食用菌全开放操作接种技术

时 冰 管中显 张振喜

（1. 泌阳县职业技术学校，河南 泌阳 4637002；2. 河南省泌阳县食用菌协会，河南 泌阳 463700）

食用菌全开放操作接种技术

时 冰1管中显2张振喜2

（1. 泌阳县职业技术学校，河南 泌阳 4637002；2. 河南省泌阳县食用菌协会，河南 泌阳 463700）

介绍一种不依赖药物、安全稳定的食用菌接种新技术及其原理，从料、种、空气、人、用具、地面6方面详细陈述其操作规程，强调空间净化的关键措施：雾化降尘的操作方法、检测方法及其标准，并对其应用范围提出看法。

全开放；食用菌；接种；无菌；雾化降尘

食用菌接种环节多、难度大，对无菌操作要求严格，操作不规范、结果不稳定，易造成生产失败。而采用无菌车间接种模式，虽然保障度提高，但成本高，不利于大面积推广。

一般的开放接种模式，更容易造成严重的杂菌污染，遭受失败。而采用接种箱、接种罩、超净台、层流净化室等接种模式，用甲醛、气雾盒熏蒸，多菌灵涂擦等，仍难以确保低污染。其主要问题是过于依赖药物消毒，理念上存在“无药不成”的误区。

全开放食用菌接种新模式能确保成功率达到99.5%～99.9%，其原理并不新颖，只是在方法上要抓关键。该技术已应用十多年，效果稳定。

1 技术原理

本技术原理即为“空间浮沉降彻底，地面尘埃清出去，无尘便无菌”。无尘是硬道理，杂菌在空气中以浮尘的形式存在，空间的浮尘量和杂菌量的指征意义完全一致，也与净化车间的原理完全一致。这是实施雾化降尘全开放接种的科学依据。

空气中的浮尘主要来源于地面，包括尘埃、纸屑、衣物纤维、细毛、细菌、芽孢、霉菌孢子、孢子团等。清除了这些污染物，空气就近乎无菌。再加上菌种自身的生长优势，就能保证接种的成功率。

2 操作规程

全开放接种技术规程的主体内容就是清除杂菌，切断侵染途径；保护培养料，不接触或少接触杂菌。

接种过程的杂菌来源有6个方面，即料、种、空气、人、用具、地面。我们编了一个易记口诀：“一料二种三空气，接种人员和用具，地面尘埃大问题，六大来源要牢记”。消除菌源，防止栽培料杂菌污染，是保证接种成功的关键。成功的原因是综合的，失败的原因却可能是单一的，6个因素同等重要，不能忽略任何一个。

2.1 栽培料

栽培料经灭菌，安全性应是保险的。又为什么将其排在6大杂菌来源之首？这是因为原料袋离开灭菌锅后仍会染杂。一旦出锅后料袋外表又严重染菌，后期用什么药物补救都徒劳。

栽培袋出锅后当温度降至30 ℃左右时最容易染菌，且属于人为因素造成的继发污染，或称再次污染。污染源主要为空间和地面的尘埃，以及出锅拉运人员的手、衣服、装卸动作和拉运工具等。重在预防，从出锅环节开始，直至接种结束，须落实全过程的每一环节的每一个细节。

预防工作始于开锅门前：一是确保拉运工具，包括工作人员的工作服、鞋、帽、口罩等的清洁、消毒，注重工作人员的个人卫生。二是出锅的栽培袋要遮盖拉运，蒸锅门前的空间要雾化降尘，清洗除去地面尘埃，长期固定使用的地面，建设时力求涂布保护层，以减少起砂起灰。三是栽培袋降温场所要提前数小时进行空间雾化降尘，地面清洗除尘。四是栽培袋码垛后，表层立即用无菌薄膜覆盖，防止落尘。五是当袋温在锅内降到70 ℃左右时，抢温出锅拉运，此温度对菌袋仍有保护作用。

小结：彻底灭菌除根源，抢温出锅保安全，防护拉运防污染，安全降温最关键；无尘无菌严落实，开放接种无污染。

2.2 菌种

以固体菌种为例：菌种的不安全因素，一是自身带隐性杂菌，二是棉塞、瓶（袋）壁带杂菌，三是菌种质量不佳，如菌龄不适、菌丝老化、细弱、不健壮等，活性差。

菌种防杂分接种之前和接种之时。要求做到，一不出：培养过程及培养室发出菌种时要逐瓶逐袋严格检查，但凡有一丝怀疑的问题菌种，都不能流出培养室使用。二不进：有问题的及未经瓶外壁、棉塞消毒的菌种，均不能进接种间。三次消毒：一是进入接种车间前，所有菌种用消毒液无死角清洗外壁，用消毒液浸透棉塞，达到透而不滴；二是菌种进接种间后，随雾化降尘第二次消毒；三是取种前，对外壁再次消毒。四次把关：一是菌种出培养室前，逐瓶（袋）严格检查，不放过可疑种瓶；二是进接种间前，对菌种消毒时，再次逐瓶检查；三是接种前开瓶（袋）取种时，对菌种各表面、底面全面检查；四是掰块接种时，高度警惕，发现问题菌种，立即停用。层层设防，谨防外观不易发现的隐性感染，把风险降到最低。

接种过程一旦发现感染菌种要用塑料袋包严，携出室外处理。已接入可疑菌种的菌包另放，接种人员双手重新严格消毒后再继续接种。

2.3 空气

空气中的杂菌极易造成接种失败，大面积污染。空气里基本上是杂菌休眠体，抗逆性极强，体积小而数量大。制袋过程中最难防的微孔感染的原因就在于此。

体积大于10微米的浮尘容易快速沉降，数量少。体积小于10微米的浮尘，漂浮在空中，数量巨大，其中相当比例是单细胞杂菌或者孢子、孢子团，其中又以芽孢等最难对付，一般消毒药物熏蒸等对其作用有限。试验证明：每立方米空间用15毫升甲醛熏蒸30分钟，杀灭孢子的比例只有24%。所以接种间、接种箱仅用药物熏蒸，成功率并不大。空气中未杀灭的漂浮不定的杂菌及其孢子，随意随处降落，无孔不入。

采用层流罩等设备过滤净化空气，可达到无菌目的，但其可控范围小，不便移动，使用受限。而接种车间范围大，仅在接种一道工序上保持洁净，难以保证全过程不染杂。我们通过长期的工作实践，研发成功的雾化降尘净化空气技术，利用物理降尘，化学吸附、触杀或抑制孢子，可达到无菌抑菌目的。其操作方便，可控范围大。

2.4 接种人员

接种人员执行接种操作，技术到位是重点。

一是接种人员要选拔，需做岗前培训，熟悉理论知识和操作技能，掌握接种技术的要领和精髓。无尘无菌，继发性污染等概念必须让操作者真正地理解。

二是接种操作前，严格搞好个人卫生，尽量降低操作者带入杂菌的几率。流水洗手，剪指甲，戴帽、口罩，换消毒的工作服、工作鞋等。

三是人员组合恰当，不误工。接种过程不得讲话笑谈，动作要快，要专心、准确、瞬间接入菌种。

四是尽量少走动，行走要轻慢，防止因动作剧烈震动空气带进尘埃。

五是适当增加菌种用量。穴播的要增加深度，面播覆盖要严密，液体种要全覆盖料面，一旦萌发便形成菌落优势而隔离环境，可以有效防止培养期间的继发杂菌污染。

六是接种好的菌袋，要轻拿轻放，顺便检查扎口及盖体是否严密，要安全转运。

七是接种结束要清理卫生，达到接种前的标准。

2.5 接种用具

固体菌种接种用于破瓶、破袋取种和打孔封口补破等的工具，有二三十种。用前必须彻底清洗消毒，否则不得带进接种场所。液体菌种接种用的管道、接种枪，须经严格清洗灭菌，进接种室前不能启封，为安全起见，初进入管道的液体种，最好排出一部分不用（200毫升以上），以冲洗管道和接种枪。

2.6 地面尘埃

地面土壤尘埃中微生物种群繁杂，是空间杂菌和孢子污染的主要来源。

（1）接种场所是硬化地面。提前清洗干净，雾化降尘后，再及时用拖把、吸尘器、清洗机等把地面尘埃清除干净，达到“空间沉浮降彻底，地面尘埃清出去”。保持地面湿润而不积水，直至接种结束。

（2）接种场所为日光温棚或其他栽培棚，是泥土地面。使用前应将地面用塑料膜（地膜）覆盖严密，确保无死角泄露。达到“棚上薄膜不漏气，地下地面盖严密”，雾化降尘后达到“空间浮沉降彻底，地面尘土扬不起”，并保持到接种结束。干燥地面可以通过喷洒消毒剂或者石灰水，达到防止扬尘和减少杂菌基数的双重效果。如降温、接种、养菌在同一棚内进行，无尘无菌应保持到优势菌落形成（“封口”）。

3 雾化降尘

3.1 操作方法

选择高压电动喷雾器作为降尘工具，雾滴细、均匀、射程远、覆盖面大，降尘效果好。

每一次接种开始前40分钟左右，进行喷雾降尘，接种环境要求密闭，每立方米喷洒无菌水40毫升，喷雾要到位，到顶、到角、到壁、不留死角、不漏空间。雾化降尘后，地面达到湿润或略有积水。如有明显积水，则要用拖把、吸尘器或清洗机等清洗地面，保持湿润至接种结束。

根据环境净化程度，用水量可适当增减。若无高压电动喷雾器，也可用普通喷雾器代替，但压力要尽量高，若手柄短则应加长。

3.2 检测方法及标准

雾化降尘后，空间的微尘一定要经检测达标后，才可开始接种。

（1）检测方法。检测前关闭灯光，遮挡门窗光线，使环境黑暗，然后用检测灯（便携式探照灯）打出一束白炽强光，上、下、前、后、左、右不同方位全面照射，仔细观察两米左右距离内光束内的浮游尘埃颗粒数。

（2）检测标准。两米内光柱若无任何尘埃颗粒折光，为完全无风险环境，这种情况下的污染率可控制在万分之一左右；若颗粒数在0～3个，为安全环境，污染率可控制在千分之一左右；若颗粒浮影数在3～5个或以上，可以半量水继续降尘，直至达到标准。

（3）后续措施。随接种时间延长、人员走动、空气流通，空气浮尘数量会上升。最好每隔2小时左右及时用半量水进行雾化降尘，保持至接种结束。

接种完成是养菌的开始，接种后3～5天或5～7天内，养菌环境应保持接种环境的无菌标准，直至优势菌落形成。

4 讨 论

经过多年的应用检验，本技术被证实是一种简单易行、稳定可靠、安全环保的实用方法。在河南、河北、山西等多地的香菇、白灵菇菌棒制作生产中，唯有使用这项技术的企业菌棒的制作成功率最高且保持稳定。

由于雾化降尘会导致环境持续高湿，南方地区接种过程使用这一方法没有问题，但在养菌期使用可能有一定局限性。

S646

码：B

：2095-0934（2017）04-259-03