化疗对晚期非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变状态的影响

徐炎良 陈春香



化疗对晚期非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变状态的影响

徐炎良 陈春香

目的 探讨化疗对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状态的影响。方法 选取85例晚期NSCLC患者作为研究对象。化疗前、化疗4～6个周期后均采集所有研究对象的外周血，采用酶切富集联合变性高效液相色谱法(REDE-DHPLC)检测EGFR-19外显子、EGFR-21外显子的突变状态。结果 85例晚期NSCLC患者化疗前EGFR突变阳性率为55.29%(47/85)，化疗4～6个周期后EGFR突变阳性率为35.29%(30/85)，化疗前后EGFR突变阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。化疗前后共有37例晚期NSCLC患者发生EGFR突变，其中27例从EGFR突变阳性转为EGFR突变阴性，10例患者从EGFR突变阴性转为EGFR突变阳性，两种突变模式发生率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 晚期NSCLC患者化疗过程中EGFR突变状态可能会发生改变，因此在给予其靶向治疗前应重新对其进行EGFR突变检查。

非小细胞肺癌；表皮生长因子受体；基因突变

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:386～388)

诸多研究表明，分子靶向治疗已成为晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的重要治疗手段之一，但是其疗效取决于患者的表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状态[1-2]。值得注意的是，分子靶向治疗的费用昂贵，因此在此之前有必要给予患者EGFR基因突变状态检查[3]。由于多数晚期NSCLC患者在入院时常先采用化疗治疗，而化疗前后患者EGFR基因突变状态是否会改变则有待我们进一步研究。本研究即旨在探讨化疗对晚期NSCLC患者EGFR基因突变状态的影响，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2013年1月至2015年12月在江西省肿瘤医院接受化疗的85例晚期NSCLC患者。纳入标准：①经组织学和(或)细胞学检查确诊为NSCLC；②临床分期为Ⅲb期～Ⅳ期；③KPS评分>60分，预计生存期>3个月；④签署知情同意书。排除标准：①既往已接受手术或其他抗肿瘤治疗；②各种原因导致化疗周期数<4个。上述85例晚期NSCLC患者，男性59例，女性26例；年龄47.2～70.9岁，平均(56.5±5.8)岁；病理类型：腺癌49例、鳞癌36例；临床分期：Ⅲb期53例，Ⅳ期32例。

1.2 研究方法

1.2.1 化疗方案 所有患者均接受一线化疗方案治疗，包括GP方案(铂类+吉西他滨)、DP方案(铂类+多西他赛)、AP方案(铂类+培美曲塞)等。NSCLC非鳞癌患者首选AP方案化疗，NSCLC鳞癌患者可选择GP方案或DP方案化疗，化疗周期数为4～6个。

1.2.2 EGFR突变状态检测 方法如下：①空腹采集所有研究对象外周血4 ml，乙二胺四乙酸二钾抗凝，离心分离血浆，采用QIAamp DNA Blood Mini Kit试剂盒(美国QIAGEN公司)提取游离DNA。注意化疗前、化疗4～6个周期后均进行EGFR突变状态检测；②第一轮PCR扩增体系：10×PCR缓冲液2 μl、5U/μl Taq DNA聚合酶0.2 μl、10 μmol/μl dNTP 2 μl、10 μmol/μl上游引物1 μl、10 μmol/μl下游引物1 μl、模板DNA 2 μl。PCR扩增参数：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 50 s，40个循环；72 ℃ 7 min。③EGFR-19外显子突变检测：将第一轮PCR产物加入含有Mse Ⅰ(美国NEB公司)的酶切体系，37 ℃孵育150 min，对酶切产物进行第二轮PCR扩增，其扩增体系、扩增参数与第一轮PCR扩增一致，采用DNASep柱(美国Transgenomic公司)对产物进行分析。④EGFR-21外显子突变检测：将第一轮PCR产物加入含有Msc Ⅰ(美国NEB公司)的酶切体系，37 ℃孵育150 min，对酶切产物进行第二轮PCR扩增，其扩增体系、扩增参数与第一轮PCR扩增一致，对产物采用Sau 96Ⅰ(美国Transgenomic公司)进行酶切，95℃孵育5min，以1℃/min速度降至35 ℃复性，采用DNASep柱对产物进行分析。

1.3 统计学分析

应用SAS 9.3统计软件进行数据分析，研究对象化疗前后EGFR突变状态比较采用配对设计χ2检验，两种突变模式发生率比较采用χ2检验，P<0.01为差异有统计学意义。

2 结果

85例晚期NSCLC患者化疗前EGFR突变阳性率为55.29%(47/85)，化疗4～6个周期后EGFR突变阳性率为35.29%(30/85)，化疗前后EGFR突变阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。化疗前后共有37例晚期NSCLC患者发生EGFR突变，其中27例从EGFR突变阳性转为EGFR突变阴性，化疗前后EGFR突变阳性转阴性发生率为57.45%(27/47)，10例患者从EGFR突变阴性转为EGFR突变阳性，化疗前后EGFR突变阴性转阳性发生率为33.33%(10/30)，两种突变模式发生率比较差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

化疗是目前临床上治疗各种晚期恶性肿瘤最常用的方法，尽管其疗效已经获得了充分认可，但是由于化疗常导致患者继发严重的毒副反应，并且其疗效尚有进一步提升的空间，因此探索疗效更好、安全性更高的治疗手段成为当前肿瘤学研究的重要课题[4-5]。随着医学技术的发展，分子靶向治疗逐步应用于临床，该治疗手段主要针对肿瘤特异的基因异常进行治疗，从而具有针对性强、疗效较好、副作用轻等优点[6]。尽管费用问题限制了分子靶向治疗的大规模推广使用，但是对于经济条件较好的患者来说，分子靶向治疗不失为一种理想的抗肿瘤治疗手段。

肺癌是目前临床上分子靶向治疗研究最多的恶性肿瘤之一，肺癌领域应用的治疗靶点已包括EGFR、血管内皮生长因子(VEGF)、间变淋巴瘤激酶(ALK)等[7]。国内以EGFR研究最为透彻。邱纯等[8]报道，吉非替尼治疗晚期NSCLC患者的无进展生存期(PFS)显著高于标准化疗组，由此可见吉非替尼治疗NSCLC的远期疗效优于标准化疗。朱国炼等[9]报道，厄罗替尼治疗晚期NSCLC患者的临床总有效率、疾病控制率均显著高于多西他赛，而不良反应发生率则显著低于多西他赛，由此可见厄罗替尼是治疗晚期NSCLC安全、有效的药物之一。由此可见，分子靶向治疗晚期NSCLC的疾病控制时间、有效率、安全性均优于传统化疗，其治疗晚期NSCLC已倍受临床青睐。

值得注意的是，分子靶向治疗的费用极其昂贵，因此临床多将其作为晚期恶性肿瘤患者的二线甚至三线治疗方案，即很多接受分子靶向治疗的恶性肿瘤患者既往常有化疗史[10]。由于分子靶向治疗的基础就是肿瘤特异的基因异常，如果化疗对肿瘤特异基因异常产生一定的影响，这势必会影响分子靶向治疗的疗效，因此本研究探讨化疗对晚期NSCLC患者EGFR基因突变状态的影响就具有重要的临床意义。

在本研究中，我们先对85例晚期NSCLC患者进行EFGR突变状态检查，然后给予研究对象4～6个疗程的化疗，化疗结束后再对所有患者进行EFGR突变状态检查，结果显示研究对象化疗前后EGFR突变阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)，进一步分析显示57.45%的晚期NSCLC患者由化疗前的EGFR突变阳性转变为化疗后的EGFR突变阴性，33.33%的晚期NSCLC患者由化疗前的EGFR突变阴性转变为化疗后是EGFR突变阳性，两种突变模式发生率比较差异有统计学意义(P<0.05)。综上所述，晚期NSCLC患者在化疗过程中EGFR突变状态可能会发生改变，因此在给予其靶向治疗前应重新对其进行EGFR突变检查，但是化疗诱使EGFR突变状态改变的机制有待进一步研究。

[1] 冯 佳，许 斌.EGFR 19与21号外显子突变的晚期非小细胞肺癌一线TKI治疗疗效差异的研究进展〔J〕.肿瘤学杂志，2016，22(3)：167-171.

[2] 宁 燕.EGFR-TKIs辅助治疗非小细胞肺癌的临床观察〔J〕.实用癌症杂志，2016，31(6)： 940-943.

[3] 张坤宁，路 军，赵宏颖，等.表皮生长因子受体、人类表皮生长因子受体2、人类表皮生长因子受体3表达与非小细胞肺癌预后的关系〔J〕.肿瘤研究与临床，2016，28(2)：73-77，89.

[4] 梁荣祥，李苏萌.恶性肿瘤的分子靶向治疗〔J〕.山东医药，2010，50(1)：104-105.

[5] 覃裕露，赵 杨，申兴斌.EGF、EGFR、C-erbB-2在恶性肿瘤中的研究进展〔J〕.承德医学院学报，2012，29(2)：182-185.

[6] 金静思，贺巾钊，周黎明.非小细胞肺癌分子靶向治疗药物的现状及进展〔J〕.中国肿瘤临床，2015，42(17)：881-885.

[7] 金向宇.非小细胞肺癌分子靶向治疗研究进展〔J〕.中国基层医药，2015，22(17)：2707-2709.

[8] 邱 纯.吉非替尼与化疗治疗EGFR突变非小细胞肺癌的疗效比较〔J〕.中国医药指南，2014，12(5)：169-170.

[9] 朱国炼.厄罗替尼与多西他赛治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效对比研究〔J〕.实用中西医结合临床，2016，16(3)：37-38.

[10] 赵 睿，常小红.分子靶向治疗在非小细胞肺癌中的研究进展〔J〕.实用癌症杂志，2014，29(3)：364-366.

(编辑：吴小红)

Influence of Chemotherapy on Epidermal Growth Factor Receptor Gene Mutations inPatients with Advanced Non-small Cell Lung Cancer

XU Yanliang,CHEN Chunxiang.

Jiangxi Cancer Hospital,Nanchang，330029

Objective To investigate the influence of chemotherapy on epidermal growth factor receptor gene(EGFR) mutations in patients with advanced non-small cell lung cancer(NSCLC).Methods 85 cases of advanced NSCLC were selected.Peripheral blood was collected from all the subjects before and after 4～6 cycles of chemotherapy,then EGFR exon 19 and exon 21 mutations were detected by restriction endonuclease digestion combine with denaturing high performance liquid chromatography (REDE-DHPLC).Results The EGFR mutation positive rate was 55.29% (47/85) in 85 cases of advanced NSCLC before chemotherapy,then the EGFR mutation positive rate converted to 35.29% after 4～6 cycles of chemotherapy.There was statistical difference in EGFR mutation positive rate between before and after chemotherapy(P<0.05).37 cases of advanced NSCLC had EGFR mutations before and after chemotherapy,including 27 cases from positive EGFR mutation to negative EGFR mutation,10 patients from negative EGFR mutation to positive EGFR mutation.There was statistical difference in incidence rate between 2 kinds of mutation models(P<0.05).Conclusion EGFR mutation status may change during chemotherapy in patients with advanced NSCLC,so it should be re-examined before targeted therapy.

Non-small cell lung cancer(NSCLC)；Epidermal growth factor receptor gene(EGFR)；Gene mutation

330029 江西省肿瘤医院(徐炎良)；334400 南昌大学抚州医学分院(陈春香)

陈春香

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.03.011

R734.2

A

1001-5930(2017)03-0386-03

2016-11-08

2016-12-05)