裴文菡 周成惠 张 慧*
1.大连经济技术开发区第一中学,辽宁 大连 116600; 2.辽宁中医药大学,辽宁 大连 116600
虎掌南星及其混淆品的鉴别研究
裴文菡1周成惠2张 慧2*
1.大连经济技术开发区第一中学,辽宁 大连 116600; 2.辽宁中医药大学,辽宁 大连 116600
目的:建立鉴别虎掌南星及其5种混淆品的方法。方法:采用性状鉴别方法,通过形状、大小、表面、颜色、断面、气味对虎掌南星及其混淆品天南星、半夏、朝鲜南星、螃蟹七、白附子进行鉴别;采用薄层色谱法对虎掌南星及其5种混淆品的甲醇提取溶液进行鉴别。结果:虎掌南星“形如虎掌、色白粉性”的性状特征可以区分正品和5种混淆品;薄层色谱中,虎掌南星甲醇提取液在紫外灯(365nm)和日光灯下,在Rf=0.48位置处分别有一蓝色荧光斑点和一紫红色斑点,而其他5种混淆品均无此斑点,可以区分正品与混淆品。结论:建立的性状和薄层色谱方法专属性强,可用于虎掌南星及其混淆品的鉴别。
虎掌南星;混淆品;性状;薄层色谱;鉴别研究
虎掌南星为天南星科半夏属植物掌叶半夏(PinelliapedatisectaSchott)的干燥块茎,又称掌叶半夏、滇半夏、虎掌,其始载于《神农本草经》[1],全国各省均有分布,具有祛风定惊、化痰散结的功效[2]。现代研究证实,虎掌南星具有镇静和镇痛、抗肿瘤、抗心律失常、抗氧化、泻下等作用,临床上用于治疗宫颈癌等疾病[3-4]。目前市场上虎掌南星药材混乱现象严重,常见的混淆品主要为5种,分别为天南星、半夏、朝鲜南星、螃蟹七、白附子等,由于5种混淆品与虎掌南星均来自同一科,即天南星科,具有相近的生源关系,正品与混淆品的鉴别存在一定难度[5]。目前文献采用近红外光谱技术、性状、显微方法鉴别虎掌南星及其混淆品天南星[6-7],采用DNA、性状、显微方法鉴别虎掌南星及其混淆品半夏和水半夏[8-10],尚未见鉴别虎掌南星与其5种混淆品的相关报道。为解决虎掌南星药材市场混乱现象,本文对虎掌南星及其5种混淆品的性状、薄层鉴别进行研究,建立同时区分药材真伪的鉴别方法。
1.1 仪器 KQ-250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);202-1型电热恒温鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司);ZF-2型三用紫外仪(上海市安亭电子仪器厂)。
1.2 材料 硅胶G(薄层层析用,青岛海洋化工有限公司分厂;羧甲基纤维素钠(批号:20141128,中国医药集团上海化学试剂公司);甲醇(批号:20160512,上海市科密欧化学试剂有限公司);石油醚(批号:20150901,天津市富宇精细化工有限公司);三氯甲烷(批号:20141212,沈阳经济技术开发区试剂厂),试剂均为分析纯。
虎掌南星与5种混淆品均由安国杏林药材公司收集提供,由辽宁中医药大学中药鉴定教研室张慧教授鉴定。见表1。
表1 药材来源
2.1 性状鉴别
2.1.1 鉴别方法 取虎掌南星和天南星、螃蟹七、半夏、白附子、朝鲜南星等5种混淆品,按照药材的形状、大小、颜色、断面、气味等分别进行鉴别。
2.1.2 性状鉴别 特征对虎掌南星和天南星、螃蟹七、半夏、白附子、朝鲜南星等混淆品的性状特征进行了归纳总结。结果显示,虎掌南星与5种混淆品在气味特征上均有麻辣味,基本相似,无法区分;在断面特征上,除螃蟹七无粉性、角质状外,虎掌南星和其他4种混淆品均为色白粉性;在表面特征上,除白附子有7~8条环状节,中心无凹陷的茎痕外,虎掌南星和其他4种混淆品均有凹陷茎痕和周围有麻点状根痕;在颜色特征上,仅螃蟹七颜色较深,为淡黄棕或绿黑色,其他药材颜色均为淡黄色;在形状特征上,除虎掌南星和螃蟹七有“形如虎掌”外,其他4种混淆品均无此特征,虎掌南星的“形如虎掌”是由主块茎及多数附着的小块茎组成,而螃蟹七有“形如虎掌”是由主块茎及周边的球状侧芽组成。综合虎掌南星和其他5种混淆品的性状特征,发现以“形如虎掌”为鉴别要点可区分虎掌南星和天南星、半夏、白附子、朝鲜南星4种混淆品,但无法区分螃蟹七,考虑到虎掌南星断面色白粉性,而螃蟹七断面为无粉性角质状,为此通过断面可区分虎掌南星和螃蟹七。基于上述,确定虎掌南星与5种混淆品的性状鉴别要点为“形如虎掌,断面色白粉性”。见表2。
表2 虎掌南星及其5种混淆品主要性状特征
2.2 薄层鉴别
2.2.1 供试品溶液的制备取虎掌南星及其混淆品各2g,粉粹成细粉,置50mL量瓶中,加入甲醇30mL,超声提取30min,放冷,滤过,滤液浓缩至1mL,作为供试品溶液。
2.2.2 鉴别试验 吸取上述虎掌南星及5种混淆品的供试品溶液,分别点于同一羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G板上,点样量20μL,以三氯甲烷-甲醇(6∶1)为展开剂[8],展开,展距15cm,取出,晾干,分别喷以10%的硫酸乙醇溶液,置105℃烘箱内约10min,取出,晾干,置紫外灯下(365nm)及日光下下检视。结果显示,在同一色谱条件,虎掌南星与其5种混淆品薄层色谱斑点有所区别,正品虎掌南星在Rf=0.48处日光下有一紫红色斑点,紫外灯下(365nm)有一蓝色荧光斑点,而其他5个混淆品均未见此斑点,可见,此斑点可用于正品和混淆品的鉴别。结果见图1。
3.1 提取溶剂的选择 曾采用乙酸乙酯、三氯甲烷、正丁醇、甲醇、石油醚分别提取虎掌南星及其5种混淆品,制成不同极性的供试品溶液,进行薄层色谱试验,结果发现仅有甲醇提取溶液中可检测到具有鉴别意义的斑点,可将药材正品与混淆品区分开,而其他乙酸乙酯、三氯甲烷、正丁醇、石油醚的薄层图谱正品与混淆品基本相似,为此未对其进行深入研究。
3.2 展开剂条件的选择 曾采用三氯甲烷-甲醇(9.5∶0.5)[9]、三氯甲烷-甲醇(6∶1)、三氯甲烷-甲醇(4∶2)、三氯甲烷-甲醇(5∶3)、三氯甲烷-甲醇-水(20∶1∶0.8)、三氯甲烷-甲醇-水(20∶2∶1)、正丁醇-冰醋酸-水(8∶3∶1)[11]等为展开剂进行薄层色谱试验。结果显示,仅有三氯甲烷-甲醇(6∶1)色谱斑点清晰,展开良好,可将虎掌南星及其5种混淆品区分开。
采用性状鉴别和甲醇提取液的薄层色谱方法可将虎掌南星及其天南星、螃蟹七、半夏、白附子、朝鲜南星等5种混淆品区分开。其中性状鉴别的关键要点为天南星同时具有“形如虎掌,断面色白粉性”两个特征,而其他5种混淆品则不同时具备上述特征,其中天南星、半夏、白附子、朝鲜南星四个混淆品具有“断面色白粉性”,但无“形如虎掌”特征;而螃蟹七有“形如虎掌”,但无“断面色白粉性”特征,因此鉴别天南星真伪时,两个特征必须同时具备,缺一不可。在薄层鉴别中,Rf=0.48处日光灯下呈现紫红色斑点,紫外灯(365nm)下呈现蓝色荧光斑点,两种观察条件下的薄层色谱均具有鉴别意义,此斑点在虎掌南星正品中含有,在其他5种混淆品中则无此斑点,因此通过薄层色谱方法可同时鉴别虎掌南星的真伪。虎掌南星薄层色谱中Rf=0.48处的斑点,代表含有与其混淆品不同的化学成分,该成分的化学成分结构目前尚不清楚,还有待进一步研究。
综上,本文建立的方法操作简单、重现性好、准确可靠,可以准确鉴别虎掌南星及其混淆品,建立的方法为解决虎掌南星药材市场混乱现象提供参考,为控制虎掌南星药材质量奠定基础。
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国家科技部科研行业专项(NO:201407002)。
裴文菡(1998-),女,白族,汉族,研究方向为中药学。E-mail:14778071532@163.com
张慧(1970-),女,汉族,博士,教授,主要从事中药品质评价与创新药物的研究。E-mail:syyycs@163.com
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1007-8517(2017)05-0023-02
2016-12-22 编辑:穆丽华)