酸藤子提取物及其抑菌作用的研究

凌春耀，梁 凤，李 依，张 志，高雪梅

（吉林农业科技学院制药工程学院，吉林 132101）

酸藤子提取物及其抑菌作用的研究

凌春耀，梁 凤，李 依，张 志，高雪梅※

（吉林农业科技学院制药工程学院，吉林 132101）

探讨酸藤子根、茎、叶提取物的抑菌活性。通过乙醇提取法和水提取法分别对酸藤子根、茎、叶进行提取，采用滤纸片扩散法对酸藤子根、茎、叶提取物的抑菌活性进行研究。结果表明，酸藤子根、茎、叶提取物对供试菌种中的细菌有不同程度的抑制作用，茎、叶的水提取物对酵母菌无抑菌作用，两种方法提取的根部提取物普遍抑菌作用高于其他部位。酸藤子提取物有一定的抗菌作用，可以作为抗菌药应用。

酸藤子；提取物；抑菌作用

酸藤子［Embelia laeta（L.)Mez］系紫金牛科酸藤子属植物，分布于我国东南、华南、西南等地区，资源较丰富，是攀缘灌木或藤本，稀小灌木，长1～3m，幼枝无毛，老枝具皮孔[1]。酸藤子属植物在广西地区一直以来都是民间常用药，有广泛的民间使用基础。酸藤子其根叶可散瘀止痛，收敛止泻，治跌打肿痛、肠炎腹泻、咽喉炎、胃酸少、痛经、闭经等症[2]；嫩尖及叶可生食，味酸，助消化，有强壮补血之效；根叶可作兽药，治伤食胀气，热通口渴[3]。

目前人们为了延长食品的保质期，在食品的生产、加工和储存时需加入防腐剂。但近来所使用的合成防腐剂都有一定的安全性问题，因此选择纯天然的防腐剂有现实的意义。目前对酸藤子研究还较少，文献报道中主要是对酸藤子中的化学成分[4]、酸藤子叶的营养成分[5]及其生药学鉴别[6]进行研究，笔者未见有对其提取和抑菌作用的研究报道。杨翠先[7]等人对酸藤子同属植物大叶酸藤子（Embelia subcoriacea）乙醇提取物进行抑菌活性实验，结果表明其醇提物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌及白色念球菌的生长有抑制作用。本实验针对酸藤子根、茎、叶不同部位提取物的抑菌作用进行研究，以初步证明其抑菌作用。旨在研究开发具有保健与防腐于一体的无毒无副作用的天然防腐剂。

1 材料、仪器与方法

1.1 材料

1.1.1 原料 本实验酸藤子全草于2014年4月采自广西兴业县，阴干后，分为根、茎、叶三部分密封保存。

1.1.2 菌种 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），大肠杆菌（Escherichia coli），由吉林农业科技学院制药工程院动物遗传繁育实验室提供；酵母菌（Saccharomyces cerevisiae)，内蒙赤峰安琪酵母股份有限公司生产的高活性酵母。

1.1.3 仪器 FW135型中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；DK-98-IIA电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）；RE-3000B旋转蒸发器（上海雅荣生化设备仪器有限公司）；SHBB95A型循环水式多用真空泵（上海豫康科教仪器设备有限公司）；DHP-9052型电热恒温培养箱（上海一恒科技有限公司）；净化工作台（上海新苗医疗器械制造有限公司）；BXM-30R立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；DD-Z300恒温振荡器（江苏太仓市实验设备厂）。

1.2 方法

1.2.1 抑菌活性成分提取 乙醇浸渍法：参照杨翠先[7]等人对大叶酸藤子的提取方法，将干燥至恒重的酸藤子根、茎、叶分别称取25 g，进行粉碎，过二号筛；将粉末用125mL的80%乙醇浸泡7d；抽滤，用80%乙醇分别洗涤两遍，再抽滤；用滤液旋转蒸发挥去乙醇，收集浓缩液，置于45℃的干燥箱干燥并称重。水提醇沉法提取[8]：将酸藤子根、茎、叶分别称取25 g进行粉碎，过二号筛，用蒸馏水浸润1 h，用水煎煮2次。第1次加水500 mL，提取1 h，滤过；第2次加水500 mL提取30 min，滤过，合并2次滤液，将其浓缩至50 mL左右。冷却室温，加入无水乙醇溶液，使其醇含量达到80%，置于4℃冰箱冷藏24 h，抽滤，浓缩，置于45℃的干燥箱干燥并称重。

1.2.2 滤纸片扩散法[9-11]滤纸片扩散法药敏试验是观测药物的抑菌效果的一种有效检测方法，药液通过滤纸的吸附、扩散，从而在菌板上形成抑菌圈，观测其直径大小，判定药液的抑菌效果强弱。一般情况抑菌圈＜10 mm为低敏，10 mm＜抑菌圈＜15 mm为中敏，15 mm＜抑菌圈＜20 mm为高敏，抑菌圈＞20 mm为极敏，无抑菌圈为不敏感。

1.2.3 培养基制备 PDA培养基（酵母菌用）：马铃薯切成小块，称取100 g，置于500 mL水中，煮沸30 min，纱布过滤，补足失水，加入10 g葡萄糖。分别取200 mL、300 mL分装，得到1号、2号培养基，再向2号培养基加入10 g琼脂，加热溶解，补足失水，包扎，121℃高压蒸汽灭菌20 min，分别得到PDA液体培养基和固体培养基。LB培养基（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌用）：分别称取胰蛋白胨2 g，氯化钠2 g，酵母提取物1 g各两份，置于200 mL水中，溶解，得到3、4号培养基；再称取胰蛋白胨5 g，氯化钠5 g，酵母提取物2.5 g，加500 mL蒸馏水溶解，加入6 g琼脂，加热溶解，得到5号培养基。将3、4、5号培养基包扎，121℃高压蒸汽灭菌20 min。

1.2.4 菌悬液的制备 在净化工作台上，将高活性酵母用无菌蒸馏水稀释，并在斜面培养基中划线培养，置于培养箱中24 h，得到各个菌的单个菌落。用接种环挑取单个酵母菌菌落接种于高压灭菌后的上述的1号液体培养基中；用移液枪吸取大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌种液10 μL，接种到3号、4号液体培养基中，作好标记；将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌放入37℃恒温振荡器培养10 h，酵母菌放入28℃振荡培养10 h，得到菌悬液。

1.2.5 菌板制备及测定抑菌圈 将提取物分别配制成0.01 g/mL的药液，将直径10 mm的无菌滤纸片，浸泡于药液中12 h，并用乙醇、蒸馏水作好空白对照。将上述2号和5号固体培养基分别加热溶解，在超净台中分别倒入培养皿制成平板培养基，冷去凝固，用移液枪分别吸取200 μL大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌的菌悬液注入平皿固体培养基中，用涂菌棒涂匀，即得菌板。将药敏试纸贴在菌板上，以无菌蒸馏水、乙醇的试纸作空白对照，作好标记。大肠杆菌、金黄色葡萄球菌放入37℃的恒温箱，酵母菌放入28℃的恒温箱，培养12 h。测量其抑菌圈的大小，比较抑菌效果。

2 结果与讨论

2.1 浸膏得率[12]提取结果

酸藤子根、茎、叶经醇提法和水提醇沉法后，得到浓缩液，置于干燥箱低温干燥，得到提取物浸膏，其结果见表1。

表1 不同方法提取酸藤子不同部位的有效成分含量

通过表1可以看出，用80%乙醇提取法和水提醇沉法得到浸膏的量大小顺序分别为：根＞茎＞叶（醇提），根＞叶＞茎（水提）。总体反映出酸藤子的同一部位用不同方法提取，得到产物的量不一样，且明显表明80%乙醇提取得到的所需产物多于水提醇沉法得到的所需产物量。

2.2 抑菌效果

酸藤子不同部位经80%乙醇浸提法和水提醇沉法提取得到浓缩液，通过滤纸片扩散法得到结果见表2。

表2 不同方法提取酸藤子不同部位的提取物对3种菌的抑菌圈直径

3 结论

3.1 不同部位抑菌效果分析

由表2可知，对于酸藤子不同部位用上述两种不同方法的提取物，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和酵母菌的抑制程度存在差异，两种方法得到根的提取物对于3种菌的抑菌效果较为明显，而茎、叶的提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌也有较为明显的抑菌效果，但对酵母菌无抑菌效果。

3.2 不同提取方法抑菌效果分析

由表2可知，对于金黄色葡萄球菌，茎、叶的水提产物的抑菌能力较强于醇提的；水提的产物对大肠杆菌生长抑制力大于醇提的产物；而对于酵母菌则是醇提的产物抑菌能力较强，茎、叶的水提产物对其无抑菌作用。

3.3 不同菌种抑菌效果分析

由表2中的数据可得，菌种不同，酸藤子提取物对其的抑菌效果不相同，水提醇沉法的茎、叶提取物对酵母菌无抑菌效果，但对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有较为明显的抑菌作用。醇提中的根提取物对大肠杆菌的抑菌能力不显著，对金黄色葡萄球菌和酵母菌有较强的抑菌能力。

4 讨论

从本研究的抑菌结果表明，酸藤子提取物有一定的抗菌作用，但不同的提取方法得到的产物抑菌效果不一致，抑菌效果在不同部位和不同菌种之间也存在一定的差异，酸藤子根部用不同方法提取，针对不同菌群进行药敏试验，得到的抑菌效果有较为明显的强弱之分。在根、茎、叶提取物抑菌试验的对比中，普遍是根部的提取物抑菌效果较好，茎、叶处于地表，生长迅速，积累的物质不多，故根部抑菌效果普遍优于茎叶。因此，酸藤子根提取物对细菌有较强的抗菌作用，具有作为天然防腐剂应用于食品工业的潜力。虽然唐天君等人对酸藤子化学成分进行了分析研究，但对其根茎叶的抑菌作用还没有受到重视。酸藤子抑菌的主要成分尚未清晰，需要对其进一步研究分析，以便应用酸藤子为人类生活服务。

[1]福建植物志编写组.福建植物志（第4卷)[M].福州：福建科学技术出版社，1990：87-99.

[2]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草（第5册第13 卷)[M].上海：上海科学技术出版社，1999：51-57.

[3]福建省科学技术委员会，福建植物志编写组.福建植物志（第4 卷)[M].福州：福建科学技术出版社，1982：110-125.

[4]唐天君，吴凤锷.酸藤子（Embelia laeta)化学成分的研究[J].天然产物研究与开发，2004，16（2)：129-130.

[5]黄晓东，黄晓冰.酸藤子叶营养成分分析与评价[J].食品与发酵工业，2006，32（7)：108-110.

[6]梁臣艳，梁 雁，蔡 毅，等.酸藤子的生药学鉴别[J].华西药学杂志，2013，28（1)：62-64.

[7]杨翠先，左国营，韩 峻，等.26种滇产植物提取物的体外抗耐药菌作用研究[J].广西植物，2002，32（3)：400-405.

[8]崔福德.药剂学[M].第七版.北京：人民卫生出版社，2014：332. [9]李春美，杜 靖，谢笔钧.柚皮提取物的抑菌作用[J].食品与发酵工业，2004，30（1）：38-41.

[10]任 荣，柴军红，金志民，等.狼爪瓦松全草粗提物体外抑菌作用研究[J].安徽农业科学，2011，39（14）：8 353-8 354，8 356.

[11]洪 英，黄 雁，魏良宇.浅谈纸片扩散法药敏试验[J].福建畜牧兽医，2004，26（5）：56-57.

[12]何 雁，辛洪亮，黄 恺，等.水提醇沉法中醇沉浓度对板蓝根泡腾片制备过程的影响[J].中国中药杂志，2010，35（3)：288-292.

责任编辑：吴艳玲

Study on the Extractive and Its Antimicrobial Activity from Embelia laeta

LING Chunyao,LIANG Feng,LI Yi,ZHANG Zhi,GAO Xuemei
（Jilin Agricultural Science and Technology University School of Pharmaceutical Engineering,Jilin 132101）

This paper is to study on the antimicrobial activity of Extractive from roots,stems and leaves of Embelia laeta.The roots,stems and leaves are extracted by ethanol extraction and water extraction,and by filter paper method,the antimicrobial activity of roots,stems and leaves of Embelia laeta were detected.Results indicate that three extracts from Embelia laeta exhibited different inhibitory effects.Embelia ethanol extract had antibacterial,stems and leaves of the water extract no inhibitory effect on Saccharomyces cerevisiae,two methods of extraction of the three bacteria,the root extracts generally higher than other parts of the antimicrobial effect.Embelia laeta pulp extract also exhibited obvious inhibitory effects on bacteria,so it can be used as a natural preservative.

Embelia laeta；extractive；antimicrobial activity

R284，R285

A

2016-05-03

吉林农业科技学院大学生科技创新项目（吉农院合字[2014]第087号）

凌春耀（1992-），男，广西壮族自治区玉林市人，吉林农业科技学院2012级制药工程专业学生。

※为本文通讯作者