咸阳市女性人乳头瘤病毒（HPV）基因型别的研究

杨 洋，王海兰

（1．陕西中医药大学医学技术学院，陕西 咸阳 712046；2．陕西中医药大学附属医院检验科，陕西 咸阳 712000）

宫颈癌在全球女性恶性肿瘤发病率中仅次于乳腺癌，位居第2位[1]。而HPV是引发宫颈癌最主要的因素[2]。所以了解咸阳市女性HPV感染情况，对防治宫颈癌是必需的。目前用PCR-反向点杂交法检测HPV DNA。HPV依据其引发宫颈癌的危险性分为低、中、高危型。检测咸阳地区2541例宫颈样本的HPV DNA，分析咸阳女性HPV的感染和型别，为临床筛查、疫苗研制和宫颈癌早期防治提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2014年4月至2016年3月来陕西中医药大学附属医院妇科门诊、住院及体检的女性2541例，年龄16～91岁。

1.2 仪器与试剂

德国Biometra系列PCR基因扩增仪、自动核酸分子杂交仪，核酸提取试剂、核酸扩增试剂、反向点杂交试剂（广州安必平医药科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 标本采集及保存

医护人员用消毒棉拭子在宫颈口获取足量的上皮细胞，取出置于生理盐水中，编号，立即送检。

1.3.2 DNA的提取

将待检标本混匀后转至1.5 ml离心管，12000 rpm离心5 min。弃上清，加50 ulDNA提取液并震荡混匀，100℃干浴10 min，12000 rpm离心5 min，取上清液扩增。

1.3.3 PCR扩增

取5ul制备好的上清液至PCR反应体系中，循环条件：50℃3 min，95℃15 s，1个循环；94℃40 s，55℃40 s，72℃40 s，40个循环；72℃7 min，1个循环。

1.3.4 杂交、结合和显色

杂交：将PCR扩增产物98℃变性8 min，然后立即加入放有杂交液和HPV分型杂交膜条的模槽中，42℃低转速杂交1 h。结合：膜条清洗后在结合液中42℃结合10 min。显色：清洗膜条10 min，在20℃～25℃避光显色5 min后转移至去离子水中终止反应5 min，按试剂说明书进行结果判读。

1.4 统计学处理

分析采用SPSS 17.0软件进行分析，采用x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HPV的感染率

2541例标本中HPV阳性525例，阳性率20.6 %，其中2014～2016年阳性率依次18.9%，20.9%，25.7%。年份间总体差异有统计学意义（x2=6.101，P＜0.05）。检测28种HPV基因型，阳性率由高到低是高危型16（29.3%）、52（13%）和58（8%）、疑似高危型53（7.2%）及低危型44（7%）。

2.2 HPV感染率的年份变化趋势

分析2014-2016年HPV的28种基因型的感染率，结果显示疑似高危型26（x2=12.764，P＜0.05）和低危型81（x2=5.980，P＜0.05）的阳性率有上升趋势。

2.3 HPV多重感染情况分析

HPV感染以单一感染为主，占72.4%（380/525）；多重感染中以二重感染为主，占18.5%（97/525）；最多混合感染为七重感染。多重感染阳性率在不同年份中无差异。

2.4 HPV感染的年龄分布

受检者分六个年龄段，分别统计其阳性率。阳性率由高到低依次＜20岁33.33%（3/9），50～59岁26.86%（101/376）、20～29岁25.27%（95/376）。不同年龄女性HPV感染的有显著差异（x2=23.158，P＜0.05）。

3 讨 论

2014～2016年HPV阳性率呈增加的趋势，应加强咸阳HPV的筛查工作。流行病学调查[3]显示，不同地区HPV分型存在差异，欧美地区以16和18为主，也是疫苗研制的主要型别。亚洲[4]却以52和58主。本研究HPV阳性率依次是16、52、58，与智艳芳[5]的结果一致。提示咸阳疫苗应以16、52、58型为主。研究发现当患者处于HPV多重感染时，其致病风险约单一感染的1.6倍，增加癌变风险[6]。本研究发现咸阳HPV感染以单重感染为主，多重感染以二重感染为主，不存在多重感染增加的情况。但是咸阳存在六、七重感染。因此，仍然需要加大HPV感染的调查和防治工作，为临床治疗提供方向。研究显示HPV感染患者存在年轻化趋势，提示需扩大HPV筛查的年龄范围，做到早发现、早治疗。

[1] 杜 宏,索兰草,刘红贤,et al.甘肃地区女性宫颈HPV感染的现状研究[J].暨南大学学报(自然科学与医学版),2015,36(1):40-45.

[2] 林明晖,刘崇梅,王彩霞,et al.人乳头瘤病毒检测及液基细胞学检查在宫颈癌筛查中的应用[J].检验医学与临床,2011,08(3):262-263.

[3] S D S,M D, X C,et al.Worldwide prevalence and genotype distribution of cervical human papillomavirus DNA in women with normal cytology:a meta-analysis [J].The Lancet Infectious diseases,2007,7(7):453.

[4] Bao Y P,Li N,Smith J S,et al.Human papillomavirus type distribution in women from Asia: a meta-analysis [J].International Journal of Gynecological Cancer,2008,18(1):71–79.

[5] Zhi Y F,Xiao-Fu L I,Ban Z Y,et al.Prevalence and genotype distribution of human papillomavirus infections in women of Henan province [J].Chinese Journal of Cancer Prevention &Treatment,2014,14(2):5452-5461.

[6] Bosch F X,Burchell A N,Schiffman M,et al.Epidemiology and natural history of human papillomavirus infections and typespecific implications in cervical neoplasia[J].Vaccine,2008,26 Suppl 10(26 Suppl 10):K1.