一株副猪嗜血杆菌的鉴定及药敏试验

张 磊，柴强强，李润成，黎满香

（湖南农业大学动物医学院，湖南长沙410128）

一株副猪嗜血杆菌的鉴定及药敏试验

张 磊，柴强强，李润成，黎满香※

（湖南农业大学动物医学院，湖南长沙410128）

湖南浏阳地区某猪场发生保育猪急性死亡，临床症状为咳嗽、消瘦和被毛粗乱，剖检可见多发性浆膜炎和关节炎等病变。取3份死亡猪的肺脏做细菌鉴定及药敏试验，根据临床症状、病理变化、显微镜镜检和16S rDNA结果,确定分离到副猪嗜血杆菌。药敏试验结果表明，该菌对丁胺卡那、大观霉素、头孢类药物相对敏感。

副猪嗜血杆菌；病原鉴定；16S rDNA；药敏试验

副猪嗜血杆菌病（或称格拉斯病）是由副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)引起的猪的一种以多发性浆膜炎和关节炎为特征的疾病,主要临床症状为咳嗽、消瘦、跛行和被毛粗乱等，多感染断奶猪和保育猪,常见于5～8周龄，发病率一般为15%左右[1]。该病经常与猪繁殖与呼吸综合征、圆环病毒等免疫抑制性疾病混合感染,给全球的养猪业造成巨大的经济损失[2]。

1 材料与方法

1.1 病料

病料为湖南浏阳地区某猪场急性死亡的3头保育猪的肺脏。

1.2 培养基及试剂

胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）（Sigma公司）；巧克力琼脂培养基（江门市凯林贸易有限公司）；药敏纸片（杭州天和微生物试剂有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 细菌分离

无菌剪取0.5g肺脏组织，放入装有无菌钢珠的离心管，匀浆6分钟后加入TSB，充分混匀。取20 μL培养液涂抹于巧克力琼脂培养基，放入37℃恒温培养箱中培养48h。

1.3.2 染色镜检

取分离到的单菌落进行革兰氏染色镜检，观察细菌的染色特性及形态。

1.3.3 PCR鉴定

挑取巧克力琼脂培养基上的单菌落作模板，利用细菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增[3]，PCR扩增产物送金斯瑞生物技术有限公司测序。

1.3.4 药敏试验

将培养好的菌液稀释后用棉签均匀涂布于巧克力琼脂培养基，选取13种药敏试纸片贴于平板上（详见表1），放入37℃培养箱培养24h，判定药敏试验结果。判定标准：抑菌圈直径＜15mm为低度敏感；15mm～25mm为中度敏感；＞25 mm为高度敏感。

2 结果

2.1 细菌分离培养与形态观察

该菌株在巧克力琼脂培养基上培养48h后，长出边缘整齐、圆形、灰白色透明、针尖大小的菌落。挑取单菌落涂片染色镜检，可见多数呈细小短杆状，有的呈细小长杆状的革兰氏阴性菌，其生长特性及菌落形态符合副猪嗜血杆菌特征。

2.2 PCR鉴定结果

将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，目的片段大小约1500bp，结果显示为阳性（见图1）。测序结果在Genbank上进行分析，结果显示该菌与副猪嗜血杆菌的同源性达到99%，进一步证实该菌株为副猪嗜血杆菌。

图1 细菌通用引物16SrDNA检测结果

2.3 药敏试验结果

药敏试验结果表明该菌对丁胺卡那、大观霉素、头孢类药物相对敏感。（详见表1）。

表1 分离菌的药敏试验结果

3 讨论

本试验对3份急性死亡的病猪肺脏进行鉴定，确定分离到副猪嗜血杆菌。在通过结合分离菌株的药敏试验结果科学用药后，该猪场病情得到显著控制。目前，大多采用疫苗对猪副嗜血杆菌病进行防制，但副猪嗜血杆菌的血清型较多，且不同血清型之间无交叉保护力，若随意使用商品化疫苗，将无法有效控制副猪嗜血杆菌病。因此，副猪嗜血杆菌病的综合防制除加强饲养管理、定期彻底消毒和抗菌素处理外，还应精准化免疫接种。 □

[1]刘俊伟，安志兴，葛亚明，等.副猪嗜血杆菌河南株的分离鉴定及药敏试验[J].西北农业学报,2011，(2):37-39.

[2]蔡旭旺.副猪嗜血杆菌的分离鉴定及诊断方法与灭活疫苗的研究[D].华中农业大学,2006.

[3]黎满香，林荣高，薛立群，等.湖南猪源粪肠球菌的分离鉴定及16S rDNA系统进化分析[J].中国兽医学报,2011，(9):1290-1294.

S852.6

A

1006-4907（2017）02-0035-02

10.3969/j.issn.1006-4907.2017.02.016

2017-04-05

湖南科技计划项目（2015NK3017）

张磊（1991～），女，硕士在读，从事预防兽医学研究。

※通讯作者：黎满香，E-mail：manxiangl@163.com。