淫羊藿苷和淫羊藿多糖对气管切开插管大鼠肺部炎症的影响

邓淑蓉 潘宇政 彭玲玲 陈铭坚 董菲菲

广西医科大学第一临床附属医院 广西壮族自治区南宁市 530021

淫羊藿苷和淫羊藿多糖对气管切开插管大鼠肺部炎症的影响

邓淑蓉 潘宇政 彭玲玲 陈铭坚 董菲菲

广西医科大学第一临床附属医院 广西壮族自治区南宁市 530021

目的：观察淫羊藿两种主要有效成分：淫羊藿苷（ICA）和淫羊藿多糖（EPS）对气管切开插管大鼠肺部炎症的不同作用。方法：将SPF级健康雄性SD大鼠随机分成正常组（A组）、气管切开插管模型组（B组）、淫羊藿苷用药组（C组）、淫羊藿多糖用药组（D组），制作气管切开插管模型，造模成功6h后，C组开始给予淫羊藿苷灌胃，D组给予淫羊藿多糖灌胃，A、B两组以等量生理盐水，每日一次。分别在1d、3d、7d三个时间段每组分别处死6只大鼠，观察各组肺组织病理学变化，并用Simith评分测定肺损伤情况；采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6的浓度。结果：（1）光镜下B、C、D三组大鼠肺组织病理三个时段均有不同程度的炎症等改变，Smith评分均高于A组；但C、D两组病变在三个时段均明显小于B组。Smith评分显示C组病变明显小于D组。（2）支气管肺泡灌洗液中B、C、D三组TNF-α、IL-6含量变化趋势基本一致，在不同时间段均明显高于A组，24h时达到峰值，随后下降。两者在三组含量比较，B组最高，其次D组。结论：ICA 和EPS均能起到抗炎作用，而ICA明显优于EPS。

气管切开插管留置；淫羊藿苷；淫羊藿多糖；炎症

临床上气管切开插管患者容易并发肺部感染，目前临床上多使用抗感染治疗，患者经常容易耐药或者治疗效果欠佳，且经济负担重。传统补益中药淫羊藿，具有补肾壮阳、祛风除湿等功效，在临床上经常用于治疗支气管哮喘和慢性支气管炎等肺部疾病[1,2]。中药成分复杂,一味药中不同有效组分或单体具有不同的作用。ICA和EPS是淫羊藿的主要有效成分，因此，本实验通过动态观察肺组织病理学改变以及支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6水平的变化，评估淫羊藿两种不同成分的抗炎作用。

1 材料和方法

1.1 实验动物及给药

SD雄性大鼠,体重150±30g(广西医科大学实验动物中心提供,合格证号∶SCΧK (桂)2014-0002），随机分成A、 B、C、D四组，A组为正常对照组，B组为气管切开插管留置模型非用药组, C组为气管切开插管留置模型淫羊藿苷用药组，D组为气管切开插管留置模型淫羊藿多糖用药组，每组18只大鼠。饲养环境温度为25±2℃，自由进水，普通饲料喂养。动物模型制作成功后6h进行给药干预。根据人临床用药剂量估算实验动物用药[3]， C组给淫羊藿苷灌胃（60mg/kg），D组给淫羊藿多糖灌胃（12mg/kg），A、B组予等量生理盐水灌胃,每日1次。

1.2 实验药物

淫羊藿苷标准品（CAS号：489-32-7，货号：B21576）， HPLC≥98%；淫羊藿多糖(批号：C22A6Y2480)，纯度为50%，均购于上海源叶生物科技有限公司。

图1：光镜下大鼠肺组织病理学改变（HE染色，20X）

1.3 主要试剂

肿瘤坏死因子ELISA试剂盒（TNF-α：CSB-E11987r）浓度及白介素-6ELISA试剂盒（IL-6：CSB-E04640r）均购自于成都华美生物医药有限公司。

1.4 模型制备与取材

采用一次性硬膜外麻醉导管制作气管切开插管留置大鼠模型[4]。在1d、3d、7d三个时段每组分别处死6只大鼠。结扎右主支气管，用4℃预冷的灭菌生理盐水3ml反复灌洗肺部3次，共回收肺泡灌洗液6ml, 4℃1500rpm离心10分钟，取上清分装于-80℃保存待检TNF-α及IL-6；无菌分离右肺用4%多聚甲醛固定液固定，行石蜡包埋、切片待行光镜观察肺组织变化。

1.5 观察指标与检测

1.5.1 肺组织病理学观察

取肺组织病理切片作苏木精-伊红染色（HE染色），用显微镜观察制好的切片中肺组织的病理学改变，采用Smith评分方法[5]评估肺部病变程度。

1.5.2 TNF-α及IL -6浓度测定

均采用双抗体夹心ELISA法，按试剂盒说明进行检测。使用Curve Exert1.4软件制作标准曲线并计算出样本的实际浓度值。

1.6 统计学方法

采用SPSS 16. 0软件进行统计分析，计量资料做方差齐性检验，方差齐，组间均数比较釆用单因素方差分析(OnewayANOVA)，两两之间比较采用LSD检验；检验结果以（±s）表示。显著性水准取P＜0.05表示有统计学差异。

2 结果

2.1 肺组织病理学改变

结果见图1、表1。B组光镜下可见肺间质及肺泡内出血，炎症细胞浸润，肺泡间隔增宽，并随着时间的增加而加重。C、D两组，光镜下肺泡内少量出血，炎症细胞少量浸润，肺泡壁稍增宽。Smith评分结果显示，其他三组Smith评分在三个时间段均高于A组；两组用药组在第1d时与B组无明显差异，在3d、7d时两个时段明显低于B组；C组与D组同时段比较，1d时无明显差异，3d、7d时D组评分明显高于C组（P＜0.05）。

2.2 支气管肺泡灌洗液中TNF-α的含量变化

结果见表2。B、C、D三组TNF-α水平与A组在三个时段均比较高（P＜0.05）；C、D两组TNF-α水平三个时段均比B组低（P＜0.05）；C组TNF-α水平三个时段均比D组低。C、D两组组内同时段比较均随着时间的延长而明显下降。

2.3 支气管肺泡灌洗液中IL-6的含量变化

结果见表3。B、C、D三组IL-6含量与A组相比在三个时段均比较高（P＜0.05）；C、D两组IL-6含量三个时段均比B组低（P＜0.05）；C组IL-6含量三个时段均比D组低（P＜0.05）； C、D两组组内同时段比较均随着时间的延长而下降。

表1：Smith评分（±s）

表1：Smith评分（±s）

注：1.不同组相同时段比较：与A组比较*P＜0.05；与B组比较#＜0.05；与C组比较◆＜0.05。2.同组内不同时段比较：与1d比较◇P＜0.05；与3d比较△P＜0.05。

D 6

表2：各组支气管肺泡灌洗液中TNF-α含量的变化（±s，pg/ml）

表2：各组支气管肺泡灌洗液中TNF-α含量的变化（±s，pg/ml）

注：1.不同组相同时段比较：与A组比较*P＜0.05；与B组比较#＜0.05；与C组比较◆＜0.05。2.同组内不同时段比较：与1d比较◇P＜0.05；与3d比较△P＜0.05。

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表3：各组支气管肺泡灌洗液中IL-6含量的变化（±s，pg/ml）

表3：各组支气管肺泡灌洗液中IL-6含量的变化（±s，pg/ml）

注：1.不同组相同时段比较：与A组比较*P＜0.05；与B组比较#＜0.05；与C组比较◆＜0.05。2.同组内不同时段比较：与1d比较◇P＜0.05；与3d比较△P＜0.05。

组别n1d3d7d A 6 9.51±1.319.33±3.029.30±2.16 B 6 290.31±12.45*23.72±10.24*41.52±6.63*103.95±31.64*#23.77±21.41*#17.02±15.06*#D 6 154.57±57.34*#◆35.28±10.92*#29.17±17.58*#◆C 6

3 讨论

临床报道显示[6]，气管切开患者肺部感染发生率较高，气切后气道开放，病原菌侵入机体，侵入机体的病原菌可释放毒素，引起巨噬细胞等释放促炎及抑炎因子，如IL-6、TNF-α等，在严重时促炎因子引起机体组织细胞组织自我损伤，甚至出现全身炎症反应。本实验结果气切大鼠TNF-α及IL-6明显升高，与上述临床报道相符[6]。

本实验通过为时1周的动态观察肺组织病理改变及支气管肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6含量变化，结果显示ICA组和EPS组大鼠肺部炎症均有明显改善。有研究表明ICA可能作用于脂多糖炎症模型鼠PI3K/Akt 信号通路，抑制NF-kB 活化，减轻外周血中TNF-α、IL-6含量等，减轻急性肺部炎症[7]。本实验发现ICA和EPS两者均可作用于气管切开并发肺部感染模型鼠，降低支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6含量，并随着用药时间的延长作用更明显。提示ICA和EPS均可减轻气管切开后并发的肺部感染，ICA效果较佳。

中医学认为，肺主宣发，卫气达而外邪不入，气切后则“金破不鸣”，即利器损伤后肺气损伤难以发音。肺主行气，肾主纳气，肺肾阴虚则肺燥而郁热，阴液不能上承，失于濡润。《景岳全书•杂证谟》卷二十八记载：“声由气而发，肺病则气夺，此气为声音之户也。肾藏精，精化气，阴虚则无气，此肾为声音之根也。”因此治宜补益肺肾。淫羊藿乃补肾之要药，肾气得以充盈，助肺气宣发，因而可以减轻气切大鼠肺部炎症。

（通讯作者：潘宇政）

[1]李炼,代建中.淫羊藿善治久咳虚喘[J].中医杂志,2000(01):12.

[2]金华良,王利民,罗清莉,厉蓓,杜懿杰,吕玉宝,董竞成.淫羊藿对哮喘大鼠气道高反应性的影响[J].中国实验方剂学杂志,2014(23):169-173.

[3]朱翠香,彭玲玲,潘宇政等.一次性硬膜外麻醉导管气管切开插管留置大鼠模型建立[J].中华实验外科杂志,2015,10(32):2480.

[4]徐叔云主编.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2002:1647-1664

[5]Smith K M,Mrozek J D,Simonton S C,et al.Prolonged partial liquid ventilation using conventional and high-frequency ventilatory techniques:gas exchange and lung pathology in an animal model of respiratory distress syndrome[J]. Crit Care Med,1997,25(11):1888-1897.

[6]贵艳玲,蔡萍,程明琨,等.ICU气管切开患者肺部感染病原菌对血清细胞因子影响的研究[J].中华医院感染学杂志,2016(11):2494-2496.

[7]Xu C Q,Liu B J,Wu J F,et al.Icariin attenuates LPS-induced acute inflammatory responses: involvement of PI3K/Akt and NF-kappaB signaling pathway[J].Eur J Pharmacol,2010,642(1-3):146-153.

国家自然科学基金（NSFC.81460687）。

邓淑蓉（1989-），女，硕士研究生，广西医科大学第一临床医学院。

潘宇政(1961-)，男，硕士研究生导师，广西医科大学第一附属医院。