兔耳痤疮角质化模型试验

卢旭，许光辉，黄亦琦*

（1.福建中医药大学 ，福建 福州 360122；2.厦门市医药研究所，福建 厦门 361008）

兔耳痤疮角质化模型试验

卢旭1,2，许光辉2，黄亦琦2*

（1.福建中医药大学 ，福建 福州 360122；2.厦门市医药研究所，福建 厦门 361008）

目的采用煤焦油复制兔耳痤疮模型。方法随机将9只雄性家兔随机分为A组、B组、C组。A组耳导管开口处约2cm×2cm范围涂生理盐水，B、C组涂煤焦油，连续涂14 d后，判断模型是否成功。结果A组兔耳薄白，B组、C组的兔耳表面粗糙、增厚，肉眼观察到不同大小红斑，局部有小颗粒隆起，毛孔增大，有黑色物质堵塞毛孔。组织切片观察：A组皮肤组织结构完整，B、C组皮肤组织肥厚、角质化，皮肤组织结构改变。结论煤焦油用玉米油稀释制备耳痤疮角质化模型的方法有效。

痤疮；动物模型；煤焦油；兔耳

痤疮是好发于毛囊皮脂腺的慢性炎症性疾病，皮脂分泌过多，堵塞毛孔，促进痤疮杆菌、金黄葡萄球菌生长，侵害皮肤组织，导致毛囊口角化过度，是本病发病的重要基础和机制，炎症、感染是痤疮的发病因素[1]，自然愈合时间长，严重影响患者的生活质量，身心健康。本试验旨在制备模拟临床症状的痤疮角质化模型，为后期实验研究提供基础。

1 材料与方法

1.1 动 物

新西兰家兔，普通级，1.8～2.2 kg，雄性，上海斯莱克实验动物有限责任公司，生产许可证号:SCXK(沪)2012-0002。

1.2 仪器

电子天平ME1002(瑞士梅特勒·托利多公司)；组织脱水机TP1020、显微镜DM500、石蜡切片机RM2235、包埋机EG1150H(德国Leica公司)。

1.3 试 剂

煤焦油（Alfa Aesar（China）公司）；玉米油（中国益海嘉里营销有限公司）；余试剂为分析纯。

2 方 法

2.1 实验分组及造模

随机将9只雄性家兔随机分为A组、B组、C组各3只，并编号。A组涂生理盐水（对照组），B组涂2%煤焦油，C组涂4%煤焦油，用无菌棉签均匀涂于家兔耳内侧面耳导管开口处约2 cm×2 cm 范围，每天1次，每次0.5 mL，并且用温水擦拭前次涂药部位，连续涂14 d，末次涂12 h后，观察，处死，取材，制作病理切片[2]。

2.2 造模结果评价

表1 煤焦油对兔耳的干预效果（n=6）

图1 煤焦油对兔耳模型的干预结果

图2 煤焦油对兔耳皮肤组织影响的病理观察

使用5 mm打孔器在涂药部位打孔制备耳片，10%甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色后，每个样品做连续5个切片，取较完整皮肤结构的切片进行病理组织学观察分析。

痤疮模型组织学判定分级标准[3]：按组织学级别为3 级。0级为无痤疮表现（-）；1级为兔耳表面皮肤发红，或毛囊漏斗部见少量致密角化物质(+)；2级为毛囊漏斗部见中等致密角化物质，并向皮脂腺延伸(++)；3级为毛囊内有广泛的角化物质、皮肤凸起、瘢痕(+++)。进行试验结果评价（表1），B、C组均与A组对照，以观察痤疮模型是否复制成功。

3 结 果

涂煤焦油14 d后，A组兔耳柔软、薄白，毛细血管清晰，兔耳管开口处可见毛孔大小均匀，皮肤组织完整。B组、C组的皮肤表面粗糙、增厚，肉眼观察到不同大小红斑，小颗粒隆起，毛孔增大，不同程度角质化，局部有黑色物质堵塞毛孔（图1）。组织切片观察：不同程度的颗粒层、棘层肥厚，毛囊口角质化，皮肤组织结构被破坏（图2）。结果提示兔耳痤疮角质化模型复制成功，煤焦油用玉米油稀释制备耳痤疮角质化模型的方法有效。

4 讨 论

雄激素刺激皮脂腺细胞的增生与分泌，雄激素中的睾酮在酶的作用下，与相应受体结合，调控毛囊皮脂腺的活动，使皮脂腺异常角化[4]。皮肤角质化，皮脂分泌过多导致皮脂腺功能异常，局部代谢障碍，细菌滞留、繁殖，产生炎症。无论是痤疮毛囊皮脂腺角质形成细胞的过度增生，还是炎性皮损处，皮肤免疫系统都参与[5]。Jugean 等[6]认为痤疮丙酸杆菌可诱导TLR表达，此机制在痤疮炎症反应中可能起到重要作用。昝文华等[7]发现，痤疮皮损处检出痤疮丙酸杆菌，多伴金黄色葡萄球菌。高峰等[8]认为痤疮是在一定的皮肤环境内多种细菌相互作用的结果。随着痤疮实验研究的深入，该模型的制备也将接近于人类痤疮发生、发展规律。痤疮的发病机制、治疗手段、药物开发等方面一直是科研工作热点，但可提供痤疮研究的动物模型少，痤疮模型制备方法也不断改进。用金黄地鼠的色斑来证实抗雄激素作用；用痤疮丙酸杆菌液、表皮葡球菌在兔耳、大鼠进行皮下注射，可使动物耳部注射处变厚，但痤疮丙酸杆菌为厌氧菌，在皮肤组织中存活时间尚未明确；墨西哥狗自发性痤疮是当前最接近临床的实验动物模型，但该模型周期长、成本高，故不利于广泛开展相关研究。目前最常用的是Kligman模型，该模型的使用已超过半个世纪，1989年美国皮肤病学会已制定了使用规范[9]。

试验结果证实煤焦油易附着于皮肤，该方法来制备兔耳痤疮角质化模型有效，时间较短，模型成功率高、经济，也可用于溶解皮肤角质化相关课题研究。但痤疮的病机涉及内分泌、菌群感染、饮食习惯、心理素质等方面，都影响痤疮的发生、发展。该模型仅能模拟痤疮角质化的皮肤组织学改变：兔耳表皮粗糙、角质化，颗粒层和组织层增厚，毛囊破损，皮肤结构边缘模糊，但模型的形成时间上有个体差异性，需进一步实验探索。

[1]芦源, 田静, 张慧颖, 等. 消疮饮对兔耳微痤疮模型抑制作用及急性毒性实验研究[J].辽宁中医药大学学报, 2014 (01): 28-29.

[2]鲁瑾, 曹煜. 姜黄消痤凝胶对兔耳粉刺模型的抗角化作用[J]. 中国皮肤性病学杂志, 2011 (03): 192-195.

[3]赵鸿儒, 赵大华. 中药消痤霜对兔耳痤疮实验模型的干预效果[J]. 中国临床康复, 2006 (07): 108-109.

[4]张学军. 皮肤性病学[M]. 5版. 北京:人民卫生出版社, 2002: 144-145.

[5]Kin J. Review of the innate immune response in acne vulgaris: activation of toll-like receptor 2 in acne triggers inflammatory cytokine responses[J]. Dermatology, 2005, 211(3): 193-198.

[6]Jugean S, Teanud I, Knol AC, et al. Induction of tolllike receptors by propionnic bacterium acne [J]. BR J Dermatol, 2005, 153(6): 1105-1113.

[7]昝文华, 孙剑, 李艳红, 等. 葡萄球菌菌苗治疗痤疮的实验报告[J]. 中国皮肤性病学杂志, 2000, 14(6): 392-393.

[8]高峰, 胡素泉, 李智华, 等. 176例寻常痤疮患者马拉色菌带菌率的调查分析[J]. 中华皮肤科杂志,2004,37(8): 492.

[9]刘文彬, 梁庆, 王晖, 等. 外用丹参酮乳膏抗痤疮药效及机制[J]. 中国实验方剂学杂志, 2012 (14): 212-216.

Preparation of the Acne Model of Rabbits’ Ear

LU Xu1,2, XU Guanghui2, HUANG Yiqi2*
(1. Fujian University of traditional Chinese medicine in Fuzhou,Fujian Province,360122,China; 2. Medical Research Institute in Xiamen City, Fujian Province,361008,China)

ObjectiveTo reconstruct rabbit ear acne by coal tar.Methods9 male rabbits were randomly divided into group A, group B and group C. A group of ear catheter about 2 cm × 2 cm range of saline, B, C coal tar, continuous coating 14 d, to determine whether the model is successful.ResultsThe rabbit ears were thin and white in group B, group B and group C were rough and thickened. The erythema was observed in the same way. There was a small granule uplift and the pores were enlarged. Tissue biopsy: Group A skin tissue structure integrity, B, C group skin tissue hypertrophy, keratinization, skin tissue structure changes.ConclusionThe method of preparing keratinization model of ear acne with corn oil with corn oil is effective.

Acne; Animal model; the Coal-tar; Rabbits’ Ear

2015年度国家海洋公益性项目（201505032）

卢旭（1990—），男，硕士，主要从事方剂疗效客观化及作用机理研究。

*通讯作者 黄亦琦（1963—），男，主任医师，主要从事方剂疗效客观化及作用机理研究。