出，检出率为11.76%，平均检出率为1.25%。H9检出率最高的为清洗禽类污水（71.05%），平均检出率为14.09%。

图1 2016年11～12月永州市禽流感外环境监测数据

如图1所示，H5、H7、H9亚型流感病毒在清洗禽类污水的检测率均高于其他类型的标本，H5亚型流感病毒检出最高的为禽类污水标本，最低为禽类粪便。H7亚型流感病毒只在粪便标本与禽类污水标本有检出，H9在清洗禽类污水标本的检出率显著高于笼具表面擦拭标本（P＜0.05），验证了湿润的环境更适合流感病毒生存。

3 讨论

通过本实验，禽流感H5、H7及H9亚型禽流感病毒在永州均有分布，2016年12月各亚型禽流感阳性检出率均高于4月份，验证了禽流感病毒多发于湿冷气候。防控禽流感应该纳入重大动物疫病防控的常态工作中来。在区域分布上看，城区的活禽交易市场禽流感阳性检出率要高于郊区，禽流感防控工作需要突出区域重点。从标本类型来看，永州市活禽市场环境标本H5亚型禽流感病毒检出率最高的是清洗禽类污水标本，最低的是禽类粪便标本，笼具表面擦拭标本与饮水标本的阳性检出率高低不具备统计学意义。可能一方面，禽流感病毒在水中有较高的存活率，在同等的条件下水比笼具更适合禽流感病毒的生存，另一方面饮水样本的来源较复杂，且水具有流动性，即检出结果跟水源有直接关系。所以，清洗消毒能很大程度限制禽流感病毒的传播。

2013年危害我国的H7N9亚型流感病毒的6个内部基因全部来源于近年在我国流行的H9N2亚型禽流，感病毒凸显了不同亚型禽流感病毒基因重配的潜在威胁性和公共卫生学意义[5]。本次检测结果显示，H9亚型禽流感病毒有较高的阳性检出率，混合阳性在上述各类环境标本中也有存在，为流感病毒发生基因重配提供了可能。我们在防控H7N9型禽流感的同时，也应该加强其他亚型的禽流感病毒的检测与防控[4]。

4 结论

禽流感是由流感病毒引起禽类的一种从呼吸系统到严重全身败血症等多种症状的传染病，多发生冬春季节。主要经呼吸道传播，通过密切接触感染的禽类及其分泌物、排泄物，受病毒污染的水等，以及直接接触病毒毒株被感染。禽流感病毒对热比较敏感，65℃加热30min或煮沸（100℃）2min以上可灭活。病毒在粪便中可存活1周，在水中可存活1个月，在pH＜4.1的条件下也具有存活能力。病毒对低抗温抵力较强，在有甘油保护的情况下可保持活力1年以上。病毒在直射阳光下40～48h即可灭活，如果用紫外线直接照射，可迅速破坏其传染性。

综上所述，我们应该贯彻《湖南省防治重大动物疫病指挥部关于进一步做好H7N9禽流感防控工作的紧急通知》，提高对禽流感的认识，进一步加大活禽交易市场监管力度，进一步加大病毒监测力度，进一步落实养禽场综合防控措施。执行湘防重病指〔2014〕1号提出的“一日一清洗，一周一消毒，一月一休市”措施，严把活禽市场清洗消毒关，收窄禽流感病毒传播途径。此外，面对亚型多变的禽流感病毒，我们还可以借鉴国外对禽流感的防控经验以及创新有力的禽流感防控措施[5]。 □

[1]Simo n M.Global.advances in poultry disease research[J].World Poultry,2003，(7):6.

[2]Webster RG,Bean WJ,Gorman OT,et al.Evolution and ecology of influenza A viruses[J].Microbiological Reviews,1992,56(1):152-179.

[3]甘孟侯.禽流感[M].北京:北京农业大学出版社,1995.

[4]Jiang W，Liu S，Hou G，et al.Chinese and global distribution of H9 subtype avian influenza viruses[J].PLoS One,2012,7（12）:e52671.

[5]陈继明.我国禽流感等禽病防控六大新策略 [J].中国动物检疫, 2014,31（2）:82-85.

S851.3

A

1006-4907（2017）02-0002-03

10.3969/j.issn.1006-4907.2017.02.002

2017-03-21

禹小芳（1988～），男，汉族，硕士，研究方向为动物疫病预防与控制，yuxiaofangsy@126.com。

尹秋元（1970～），男，汉族，高级兽医师，大学本科，研究方向为动物疫病预防与控制。