针刺内关穴对慢性心衰小鼠心脏血流动力学及心衰标志物的影响*

郭 颖 孙兴华 苏 苏 武文鹏 武 丹 指导 孙远征

（黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001）

·研究报告·

针刺内关穴对慢性心衰小鼠心脏血流动力学及心衰标志物的影响*

郭 颖 孙兴华 苏 苏 武文鹏 武 丹 指导 孙远征

（黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001）

目的观察针刺内关穴对慢性心力衰竭小鼠心脏血流动力学及心衰标志物的影响。方法动物分为正常组、模型组、针刺组，各组均为15只。腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液制备慢性心力衰竭模型。针刺组每日上午行针刺干预。针刺干预结束后，间隔30 min予以腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液。连续针刺干预4周。正常组和模型组只予捆绑固定，不进行任何治疗。MP-150型16道生理记录仪测量左心室收缩压（LVSP）、左室舒张末期压（LVEDP）、左室最大上升速率（dp/dtmax）、左室最大下降速率（dp/dtmax）。采用酶联免疫吸附法（ELISA）进行测定血清心力衰竭标志物脑钠肽（BNP）和肽素（CCP）水平。结果与模型组比较，针刺组小鼠LVSP、+dp/dtmax明显上升，LVEDP、-dp/dtmax显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，针刺组小鼠血清BNP、CCP水平均明显降低（P＜0.01）。结论针刺内关穴能够降低慢性心力衰竭小鼠增加LVSP和+dp/dtmax，降低LVEDP和-dp/dtmax，改善心肌收缩和心肌舒张功能，且能够改善心力衰竭标志物脑钠肽和肽素水平，改善心衰程度。

慢性心力衰竭 血流动力学 脑钠肽 肽素 针刺 内关

慢性心力衰竭（CHF）是一组复杂的临床综合征，以外周血流分布异常和神经内分泌激活为特征。过去我国以心脏瓣膜病为主，近年则以冠状动脉粥样硬化性心脏病、高血压病居多［1］。慢性心力衰竭的发病率和病死率都很高，已成为世界范围内突出的公共卫生问题［2］。针刺疗法在提高运动耐量、改善生活质量、减轻心肌损害、延缓心肌肥厚、改善细胞内外炎性状态方面有明显的作用［3-5］。黑龙江中医药大学孙远征教授依据《四总穴歌》所载“心胸内关应”的理论结合多年临床经验应用内关穴治疗心悸、怔忡取得了较好的临床疗效。本组研究正是在孙远征教授应用内关穴防治心胸疾病的学术思想指导下，进一步探讨针刺内关穴对慢性心衰小鼠心脏血流动力学及心衰标志物的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 45只4周龄健康雄性小鼠，动物均为清洁级，体质量（22.56±1.83）g，由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供，动物许可证号：SCXK（黑）2013004。所有动物均饲养于清洁级动物房。分笼喂养，自由进食、饮水，符合《中华人民共和国卫生部实验动物环境设施标准》，适应性饲养1周。

1.2 试药与仪器 盐酸异丙肾上腺素注射液（上海禾丰制药有限公司），脑钠肽（BNP）酶联免疫试剂盒（天津易生源生物技术有限公司），肽素（CCP）酶联免疫试剂盒（天津易生源生物技术有限公司），电子秤（湖南仪器仪表总厂天平厂），低温高速离心机（美国Biorad公司），0.25 mm×13 mm华佗牌一次性针灸针 （苏州医疗用品厂有限公司）、VEvo2100彩色多普勒超声仪（Visual Sonics Inc公司）。

1.3 分组与造模 45只小鼠随机分为正常组、模型组、针刺组，各组15只。模型组和针刺组参照文献［6］制备小鼠慢性心衰模型。连续腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液，每次注射3 mg/kg，每日注射2次，连续4周。

1.4 干预方法 正常组每日腹腔注射等剂量的生理盐水，每日注射2次，连续4周。针刺组每日上午行针刺干预。小鼠内关穴参照中国针灸学会实验针灸研究会研究制订的《实验动物穴位定位标准》［7］。选用华佗牌一次性针灸针直刺小鼠双侧内关穴，进针约3 mm，留针30 min。留针期间每间隔10 min行小幅度捻转行针。针刺干预结束后，再间隔30 min予以腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液制备慢性心力衰竭小鼠模型。针刺干预为4周。正常组和模型组只予捆绑固定，不进行任何治疗。

1.5 检测指标 1）血流动力学测定。动物造模、干预结束后，各组小鼠禁食12 h，不禁水，称体质量。采用戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射麻醉小鼠，仰卧固定小鼠，常规消毒，将左颈总动脉钝性分离约1 cm，用动脉夹在近心端处将其夹紧，于动脉管壁上剪一小斜口，将内充满肝素的导管向心脏方向插入，用手术线将导管与动脉壁扎进固定。打开动脉夹，将导管继续缓慢插入。待显示屏呈现的波形由动脉压波形变为左室压力波形时停止插管，连接呼吸机。MP-150型16道生理记录仪测量左心室收缩压 （LVSP）、左室舒张末期压（LVEDP）、左室最大上升速率（dp/dtmax）、左室最大下降速率（dp/dtmax）。2）心力衰竭标志物测定。小鼠腹主动脉取血5 mL，注入试管中，摇匀，室温自然凝固15 min，3000 r/min离心20 min，收集上清液，均分2份。采用酶联免疫吸附法（ELISA）进行测定血清心力衰竭标志物脑钠肽（BNP）和肽素（CCP）水平，具体操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.6 统计学处理 应用SPSS18.0统计软件分析。计量资料以（s）表示。多个样本均数比较采用单因素方差分析，方差齐时用LSD法；方差不齐时用Tamhane′s T2检验。

2 结 果

2.1 针刺内关穴对慢性心力衰竭小鼠血流动力学的影响 见表1。与正常组比较，模型组小鼠LVSP、+dp/dtmax明显降低，LVEDP、-dp/dtmax显著升高，差异具有统计学意义（P＜0.01），提示造模成功。与模型组比较，针刺组小鼠LVSP、+dp/dtmax明显上升，LVEDP、-dp/dtmax显著降低（P＜0.01）。

表1 针刺内关穴对慢性心力衰竭小鼠血流动力学的影响（s）

表1 针刺内关穴对慢性心力衰竭小鼠血流动力学的影响（s）

与正常组比较，*P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.01。下同。

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2.2 针刺内关穴对慢性心力衰竭小鼠BNP和CCP水平的影响 见表2。与正常组比较，模型组小鼠血清BNP、CCP水平均显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，针刺组小鼠血清BNP、CCP水平均明显降低（P＜0.01）。

表2 针刺内关穴对慢性心力衰竭小鼠BNP和CCP水平的影响（μg/L，s）

表2 针刺内关穴对慢性心力衰竭小鼠BNP和CCP水平的影响（μg/L，s）

组别 n BNP CCP正常组 15模型组 15 29.84±4.45 15.29±0.63 53.47±6.23*63.42±0.96*针刺组 1540.08±3.46△36.50±0.74△

3 讨 论

CHF的治疗目标已由单纯改善临床症状转变为防止心室重构、恢复心室收缩、改善远期预后。但现有的诸多干预方法和手段仍未能从根本上降低心力衰竭的高发病率、高复发率、高死亡率的现状。CHF是中医药治疗具有优势的病种，中医药在改善CHF患者临床症状，调节免疫功能，改善预后，提高生活质量方面具有明显的临床疗效［8］。CHF尚属于中医学的“心悸”“怔忡”“胸痹”“心痛”“痰饮”“水肿”等范畴［9-10］。与本病有关的症状认识散见于历代医籍中，早在《黄帝内经》中就有相关临床表现的描述。中医学认为本病证的病位虽然在心，与其他脏腑经络关系密切，其病理特点多为本虚邪实，其中本虚主要是指气血阴阳不足，尤其以阳虚为多，心脉失养，是本病发病基础；邪实主要是指寒凝、痰浊、瘀血等邪气痹阻心脉，是本病发生的重要病理因素。内关穴是治疗心胸疾病的经典穴和首选穴［11］。孙远征教授认为，内关穴为治疗内脏病的要穴，属八脉交会穴之一，通于阴维脉，阴维脉维系联络全身诸阴经，阴维为病在脏，故内关穴能宽胸理气，宁心安神。正如《四总穴歌》所言“心胸内关应”。

本组研究通过腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液建立慢性心力衰竭小鼠模型。该模型能够直接降低心肌收缩力，是临床研究CHF较为理想的模型。血流动力学结果显示，与正常组比较，模型组小鼠LVSP、+dp/dtmax明显降低，LVEDP、-dp/dtmax显著升高，差异具有统计学意义（P＜0.01），说明CHF模型复制成功。而与模型组比较，针刺组小鼠LVSP、+dp/dtmax明显上升，LVEDP、-dp/dtmax显著降低，差异具有统计学意义（P＜0.01）。提示针刺内关穴能够显著改善慢性心力衰竭小鼠的血流动力学指标，说明针刺内关穴能够改善心肌收缩和心肌舒张功能，能够使CHF小鼠的心肌收缩力增强。

心力衰竭标志物在判断心力衰竭的严重程度以及预后方面具有重要的价值。脑钠肽是近年来临床研究较多的生长因子，是由心室肌细胞分泌的一种多肽类技术，具有与RAAS系统激活呈拮抗的作用［12-13］。当发生心力衰竭时，脑钠肽主要由左室壁张力进行调节。有研究表明，血浆脑钠肽和肽素的浓度增高与心力衰竭的严重程度呈正相关［14］。外周血脑钠肽水平能够反映心室负荷增加程度和左室功能障碍程度，可用于评价心功能损害或心力衰竭的状态。肽素与通常用来作为心力衰竭预测指标的精氨酸加压素的多种活性有关［15］。精氨酸加压素的增高能够促进外周血管收缩而使心脏后负荷增加；精氨酸加压素的增高还可以引起心肌细胞蛋白含量增加而造成心室重构，同时还能通过对心脏成纤维细胞的刺激而加速心肌纤维化［16］。本研究结果显示，针刺内关穴能够缓解小鼠心力衰竭的程度，显著降低慢性心力衰竭小鼠血清BNP、CCP水平，与模型组比较，具有显著性差异（P＜0.01）。

综上所述，针刺内关穴能够降低CHF小鼠增加LVSP和+dp/dtmax，降低LVEDP和-dp/dtmax，改善心肌收缩和心肌舒张功能。通过对心力衰竭标志物脑钠肽和肽素的检测，能够更好的评价针刺内关穴对CHF模型小鼠心衰程度的改善以及预后的影响。但上述研究的机制有待今后进一步深入的实验研究和临床探讨。

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Study on the Effect of Acupuncture on the Point of Neiguan on Heart Hemodynamics and Heart Failure Markers of Chronic Heart Failure Rats

GUO Ying，SUN Xinghua，SU Su，et al. The 2nd Affiliated Hospital of Heilongjiang TCM University，Heilongjiang，Harbin 150001，China.

Objective：To study on the effect of acupuncture on the point of Neiguan on heart hemodynamics and heart failure markers of chronic heart failure rats.Methods：45 rats were randomly divided into a normal group，model group and treatment group with 15 in each group.All rats were given isoproterenol hydrochloride with intraperitoneal injection to make chronic heart failure model.Acupuncture group were given injection 30min after acupuncture for 4 weeks.Normal group and model group were seized without any treatment.LVSP，LVEDP，+dp/dtmax，-dp/dtmax were determined by MP-150 physiological grapher.BNP and CCP level were determined by ELISA.Results：Compared with model group，LVSP and+dp/dtmaxwere significantly increased while LVEDP，-dp/dtmaxwere decreased in acupuncture group（P＜0.01）.BNP and CCP level were also decreased（P＜0.01）.Conclusion：Acupuncture on the point of Neiguan can increase the LVSP and+dp/dtmaxof chronic heart failure rats，and decrease LVEDP and-dp/dtmax，improve myocardiac contraction and relaxation.It can also improve heart failure by regulating the level of BNP and CCP.

Chronic heart failure；Hemodynamics；BNP；CCP；Acupuncture；Neiguan

R246

A

1004-745X（2017）03-0387-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.03.004

2016-11-15）

国家中医药管理局全国名老中医药专家传承工作室建设项目（孙远征名老中医工作室；国中医药人教发［2014］20号）；黑龙江中医药大学科研基金面上项目（201406）