活禽批发市场内家禽停留时间与H9亚型禽流感病毒检出的关系

葛 杰，葛菲菲，刘 健，杨德全，李 鑫，鞠厚斌，周锦萍

（上海市动物疫病预防控制中心，上海 201103）

·研究论文·

活禽批发市场内家禽停留时间与H9亚型禽流感病毒检出的关系

葛 杰，葛菲菲，刘 健，杨德全，李 鑫，鞠厚斌，周锦萍

（上海市动物疫病预防控制中心，上海 201103）

为了解上海市活禽批发市场中家禽停留时间与H9亚型禽流感病毒检出之间的关系，连续4 d每隔24 h在2个批发市场各4个固定摊位共采集960份活禽咽喉/泄殖腔拭子样品。采用H9亚型荧光RT-PCR方法对样品进行检测，结果发现随着时间的推移，H9亚型禽流感病毒在同一个摊位和不同摊位间传播扩散，并且随着家禽在批发市场内停留时间的延续，H9亚型禽流感病毒的阳性检出率明显上升，72 h时最高达到24.58%，提示我们应加强活禽批发市场禽流感的监测和监管。

H9亚型禽流感病毒；活禽批发市场；家禽停留时间

H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）虽然是低致病性禽流感病毒，但由于其分布广泛并能引起家禽的免疫抑制，一旦与其他病原混合感染或造成继发感染，可引起禽类的高发病率和高死亡率[1]。同时H9N2 AIV除感染禽类外，还可以突破种间屏障感染人类[2,3]。研究显示，H9N2 AIV为1997年首次感染人的香港H5N1禽流感病毒和本次的H7N9流感病毒等提供了内部基因[4]，提示H9N2在禽流感遗传、演化过程中起了十分重要的作用。活禽市场一直被认为在禽流感病毒的存留、繁殖以及传播过程中扮演着十分重要的角色[5,6]。为了解上海市活禽市场中H9N2 AIV的繁殖情况，连续4 d每隔24 h在本市两大活禽批发市场采集样品进行荧光RTPCR检测，并对H9亚型AIV随着家禽停留时间的延长而发生的变化进行了系统分析。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 MagPure Viral RNA Kit for MagMax Express核酸提取试剂盒由美吉公司提供；H9亚型禽流感荧光RT- PCR试剂盒由深圳匹基生物技术有限公司提供。

1.2 采集样品分布情况 在上海市两家活禽批发市场各4个固定摊位每隔24 h采集活禽样品，连续4 d，期间这些活禽一直停留在其固定的摊位内没有出售，其中A批发市场摊位号为23、19、6、11，B批发市场摊位号为16、22、72、27。每个摊位每天采集30份咽喉/泄殖腔拭子样品，总计960份，其中鸽240份，鸡720份。

1.3 检测方法 对棉拭样品用H9亚型禽流感荧光RTPCR试剂盒进行检测。

2 结果

2.1 荧光RT-PCR检测结果 2个活禽批发市场各摊位样品H9 AIV检测结果详见表1。共检测出H9亚型禽流感病毒核酸阳性131份，平均阳性率13.65%，其中A批发市场30份，阳性率6.25%，B批发市场101份，阳性率21.04%。

表1 活禽批发市场内不同摊位家禽不同停留时间H9亚型禽流感病毒检出结果Table 1 Virus detection results from different stalls over the residence time in live poultry wholesale markets

续表1

2个活禽批发市场不同时间H9 AIV 检测结果见表2。24 h时H9亚型禽流感的检出率就达到了10%，72 h和96 h的H9亚型禽流感的检出率明显高于24 h，最高时达24.48%。批发市场内家禽停留时间与H9 AIV检出率的关系见图1。

表2 批发市场内家禽不同停留时间时H9 AIV检出情况Table 2 H9 AIV detection results at different residence time in live poultry wholesale markets

图1 批发市场内家禽停留时间与H9 AIV检出率的关系Fig.1 The relationship between the residence time and the number of H9 AIV positive samples in live poultry wholesale markets

3 讨论

8个摊位中有6个摊位在24、48 h均无病毒检出，但72、96 h时有病毒检出，有1个摊位24 h检测到3份样品有病毒感染，96 h则30份样品全部呈阳性。结果表明，随着家禽在批发市场停留时间的推移，禽流感病毒不仅在同一个摊位中传播迅速，也在不同摊位间交叉传播，从24 h平均阳性率10%到72 h最高时达到24.58%。同时我们也发现，A批发市场摊位19和摊位6都是在72 h时检测到H9亚型禽流感阳性样本，但随后在96 h却检测不到了。推测有几种原因，比如采样的规范性或者鸡群随着时间的推移逐渐适应环境等，导致排毒降低，直到消失。

一般禽鸟类带病毒率极低[7,8]，但本次检测结果显示活禽交易市场H9亚型禽流感污染率高，不同批次禽鸟持续叠加会增加禽流感污染的风险。批发市场内较封闭的环境和较多的灰尘和气溶胶、不同来源和不同地区禽群在批发市场内的汇集、家禽之间拥挤的空间和家禽的应激反应等，增加了病毒在这些家禽中的水平传播和增殖扩散，提示H9N2亚型AIV在我国传统的活禽市场体系中，存在一个显著的扩散和增殖的过程，这可能是该病毒在我国持续高强度流行的一个重要原因。另一方面高阳性率的H9亚型禽流感病毒的存在，为H5N1禽流感病毒的变异和H7N9新流感病毒的形成提供丰富的内部基因[9,10]，从而更突显出活禽批发市场在禽流感防控和公共卫生中的作用。

因此，加强活禽市场的卫生管理，实行活禽不过夜、定期休市消毒等措施，可阻断或减少病毒在活禽市场的循环传播和增殖。条件成熟时可以采取取缔活禽市场，或用电子活禽市场（如家禽饲养者和零售者直接通过互联网进行客户到客户的交易，从而避开传统的活禽批发市场这个中介环节）取代传统的活禽市场，从而防控该病毒的扩散蔓延和变异重组。

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CORRELATION BETWEEN RESIDENCE TIME AND INFECTION OF H9 SUBTYPE AVIAN INFLUENZA VIRUS AT LIVE POULTRY WHOLESALE MARKETS

GE Jie, GE Fei-fei, LIU Jian, YANG De-quan, LI Xin, JU Hou-bin, ZHOU Jin-ping

(Shanghai Animal Disease Control Center, Shanghai 201103, China)

In order to investigate correlation between residence time and detection of H9 subtype Avian Infl uenza virus at live poultry wholesale markets, oropharyngeal and cloaca samples were taken every day for 4 days from four fi xed stalls of two markets in Shanghai. A total of 960 samples were collected and tested using H9 subtype real-time RT-PCR kit. The results showed that H9 subtype Avian Infl uenza virus spread rapidly within and between booths and stalls over the residence time. The H9 positive rate was 10% within one-day residence and increased to 24.58% on the third day. These results indicated strict surveillance and supervision of avian infl uenza was very necessary at live poultry wholesale markets.

H9 subtype Avian Infl uenza virus; live poultry wholesale market; residence time

S852165

A

1674-6422（2017）01-0032-04

2016-02-17

沪农科攻字（ 2015 ）第 1-11 号

葛杰，女，主要从事动物疫病防控工作

周锦萍，E-mail:shzjpvet @163.com