鸡安卡拉病卵黄抗体的制备与治疗效果研究

李宾，吴鹏

（1.山东省博兴县畜牧兽医局 山东滨州 256500；2.安徽省东至县农业委员会 安徽东至 247200）

2015年以来，我国家禽自沿海地区逐步向内陆省份发生一起以心包积液、肝脏坏死为主要特征的急性、烈性传染病，感染所涉及的省份包括辽宁、山东、江苏、广东、河北、山西、河南、安徽、湖北等，感染所涉及的家禽包括肉鸡、蛋鸡、种鸡、肉鸭等，死亡率一般在10%～30%，严重时可达80%，已给我国养禽业造成了巨大的经济损失[1]。随着对该病病原学研究的深入，该病被确诊为由I亚群禽腺病毒引起，统一命名为安卡拉病[2]。本研究利用分离的肉鸡源I亚群禽腺病毒制备鸡安卡拉病油乳剂灭活疫苗，将其多次强化免疫高产蛋鸡后采集高免蛋，制备鸡安卡拉病卵黄抗体，并分析了卵黄抗体对人工感染I亚群禽腺病毒肉仔鸡的治疗效果，旨在为安卡拉病的综合防治提供一种经济、安全、有效的技术手段。

1 材料与方法

1.1 抗原与试验动物

肉鸡源I亚群禽腺病毒由山东省滨州畜牧兽医研究院预防兽医学与动物生物技术重点开放实验室分离 并保存；30日龄健康肉仔鸡和210日龄健康产蛋鸡均选自无I亚群禽腺病毒感染史的鸡群。

1.2 病毒的增殖

将I亚群禽腺病毒用灭菌生理盐水100倍稀释后卵黄囊途径接种7日龄SPF鸡胚，无菌收集接种48h后死亡鸡胚的卵黄液，-20℃保存备用。

1.3 灭活疫苗的制备

取-20℃保存的卵黄液1000mL，加甲醛2.0mL，置37℃灭活24h后，加吐温-80溶液40mL，混合均匀即为水相。取白油960mL，加司本40mL，混合均匀后加入硬脂酸铝40mL，高压灭菌后即为油相。将油相900mL与水相600mL混合后高速搅拌乳化，即得油包水型鸡安卡拉病灭活疫苗，分装成100mL/瓶，4℃保存备用。

1.4 蛋鸡的免疫

利用鸡安卡拉病灭活疫苗免疫210日龄健康产蛋鸡50只，胸部肌肉注射疫苗1.0mL/只，14d后按照上述方法进行二免，二免14d后进行三免，三免7d后收集鸡蛋。

1.5 卵黄抗体的制备

利用0.05%百毒杀对收集的鸡蛋浸泡消毒后，灭菌纱布擦干，无菌收集卵黄液，加青、链霉素各500IU/mL，即得鸡安卡拉病卵黄抗体，分装成100mL/瓶，4℃保存备用。

1.6 卵黄抗体效价的测定

采用琼脂扩散试验方法，以1.3中的灭活病毒液为检测抗原测定卵黄抗体的抗体效价。

1.7 卵黄抗体安全性检验

将卵黄抗体颈部皮下注射30日龄健康肉仔鸡10只，2.0mL/只，观察14日，注射鸡应全部健活且无临床不适反应。

1.8 卵黄抗体治疗效果试验

将40只30日龄健康肉仔鸡随机分成4组（对照组、治疗I组、治疗II组、治疗III组），每组10只鸡，各组均肌肉注射1.2中制备的病毒液0.5mL，24h后，对照组、治疗I组、治疗II组、治疗III组分别颈部皮下注射卵黄抗体0、0.25、0.5、1.0mL，隔离饲养，观察至14d，统计各组鸡的死亡数与治愈数，分析卵黄抗体不同使用剂量对人工感染I亚群禽腺病毒肉仔鸡的治疗效果。

2 结果与分析

2.1 抗体效价测定结果

采用琼脂扩散试验方法测定卵黄抗体的抗体效价达1∶64。

2.2 安全性检验结果

10只肉仔鸡全部健活，且注射部位吸收良好，食欲、精神状态良好，无不适反应。

2.3 治疗效果试验结果

如表1所示，对照组的10只肉仔鸡全部死亡，而卵黄抗体0.25、0.5、1.0mL注射剂量组的10只肉仔鸡分别死亡7、1、0只，治愈率分别达30%、90%和100%。表明当卵黄抗体的使用剂量≥0.5mL时，对I亚群禽腺病毒的感染鸡群即可产生良好的治疗作用。

表1 不同剂量卵黄抗体对人工感染I亚群禽腺病毒肉仔鸡的治疗效果

3 讨论

目前安卡拉病尚无有效的商品化疫苗和治疗药物，为有效地控制该病的流行，降低养殖经济损失，研制针对该病的预防与治疗药物已迫在眉睫。卵黄抗体（IgY）又称为卵黄免疫球蛋白，是禽类在特异性抗原刺激下由B淋巴细胞产生的血清中免疫球蛋白G（IgG）移行至卵黄中形成的多克隆抗体，具有化学性质稳定、耐碱、耐酸、耐热、易于制备、可规模化生产、成本低、安全高效等优点[3]。卵黄抗体通过被动免疫可使注射动物获得坚实的保护力，是动物疫病特异性地预防和治疗的良好生物制品，在动物疫病的综合防控中已得到了广泛应用，尤其在我国鸡传染性法氏囊、小鹅瘟等家禽急性传染病的预防和治疗方面发挥了重要作用。本研究制备的安卡拉病卵黄抗体琼扩抗体效价达1：64，0.5和1.0mL使用剂量对人工感染I亚群禽腺病毒的肉仔鸡治愈率分别达90%和100%，0.5mL的使用剂量即对安卡拉病具有良好的治疗作用，但本研究只是停留在实验室的研制与检验阶段，下一步计划将其应用于临床，查看其在临床中的应用效果，以便为我国安卡拉病的预防与治疗提供一种有效的技术手段，逐步降低我国安卡拉病的发病率，保障养禽业健康发展。■

[1] 蔡宇威，刘兰，梁雄燕，等.1例鸡安卡拉病的诊断及病原分离鉴定[J].畜牧与兽医，2016，48(12):89-91.

[2] 王龙,刘学辉,刘畅.一例肉鸡安卡拉病毒病的诊治[J].家禽科学，2016(8):33-34.

[3] 安芳兰,李菁，张荣，等.卵黄抗体在疾病防治中应用的研究进展[J].安徽农业科学，2016，44(5):68-71.