银杏叶中三种黄酮类含量采用一测多评法测定

王卫华，安芸

（菏泽医学专科学校，山东菏泽274000）

银杏叶中三种黄酮类含量采用一测多评法测定

王卫华，安芸

（菏泽医学专科学校，山东菏泽274000）

目的探讨一测多评法对银杏叶中3种黄酮类成分进行含量测定。方法实施高效液相色谱法，将槲皮素作为内参物，再建立与异鼠李素和山柰素相对的校正因子，并对相应的含量进行计算；选取外标法对银杏叶中三种黄酮类成分的含量进行测定，对比分析实测值与计算值之间的差异，旨在得出一测多评法的可行性与准确性。结果一测多评法计算值与外标法测定值之间的比较差异不显著，且本次研究得出的校正因子具有可信度。结论银杏叶中3种黄酮类成分的含量应用一测多评法进行测定具有其可行性与适用性。

银杏叶；黄酮；一测多评法

银杏树即公孙树，是一种最古老的植物，享有裸子植物活化石的称呼。《本草纲目》[1]记载，银杏果有止白带、遗尿、平喘敛肺的作用，自20世纪60年代以来，诸多专家学者大量研究了银杏叶，其中有涉及到银杏叶所含有的化学成分、药理作用以及临床应用。银杏叶当中的部分成分在心脑血管疾病中的应用疗效确切，在保健产品与药品的生产方面应用前景广泛。银杏叶的化学成分极其复杂，其主要包括酚酸酯类、萜类内脂类以及黄酮类化合物等。我国2010年版的《中国药典》[2]，将银杏叶项下的异鼠李素、山柰素以及槲皮素三种黄酮成分视为指标成分，利用高效液相色谱法对其进行测定，能够使银杏叶的质量得到控制[3]。以前成分测定，均为单测法，费时、费力、成本换算较高。为此，我们采用一测多评法测定银杏叶中3种黄酮的含量。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料试药与仪器：选取LC-20AHPLC岛津系统，同时选取Agilent 1200系列的高效液相色谱系统；槲皮素对照品（批号为200406）、山柰素对照品（批号200808）、异鼠李素（批号200608），均购于中国食品药品检定研究所；色谱纯：纯净水、磷酸与甲醇；分析纯：三氯甲烷、盐酸、甲醇等。本次银杏叶样品总计为八个产地，分别是山东菏泽、山东潍坊、广西桂林、四川成都、辽宁丹东、安徽亳州、辽宁锦州以及山东郯城。通过鉴定，银杏叶样品均为银杏科植物银杏干燥叶，满足测定要求。

1.2 方法（1）色谱的条件。选取SHIMADZU VPODS类型的分析柱，即5 um×250 mm×4.6 mm；0.4%甲醇磷酸溶液为流动相，其体积的流量为每分钟1.0 ml；温柱在36℃；同时检测波长在360纳米；在上述指标的条件之下，各个待检测的成分其分离度均较好。（2）制备对照品溶液：通过精密称取适量的异鼠李素、山柰素以及槲皮素对照品，加用甲醇进而制成每1 ml中含42.3100 μg异鼠李素、57.1660 μg山柰素以及59.3433 μg槲皮素混合溶液。（3）制备供试品溶液：选取约1 g的银杏叶中粉，称定精密后，放置在索氏提取器当中，依照2010年版的《中国药典》银杏叶总黄酮醇苷的含量给予项下测定处理，加入三氯甲烷进行加热回流并提取2 h，将三氯甲烷溶液去除，挥干药渣；加入甲醇进行加热回流并提取4 h，蒸干提取液，于残渣中加入25%甲醇盐酸溶液25 ml的混合溶液，实行加热回流30 min后放冷，将其转移到量瓶（50 ml）中，同时加入甲醇到刻度值，最后摇匀即可。

2 结果

2.1 精密度试验将对照品溶液取出，连续性进样六次，每次为10 μl，通过计算得出异鼠李素、山柰素以及槲皮素峰面积的RSD分别为0.59%、0.43%以及0.42%。

2.2 选取购于山东菏泽的银杏叶制备出来的供试品溶液，将其在室温中放置0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h以及24 h后进样，对异鼠李素、山柰素与槲皮素峰面积RSD计算得出其分别为1.3%、1.1%与1.2%。由此得出制备完善的供试品溶液在室温中放置1 d内稳定性较好。

2.3 供试品溶液制备选取购自山东潍坊的银杏叶六份，每一份的重量约为1 g，称定精密之后，对供试品溶液进行制备，其后依法进行测定，利用外标法对其异鼠李素、山柰素和槲皮素进行计算，依次得出其含量的RSD分别为1.4%、1.1%与0.9%。

2.4 加样回收试验选取购安徽亳州的银杏叶六份，每一份均约为0.5 g，称定精密，依照各个成分于药材中的不同含量分别给予适当的对照品加入，根据供试品溶液制备，依法进行测定，对各个对照品加样回收的几率进行计算。计算得出异鼠李素、山柰素以及槲皮素回收率平均为96.6%、98.2%以及99.5%，并且回收率间的RSD相应为1.4%、0.8%以及1.2%。

2.5 不同色谱柱与仪器对校正因子的影响选取加样回收率项下对照品溶液，各个均进样10 μl，将槲皮素视作内标，依次计算槲皮素对异鼠李素以及山柰素相对的校正因子，最后选取平均值，其计算结果。详见表1。

表1 不同色谱柱与仪器影响相对校正因子情况

2.6 样品的测定选取八批银杏叶供试品溶液制备，测定进样，依次给予一测多评法与外标法对银杏叶中异鼠李素、山柰素和槲皮素的含量进行计算，详见表2。由表2中数据可知，这两种计算方式得出的结果差异不显著。

表2 样品计算结果分析

3 讨论

一侧多评法，在很多化学成分的测定中，已得到广泛认可，以用于多种中药材的质量评价。如三七、人参等[4，5]。有人建立了银杏叶提取物中总黄酮醇苷测定的一侧多平法[6]。本次试验采取高效液相色谱法外标法对银杏叶中槲皮素和异鼠李素、山柰素间的相对校正因子进行了测定与计算，得出了异鼠李素与山柰素的含量，达到了一测多评的效果[7]。

耐用性考察，两种黄酮成分和其中内参槲皮素之间的相对校正因子重复性良好，从而验证了一测多评方法用于银杏叶的提取物中黄酮类成分测定的准确性。

实施外标测定法同样对银杏叶中异鼠李素以及山柰素的含量进行了测定，对比分析外标法测定的数值与相对校正因子的数值间差异性，对比结果得出异鼠李素与山柰素实施相对校正因子得出的含量和实行外标法测定的数值间比较，P＞0.05，无显著性差异。证明一测多评法于银杏叶中三种黄酮类成分定量的测定具有其可行性和适用性[8]。

[1]于姗姗,李敏,张秋红，等.一测多评法测定银杏叶中3种黄酮类成分的含量[J].中国执业药师,2016,(3)：30-33.

[2]陈厚柳.银杏叶提取和层析过程在线质量控制方法研究[D].杭州：浙江大学,2015.

[3]张强祖.中药材黄酮的大孔树脂吸附工艺研究及生产线设计[D].上海：华东理工大学,2013.

[4]陆兔林，石上海，蔡宝昌，等.基于一测多评的中药多成分定量研究进展[J].中草药,2012,43(12)：2525-2529.

[5]刘圆，龚建平，魏惠珍，等.一测多评法测定健脾丸中4种黄酮类成分[J].中成药,2015,37(5)：995-999.

[6]王丹,张晶，赵晓宏.一测多评法测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(7)：58-62.

[7]董玉娟.保健食品中黄酮类功效成分的LC-MS检测技术研究[D].广州：广州中医药大学,2015.

[8]杨艳模,缪建荣,林海.一测多评法测定银杏叶提取物中7种黄酮类成分含量[J].中国实验方剂学杂志,2014,18(8)：82-85.

More than a test evaluation method determine the content of three kinds of flavonoids in ginkgo biloba composition

Wang Weihua,An Yun
(Heze Medical College,Shandong Heze 274000)

ObjectiveThe main for more than a test evaluation method determine the content of three kinds of flavonoids in ginkgo biloba composition were analyzed.MethodsThe implementation of high performance liquid chromatography,Quercetin as internal material,To build and rat Li Su Nai element relative correction factor and the mountain, And a calculation is made to the corresponding content.Choose external standard method for Ye Zhongsan ginkgo flavonoid composition for the determination.Comparison and analysis the difference between measured values and calculated values.Designed to draw more than a test the feasibility and accuracy of the evaluation method.ResultsMore than a test evaluation method comparison between calculated value and the external standard method to determine value difference was not significant.More than a test evaluation method comparison between calculated value and the external standard method to determine value difference was not significant.ConclusionThe content of three kinds of flavonoids in ginkgo biloba ingredients more than a test evaluation method was used to determine the feasibility and applicability.

Ginkgo biloba;Flavonoids;Quantitative analysis of multi-components by single marker

R284

A

：1008-4118（2017）01-0012-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2017.01.004

2016-09-25