UHPLC法测定蒙药扎冲十三味丸中木香烃內酯和去氢木香內酯的含量

李 伟 吴秀清 袁文洪 高宇明*. 四川省威远县人民医院，四川 威远 64450；. 四川省资阳市食品药品检验检测中心，四川 资阳 64300



UHPLC法测定蒙药扎冲十三味丸中木香烃內酯和去氢木香內酯的含量

李 伟1吴秀清2袁文洪2高宇明2*
1. 四川省威远县人民医院，四川 威远 642450；2. 四川省资阳市食品药品检验检测中心，四川 资阳 641300

目的：建立超高效液相色谱(UHPLC)法同时测定扎冲十三味丸中木香烃內酯和去氢木香內酯含量的方法。方法：取本品研细过筛后用甲醇超声提取，采用色谱柱ThermoSyncromis C18(100mm×3mm,1.7μm)；流动相为甲醇-水(85∶15)；检测波长225nm；进样体积1μL；柱温室温。结果：木香烃內酯和去氢木香內酯分别在17.860～142.877μg(r=0.9991)、15.553～124.426μg(r=0.9995)范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率(n=6)分别为101.04%、101.29%，RSD分别为2.01%、1.85%。结论：该方法简便快捷，重复性好，可用于扎冲十三味丸的质量控制。

扎冲十三味丸；木香烃內酯；去氢木香內酯；UHPLC

扎冲十三味丸为传统蒙药，主要由诃子、木香、石菖蒲、制草乌等13味药物组成，具有祛风通窍、舒筋活血、镇静安神的功效，临床用于半身不遂、左瘫右痪、口眼歪斜、四肢麻木、腰腿不利、言语不清、筋骨疼痛、神经麻痹、风湿、关节疼痛等。原标准收载于卫生部药品标准蒙药分册[1]，规定了显微鉴别、化学鉴别、薄层鉴别。木香为扎冲十三味丸主要组成之一，其主要活性成分为木香烃內酯和去氢木香內酯，具有较强的抗炎、抗肿瘤和抗溃疡作用[2]，且2015年版《中国药典》中收载有木香中木香烃內酯和去氢木香內酯的含量测定项目[3]。本研究建立了UHPLC测定木香烃內酯和去氢木香內酯含量的方法，比原标准更快速更简洁，保证了药品的质量。

1 仪器与材料

1.1 仪器 THERMO Ultimate 3000 UHPLC(含VWD检测器)，ThermoSyncromis C18(100mm×3mm，1.7μm)色谱柱，Mettler Toledo MS205DU 电子天平，KQ-100E型超声波清洗器。

1.2 材料 木香烃內酯(批号：111524-201509，纯度99.0%)、去氢木香內酯(批号：111525-201510，纯度99.7%)对照品购自中国食品药品检定研究院，扎冲十三味丸(内蒙古库伦蒙药厂，批号分别为14028087、160321202、160231043)。甲醇(色谱纯，Fisher公司)，水为注射用水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Thermo Syncromis C18(100mm×3mm，1.7μm)；流动相：甲醇-水(85:15)；流速：0.2mL/min；检测波长：225nm；柱温室温；进样量1μL。在该条件下，木香烃內酯与去氢木香內酯分离度大于1.5(见图1)。

2.2 混合对照品溶液的制备 分别称取木香烃內酯、去氢木香內酯对照品18.04mg、15.60mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。

2.3 供试品溶液的制备 将本品磨碎，过三号筛，精密称取1.0g，置锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声(100W，40HZ)20min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用0.22μm微孔滤膜过滤，即得。

2.4 线性关系考察 分别精密吸取木香烃內酯、去氢木香內酯对照品储备溶液0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40、1.60mL置20mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.22μm微孔滤膜过滤，得到8个浓度梯度的混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标进行线性回归，计算回归方程和相关系数(见表1)。结果表明，2种成分在各自的浓度范围内与峰面积线性关系良好。

表1 木香烃內酯和去氢木香烃內酯的线性回归方程和相关系数

2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液1μL，在“2.1”项下色谱条件下重复进样6次，记录峰面积。结果，木香烃內酯和去氢木香烃內酯峰面积的RSD分别为0.3%和0.5%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号：140238 087)，在“2.1”项下色谱条件下，分别于0、2、4、8、12、24h进样，记录色谱峰面积。结果，木香烃內酯和去氢木香烃內酯峰面积的RSD分别为1.3%和1.1%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.7 重复性试验 精密称取同一批药品(批号：140238 087)，共6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，进样1μL，记录峰面积。结果，木香烃內酯和去氢木香烃內酯的平均含量为0.594、0.591mg/g，RSD分别为1.9%和1.6%，表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验 精密称取0.5g已知木香烃內酯和去氢木香烃內酯含量的样品6份(批号：140238 087)，分别精密加入相当于样品中两种成分含有量80%、100%、120%的混合对照品溶液适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件下进样分析，记录峰面积，计算回收率。结果见表2。

表2 加样回收率试验结果

2.9 含量测定 取扎冲十三味丸，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件下进样分析，计算样品中木香烃內酯和去氢木香內酯的含量，见表3。

表3 样品中木香烃內酯和去氢木香內酯含量测定结果

3 讨论

本研究在选择色谱条件时，参考了《中国药典》(2015年版)一部“木香”项下的含量测定方法。考察了不同的色谱柱和流动相比例，最终结果以Thermo Syncromis C18(100mm×3mm，1.7μm)色谱柱，流动相比例为甲醇∶水(85∶15)，流速0.2mL/min时分离效果好，分析时间短。韩国珍等[2]用HPLC方法测定扎冲十三味丸中的木香烃內酯和去氢木香烃內酯的含量，本研究采用的UHPLC方法分离效率更高，通过对色谱条件的优化，大大缩短了分析时间，使得可以在10min以内完成对扎冲十三味丸中木香烃內酯和去氢木香烃內酯的含量测定。该方法分析时间短、重复性好、结果准确，可适用于扎冲十三味丸的质量控制。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准蒙药分册[S].北京：中国医药科技出版社，1988：70.

[2]魏华，彭勇，马国需，等.木香有效成分及药理作用研究进展[J].中草药，2012，43(3)：613-620.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[4]韩国珍，温爱平.高效液相色谱法测定扎冲十三味丸中木香烃內酯和去氢木香烃內酯的含量[J].中国药物与临床，2007，7(10)：796-797.

李伟(1964-)，男，硕士，主管中药师，主治中医师，研究方向为药剂管理。

高宇明(1986-)，女，硕士，研究方向为食品药品分析检验。E-mail：174479333@qq.com

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2017-02-09 编辑：程鹏飞)