HPLC法测定双乌镇痛胶囊中青藤碱的含量＊

王希东，李文俊，郝少君，范莉莉，张正臣

HPLC法测定双乌镇痛胶囊中青藤碱的含量＊

王希东，李文俊，郝少君，范莉莉，张正臣＊

HPLC法；双乌镇痛胶囊；青藤碱；含量测定

双乌镇痛胶囊系陕西神珠医药科技制品有限公司根据陈崇尚的发明专利与371医院合作开发研制。该药是由制川乌、制草乌、青风藤、木瓜、独活、党参、当归、红花组成，具有散寒除湿，祛风止痛，活血通络之功能，用于因风寒湿引起的头寒头痛诸证，尤其适用于偏头痛、三叉神经痛及肢体、肌肉、关节疼痛见上述征候者。方中青风藤中含有有效成分青藤碱，为更好的控制药品的质量，有关测定青藤碱含量的文献很多，但是测定双乌镇痛胶囊中青藤碱含量尚未见报道。本文以HPLC法测定双乌镇痛胶囊中的青藤碱的含量，操作方法简便，结果准确可靠，可用于双乌镇痛胶囊的质量控制。

1 仪器与试药

仪器：岛津LC-2010A型高效液相色谱仪，UVVIS紫外-可见检测器，CLASS-VP色谱工作站。试剂：甲醇为色谱试剂，水为纯净水；其他试剂均为分析纯。药品：青藤碱对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：774-9402，供含量测定用），双乌镇痛胶囊（由解放军371医院制剂室提供，批号：20120304）。

2 方法与结果

图1 青藤碱紫外全波长扫描图

图2 青藤碱对照品HPLC色谱图

图3 双乌镇痛胶囊样品HPLC色谱图

图4 双乌镇痛胶囊阴性样品HPLC色谱图

2.1 测定波长的选择取青藤碱对照品溶液在200～400 nm范围内进行紫外扫描，结果，青藤碱在262nm处有最大吸收，因此确定测定波长为262nm。见图1。

2.2 色谱条件和系统适用性试验色谱柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（40∶60∶0.2，用三乙胺调pH至9.0）；流速：1.0 ml/ min；检测波长：262 nm；柱温：25℃；进样量：10 μl，理论塔板数按青藤碱峰计算应不低于2500。见色谱图2、3、4。

2.3 线性范围、最小检出量精密称取青藤碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml含56 μg的溶液，即得。精密吸取对照品溶液5、10、15、20、25 μl，按“色谱条件”项下进行测定，同时用最小二乘法进行线性

取线性关系试验项下的1号溶液，精密量取2 ml，置10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10 μl，分别注入液相色谱仪，测定，色谱图中，信噪比＞10∶1，所以最小检出量＜0.056 μg/ml。

2.4 溶液的制备

2.4.1 对照品溶液的制备精密称取青藤碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml含56 μg的溶液，即得。

2.4.2 供试品溶液的制备取本品内容物约0.46 g，精密称定，置25 ml容量瓶中，加入甲醇约20 ml，密塞，超声处理（功率250 W，频率20 kHz）20 min，放冷，用甲醇定容至25 ml，摇匀，取上清液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.5 精密度试验精密吸取对照品溶液（56 μg/ ml）10 μl和供试品溶液10 μl，重复进样5次，记录峰面积。结果RSD为0.79%，表明在此试验条件下精密度良好，结果见表1。

表1 精密度试验结果

2.6 重现性试验精密称取供试品（批号：20120304）5份，按正文含量测定方法，制备供试品溶液，按含量测定项下的方法进行试验，测定峰面积，计算得供试品中青藤碱含量的平均值为0.7224 mg/粒，RSD为1.22%，结果见表2。

表2 重现性试验结果

2.7 稳定性试验按拟定的含量测定方法，吸取供试品（批号：20120304）溶液和对照品溶液10 μl进样，分别于0、2、4、6、8 h进行测定，测定峰面积，结果见表3。青藤碱峰面积的RSD为1.09%，结果表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.8 回收率试验取已知含量的样品（批号：050316）6份，约0.23 g，精密称定，分别加入浓度为0.56 mg/ml对照品储备液1.2、1.2、1.5、1.5、1.8、 1.8 ml，照“供试品溶液制备”项下操作，测定，青藤碱的平均回收率为99.37%，RSD为1.43%。回收率计算方法：回收率（%）=［（测得总量-样品中量）/加入对照品量］×100%。结果见表4。

表3 稳定性试验结果

表4 回收率试验结果

2.9 样品测定结果按拟定的含量测定方法，对3批样品中的青藤碱进行测定，计算样品含量，由结果可知，此含量测定方法可运用于双乌镇痛胶囊的含量测定。结果见表5。

表5 样品测定结果

2.10 不同超声处理时间的比较精密称取同一批号样品（批号：20120304）4份，每份约0.46 g，精密称定，置25 ml容量瓶中，加甲醇20 ml，超声处理不同时间，放冷后，甲醇定容，摇匀，静置，取适量上清液离心，转速为12000转/min。取上清液，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，精密量取续滤液10 μl进样，测定其含量。由结果可以看出，超声处理20 min，含量不再增加，为了保证提取完全故确定超声处理时间为20 min。结果见表6。

表6 不同超声处理时间的比较

3 讨论

本方中含有制川乌，制草乌，其主要有效成分为生物碱类，包括乌头碱等双酯型乌头碱、苯甲酰单酯型生物碱、氨基醇类生物碱，其中后两类为双酯型乌头碱的水解产物，据有关文献报道，以上生物碱类均具有显著的抗炎、镇痛作用，但亦有较强的毒性，以双酯型乌头碱的毒性最强，为苯甲酰单酯型生物碱毒性的50～500倍，氨基醇类生物碱毒性的1000～4000倍，故质量控制标准中设立了乌头碱限量检查项，以保证临床用药安全有效。

急性毒性试验结果表明，双乌镇痛胶囊对小白鼠的最大耐受量为20 g/kg（116 g生药/kg），按体重剂量计算相当于临床日剂量的666倍；按体表面积剂量计算，相当于临床日剂量的55.5倍。表明双乌镇痛胶囊无明显急性毒性。

此实验建立了HPLC法测定双乌镇痛胶囊中青藤碱的含量，处理方法简单，测定结果准确可靠，重复性好，不受其他成分干扰，可用于双乌镇痛胶囊的质量控制。

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［2016－08－23收稿，2016－09－20修回］［本文编辑：刘一洋］

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河南新乡市重点科技攻关计划项目（ZG14013）

453000河南新乡，解放军371医院（王希东，李文俊，郝少君，范莉莉，张正臣）

张正臣，Email：xxzzc2010@126.com回归，得标准曲线回归方程，回归方程为Y= 781149X-110771，相关系数R=0.9999，结果表明，青藤碱浓度在0.28～1.4 μg/ml范围内，峰面积与浓度线性关系良好。

10.14172/j.issn1671-4008.2017.03.023