不孕不育患者解脲支原体、沙眼衣原体及淋病奈瑟氏菌感染状况调查

赵本书　牟玲

[摘要]目的：探讨解脲支原体、沙眼衣原体、淋病奈瑟氏菌感染与不孕不育的相关性。方法：选取2012年8月至2015年8月于我院诊治的不孕不育症患者800例纳入不孕不育组，另选取同期于我院健康体检或产检者800例纳入健康对照组。采用荧光定量PCR仪测定两组患者解脲支原体、沙眼衣原体及淋病奈瑟氏菌DNA。结果：与健康对照组相比，不孕不育组患者解脲支原体感染、沙眼衣原体感染、解脲、沙眼衣原体同时感染、淋病奈瑟氏菌感染率明显较高（P<0.05）。不孕不育组130对夫妻中丈夫和妻子的解脲支原体、沙眼支原体感染率分别为62.3%、59.2%、44.6%、39.2%，其夫妻间感染解脲支原体、沙眼支原体具有相关性（r=0.864，P<0.05；r=0.773，P<0.05）。结论：生殖道解脲支原体、沙眼衣原体、淋病奈瑟氏菌感染与不孕不育相关，有必要对不孕不育夫妻同时检测解脲支原体、沙眼衣原体、淋病奈瑟氏菌DNA。

[关键词]解脲支原体；沙眼衣原体；淋病奈瑟氏菌；不孕不育；相关性

解脲支原体、沙眼衣原体及淋病奈瑟氏菌通过性接触传播引起的泌尿生殖系统感染在临床上越来越常见。由于这些病原体对人类生殖健康有着重要的不良影响，因此感染者往往容易出现不孕不育症。随着分子生物学及分子诊断学的快速发展，泌尿生殖系统感染病原体的检测方法由传统的培养法、普通免疫法、PCR逐渐发展为实时荧光定量PCR法。实时荧光定量PCR法除了有高效、灵敏度高、特异性高等PCR特点及精确定量的光谱技术特点外，由于该技术全程检测反应均为全封闭，使PCR扩增产物污染的问题得到了根本的解决，因此还有污染小的特点，该技术的应用使泌尿生殖系统感染病原体DNA检测具有划时代的意义，使临床检测及基础研究的数据来源更加及时、可靠。本研究应用实时荧光定量PCR法测定不育不孕症患者解脲支原體、沙眼衣原体及淋病奈瑟氏菌DNA，探讨这些病原体感染予不孕不育的相关性。

1.资料及方法

1.1一般资料

选取2012年8月至2015年8月于我院诊治的不孕不育症患者，阶段整群抽样选取800例，纳入不孕不育组，纳入标准：（1）1年未采取任何避孕措施，性生活正常而没有成功妊娠；（2）所有患者自愿参加本研究并签署知情同意书。排除标准：（1）合并严重器官功能障碍；（2）有精神障碍或不配合检查者。年龄20-45岁，平均（28.9±3.5）岁，男425例，女375例；其中有130对为不孕不育夫妻。另选取同期于我院健康体检或产检者800例纳入健康对照组，年龄18～47岁，平均（29.3±3.8）岁，男452例，女348例。性别、年龄在不孕不育组与健康对照组间比较差异无统计学意义（P>0.05），具有良好的可比性。

1.2检测仪器与试剂盒

采用ABI-7500全自动荧光定量PCR仪及中山大学达安基因股份有限公司生产的试剂盒测定解脲支原体、沙眼衣原体及淋病奈瑟氏菌DNA（生产批号：S20150093）。

1.3取标本及处理

所有取标本操作均由妇产科及泌尿外科医生完成。（1）女性标本：先用干净棉签抹掉子宫颈外口分泌物，在用一次性女性专用无菌棉签在宫颈管内旋转3圈，取宫颈管内分泌物于配套管内。（2）男性标本：将一次性男性专用拭子伸入尿道内3cm后旋转几圈，停留半分钟后取出置于配套管内。标本取好后立即封闭并送检。标本处理及提取DNA过程由检测专业人员严格按照说明书进行：将棉拭子从生物安全柜中取出后置于EP管内，加入1.5mL无菌生理盐水充分混匀悬浮后去掉棉拭子，将EP管放入离心机内以12000r/min离心3min，去掉上清留取沉淀备用。

1.4扩增DNA及判定结果

将2uL标本DNA、阳性定量参考物及质控品DNA先后加入扩增管内，置于离心机以8000r/min离心5s后放进全自动荧光定量PCR仪进行扩增，每次检测均分为空白对照、阴性及阳性。PCR仪参数设定：93℃3min预变；93℃45s后进入55℃lmin持续10个循环当作荧光本底信号；93℃ 30s后进入55℃45s持续30个循环，在55℃时可收集荧光。用ct值代表扩增结果，为使标准曲线效果最佳，需根据阳性定量参考品结果进行分析并对基线及阈值进行调整，使线性相关系数r在0.97以上。结果判定：ct值在30及以上或增长曲线未表现为s型则代表标本DNA量比检测极限少，记录为阴性；反之则为阳性。

1.5统计学方法

将本组数据录入SPSS19.0进行分析，计数资料行x2检验，不孕不育组夫妻间感染解脲支原体、沙眼支原体则采用相关性分析，如P<0.05，则差异存统计学意义。

2.结果

2.1两组患者病原体感染率比较

与健康对照组相比，不孕不育组患者解脲支原体感染、沙眼衣原体感染、解脲、沙眼衣原体同时感染、淋病奈瑟氏菌感染率明显较高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2不孕不育组夫妻间感染解脲支原体的相关性分析

不孕不育组130对夫妻中丈夫和妻子的解脲支原体感染率分别为62.3%、59.2%，其夫妻间感染解脲支原体具有相关性（r=0.864，P<0.05）。见表2。

2.3不孕不育组夫妻间感染沙眼支原体的相关性分析

不孕不育组130对夫妻中丈夫和妻子的沙眼支原体感染率分别为44.6%、39.2%，其夫妻间感染沙眼支原体具有相关性（r=0.773，P<0.05）。见表3。

3.讨论

随着人们社交频繁及性意识的改变，由于不洁性行为引起的泌尿生殖系统感染发生率也随着上升。且人们普遍缺乏性卫生知识，自我保护意思不强，使泌尿生殖系统感染进一步增加，因此对人类生殖健康带来严重的威胁。Ruiying等调查发现，全世界约有8%-10%的育龄夫妻患不孕不育症，其中20%～60%的不孕不育病因为泌尿生殖系统感染，而导致生殖系统炎症的重要病原体为解脲支原体、沙眼衣原体、淋病奈瑟氏菌。

解脲支原体主要的传播方式是性传播，其主要是通过粘附在泌尿生殖道表皮细胞表层来对细胞产生损伤，从而导致输卵管炎、子宫内膜炎、宫颈炎等，因此患者常常有外阴瘙痒等症状。近年来解脲支原体感染与不孕不育症的相关性逐渐成为研究热点。本研究结果显示，与健康对照组相比，不孕不育组患者解脲支原体感染率明显较高（P<0.05）。解脲支原体感染引起不孕的机制主要为引起子宫内膜及输卵管的慢性炎症。除此之外，感染诱发的自身免疫反应可能与不孕有关。解脲支原体可以同时粘附在巨噬细胞和精子表面，对精子运动产生阻挡，且其还能分泌神经氨酸酶样物质对精子和卵细胞的结合产生干扰，使不孕的可能性增大。

作为革兰阴性病原体，沙眼衣原体有两种发育形式，即始体和原体，其中感染力较强的原体，其侵入的靶细胞主要是柱状上皮细胞，因此常常累及宫颈。沙眼衣原体感染机体后主要在宫颈、尿道及精液中存活，通过性接触、直接体液接触等方式来传播。沙眼衣原体引起的泌尿生殖系统感染在欧美国家已超过了淋病奈瑟氏菌，在性传播疾病病原体中排第一位，我国虽然还是淋病奈瑟氏菌作为性传播疾病首位致病菌，但沙眼衣原体感染率也逐年上升。本研究结果显示，与健康对照组相比，不孕不育组患者沙眼衣原体感染率明显较高（P<0.05），与锁丙荣等研究结果相符。其机制可能為沙眼衣原体感染可引起生殖道炎症及粘连，严重时闭塞，同时可引起生殖道黏膜细胞坏死，从而使机体免疫系统与精子直接相接触，通过分泌精子抗体来杀死精子而导致不孕。同时，沙眼衣原体感染可降低宫颈黏液的葡萄糖含量，使进入宫颈的精子活力下降而影响受精过程。沙眼衣原体侵占男性附睾及前列腺可改变精液的生理功能而导致不育。本研究结果显示，不孕不育夫妻间感染解脲支原体、沙眼支原体具有相关性（r=0.864，P<0.05；r=0.773，P<0.05）。因此，不孕不育症夫妻双方有一方感染解脲支原体或沙眼支原体都应常规让配偶同时检测。

作为革兰染色阴性双球菌，淋病奈瑟氏菌是引起不育的重要病原体。其主要是通过单个植入的方式粘附在精子细胞膜表面，使细胞膜的结构受到破坏，进而入侵到精子细胞质和细胞核内，使精子内部结构受到破坏，对精子密度、活力产生严重不良影响，甚至导致精子死亡而出现少精症、无精症。朱海燕等研究发现，其也可通过侵犯输卵管引起炎症、粘连和阻塞，使输卵管上皮细胞分泌功能和纤毛摆动功能受损，而影响受精过程。

综上所述，生殖道解脲支原体、沙眼衣原体、淋病奈瑟氏菌感染与不孕不育相关，有必要对不孕不育夫妻，特别是原因不明的不孕不育，同时检测解脲支原体、沙眼衣原体、淋病奈瑟氏菌DNA。