菌糠用作菌剂吸附剂的初步探索*

刘冬华，伍善东，肖 蕾，孔利华

（湖南省微生物研究院植保室，湖南 长沙 410009）

〈生理生化〉

菌糠用作菌剂吸附剂的初步探索*

刘冬华，伍善东**，肖 蕾，孔利华

（湖南省微生物研究院植保室，湖南 长沙 410009）

为了获得适合于解淀粉芽孢杆菌4-3菌液的吸附剂，分别选用麦麸、草炭、菌糠吸附解淀粉芽孢杆菌4-3发酵菌液，进行了常温下的保藏试验。结果表明，以菌糠作为吸附剂保藏效果最好，保藏14个月时，处理4的活菌数最多，为6.5×108CFU·mL-1，草炭次之，麦麸最差。

菌糠；吸附剂；保藏

菌糠（fungus chaff）是在食用菌生产过程中产生的一类废弃物。它是由食用菌菌丝在培养料中充分生长产生子实体，在子实体采收完后遗留下来的培养料残余，故而又称之为菇渣 （mushroom residue）。随着食用菌工厂化栽培的发展，产生大量菌糠，对废弃菌渣的再利用研究已成为近年研究热点。如李碧琼等[1]利用废菌渣栽培姬松茸；谈峰[2]利用木腐菌菌糠栽培双孢蘑菇；张丕奇等[3]利用黑木耳菌渣栽培黑木耳；刘明广等[4]利用杏鲍菇菌渣作为有机肥栽培雪菜；秦翠静等[5]在饲料中应用菌糠做为反刍动物的粗饲料；李胜杰等[6-7]利用芦笋杆菌渣作为有机肥栽培黄瓜和辣椒。本文分别选用菌糠、草炭和麦麸做为菌剂的吸附剂，比较了菌糠、草炭和麦麸的保藏效果，其中以菌糠作为吸附剂保藏效果最好，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）4-3，为从油菜中分离的内生菌，保藏的编号为CCTCC

1.2 培养基配方及其培养条件

培养基配方：甘露醇1.8 g、胰蛋白胨1.6 g、NaCl 0.4 g、磷酸二氢钾0.4 g、硫酸镁0.3 g、1%钼酸钠溶液0.4 mL、1%的柠檬酸铁溶液0.5 mL、1%硫酸锰溶液0.2 mL，500 mL三角瓶装量100 mL，pH7.2。培养温度32℃，转速220 r·min-1。

1.3 吸附剂的处理

将麦麸、草炭、菌糠烘干，粉碎后过40目筛。将3种吸附剂分别称取200 g分装于聚乙烯塑料袋中，每种9袋，用套环封盖后于126℃灭菌60 min。每次灭菌后需将袋中可能结块的内容物充分拍碎后再进行下一次灭菌。经反复灭菌5次后将袋内吸附剂充分拍匀后备用。

1.4 吸附菌液后的保藏和活菌计数

将发酵好的解淀粉芽孢杆菌4-3菌液，经活菌计数为2.60×109，分别按以下处理加入菌液，每个样品重复3次，用封口机密封后，将菌剂充分拍匀，常温条件下保藏。

处理1：草炭200 g、菌液100 mL；处理2：草炭200 g、菌液150 mL；处理3：草炭200 g、菌液200 mL；处理4：菌糠200 g、菌液100 mL；处理5：菌糠200 g、菌液150 mL；处理6：菌糠200 g、菌液200 mL；处理7：麦麸200 g、菌液100 mL；处理8：麦麸200 g、菌液150 mL；处理9：麦麸200 g、菌液200 mL。

将做好的各个菌液吸附剂样品，任意三选一剪开袋口，用接种铲取出，准确称取1.00 g至放了50粒玻璃珠的100 mL无菌水三角瓶中，200 r·min-1振荡30 min，吸取振荡好的菌液0.5 mL至4.5 mL无菌水中进行稀释，稀释至10-9，每次吸取前均将稀释菌液在振荡器上振荡1 min，随后从10-7、10-8、10-9各吸取0.5 mL稀释菌液于灭过菌的平皿中，每平行3皿，然后加入20 mL左右灭菌培养基（约45℃），充分摇匀，待其完全冷却后，将平皿倒置于28℃恒温箱中培养3 d～4 d，计数活菌数。每间隔1个月取样1次进行活菌计数。

1.5 保藏菌液吸附剂水分含量的测定

将保藏的各个菌液吸附剂样品，各处理随机选1袋，剪开袋口，用灭菌的接种铲取出样品，准确称取1.0 g～2.0 g样品到干净平皿中，编号，将取出的样品置于105℃电热恒温干燥箱中烘干至恒重，准确称重并记录，取完样品后马上将保藏样品封口，重复取样2次并记录结果。

2 结果与分析

2.1 吸附菌液后的保藏和活菌计数

各种菌液吸附剂样品在各保藏时期的活菌计数检测实验结果见表1。

各处理在常温阴凉处保藏的前3个月，菌剂菌数呈缓慢增加状态，在保藏3个月时达到峰值，其中以处理5的活菌数最多，为127.0×108CFU·mL-1，随着保藏时间的增加，各处理活菌数逐渐减少。保藏5个月时，处理 4的活菌数最多，为9.6×108CFU·mL-1；当保藏14个月时，处理4的活菌数最多，为6.5×108CFU·mL-1，当菌剂水分含量越低时，则菌剂菌数变化趋势越平稳。

表1 各处理不同保藏时间的活菌数Tab.1 Number of viable bacteria in the different treatments and preservation time

在菌剂的保藏过程中，活菌计数时显示麦麸最容易受到霉菌污染，菌糠则易受细菌类杂菌污染（原因不详）。在保藏14个月时，以麦麸作为吸附剂的处理7～处理9，因为霉菌太多而没有进行活菌计数。

解淀粉芽孢杆菌4-3发酵菌液分别经菌糠、草炭和麦麸这三种吸附剂吸附后，经过14个月的保藏试验，进行综合评价后确定菌糠做为吸附剂的保藏效果最好，草炭次之，麦麸最差，菌糠用作解淀粉芽孢杆菌4-3的吸附剂是完全可行的。

2.2 各处理水分含量的测定

各处理水分含量的差异除了由添加的菌液量不同造成的，还可能是由于封口的套环盖留有一小口，具一定的透气性，在灭菌时有蒸汽进入造成。结果显示麦麸最容易吸水，菌糠次之，草炭最不易吸水，各处理水分含量见表2。

菌剂的含水量（菌液添加量）与菌数的变化呈现含水量越少菌数变化越稳定的趋势。可以在保证菌剂活菌数量的前提下，尽可能降低菌剂含水量，会更有利于菌剂的保藏。

表2 各处理的水分含量Tab.2 Moisture content of the different treatment

3 讨论

试验结果表明菌糠是1种良好的吸附剂，可以用作菌剂、菌肥吸附剂进行下一步的试验。

解淀粉芽孢杆菌4-3菌液使用菌糠吸附后，3个处理在常温保藏14个月后的活菌数与保藏初始时的活菌数变化不大，均可达108CFU·mL-1以上，其中处理4活菌数变化与保藏初始时的活菌数基本相当，说明菌糠作为吸附剂的稳定性很好。吸附剂的稳定性与菌液的添加量（菌剂含水量）密切相关，它们之间的相关性有待于进一步研究。

[1]李碧琼，陈政明，凌龙振，等.利用废菌渣栽培姬松茸优良菌株的筛选试验[J].中国食用菌，2016，35（5）：9-11.

[2]谈峰.不同木腐菌菌糠对双孢蘑菇生长和产量的影响[J].中国食用菌，2016，35（5）：12-16.

[3]张丕奇，戴肖东，韩增华，等.黑木耳菌渣再利用栽培黑木耳试验[J].食用菌，2016，38（4）：24-25.

[4]刘明广，陈毛华，丁寅寅，等.杏鲍菇菌渣有机肥栽培雪菜试验[J].食用菌，2016，38（3）：67-68.

[5]秦翠静，程书梅，廉红霞，等.菌糠在饲料中的应用研究[J].食用菌，2016，221（2）：5-6.

[6]李胜杰，魏云辉，胡中娥，等.芦笋杆菌渣有机肥在黄瓜栽培上的应用效果[J].中国食用菌，2016，35（2）：28-31.

[7]魏云辉，李胜杰，胡中娥，等.富硒芦笋秆菌渣有机肥在辣椒上的应用研究[J].食用菌，2016，38（2）：79-82.

Study on Fungus Chaff Used as Inoculants Adsorbent

LIU Dong-hua,WU Shan-dong,XIAO Lei,KONG Li-hua
(Hunan Institute of Microbiology,Changsha 410009,China)

In order to obtain the optimal adsorbent of Bacillus amyloliquefaciens 4-3,the wheat bran,peat and mushroom substrate were separately used as adsorbent of B.amyloliquefaciens 4-3,meanwhile,the preservation test was performed at room temperature.The results showed that the best adsorbent was the mushroom substrate in the preservation test,and the viable count of treatment 4 was the best among them,which was 6.5×108CFU·mL-1.The second one was peat and the worst one was wheat bran.

fungus chaff;adsorbent;preservation

S646.9

A

1003-8310（2017）02-0030-03

10.13629/j.cnki.53-1054.2017.02.009

湖南省科技计划项目（2015NK3056）。

刘冬华（1956-），男，本科，副研究员，主要从事植物保护与肥料研究。E-mail:505212109@qq.com

**通信作者：伍善东（1978-），男，本科，工程师，主要从事植物保护与微生物肥料研究。E-mail:1059995305@qq.com

2017-01-23M2014320。