肝细胞癌中RhoE和基质金属蛋白酶-9的表达及意义

丁 峰 杨 夙 王 巍 白 光

(锦州医科大学附属第一医院普外肝胆微创外科，辽宁 锦州 121001)

肝细胞癌中RhoE和基质金属蛋白酶-9的表达及意义

丁 峰 杨 夙1王 巍 白 光

(锦州医科大学附属第一医院普外肝胆微创外科，辽宁 锦州 121001)

目的 探讨肝细胞癌中RhoE和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达及其临床意义。方法 57例肝细胞癌患者的临床资料及术后蜡块组织作为观察组，选择距肿物边缘>3 cm的正常肝组织32例作为对照组。应用免疫组化方法检测两组RhoE和MMP-9的表达。结果 两组RhoE和MMP-9的表达有统计学差异。观察组RhoE和MMP-9的表达与肿瘤的脉管累犯密切相关，RhoE的表达与肿瘤数量密切相关，MMP-9的表达与转移密切相关。相关分析显示观察组RhoE和MMP-9具有负相关性。结论 肝细胞癌中RhoE低表达、MMP-9高表达对肿瘤的形成和进展有一定作用。RhoE和MMP-9可能有一定的协同作用。

肝细胞癌；RhoE；基质金属蛋白酶(MMP)-9

肝细胞癌的病因涉及因素较多，转移相关基因在肿瘤中常高表达〔1〕。RhoE为Rnd家族成员之一，参与细胞调节骨架重组、细胞生长、增殖和转移〔2，3〕。RhoE能够抑制RhoA下游重要效应因子Rho相关激酶1活性，从而抑制细胞骨架蛋白重组，影响细胞的极化和迁移能力〔3〕。基质金属蛋白酶(MMP)-9在恶性肿瘤中常高表达，尤其在高转移潜能的肿瘤中表达更高〔4〕。MMP-9高表达可以引起基底膜的溶解和细胞外基质的降解，使肿瘤转移的屏障消失，引发肿瘤细胞迁移〔5〕。本文拟探讨肝细胞癌中RhoE和MMP-9的表达及其临床意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2013年1月至2015年12月我院诊断为肝细胞癌并行手术治疗的患者57例作为观察组。术后均常规留取蜡块组织，年龄40～71岁，平均(56.7±6.9)岁，其中男32例，女25例。均按WHO中的标准明确并分型。选择上述病例中距肿物边缘>3 cm的正常肝组织32例作为对照组，年龄43～65岁，平均(54.5±5.8)岁，其中男16例，女16例。两组常规资料无明显差异，具有可比性。

1.2 RhoE和MMP-9的检测 RhoE和MMP-9的检测均应用免疫组化SP法，行二氨基联苯胺(DAB)染色，操作均由同一技师完成，严格按实验步骤进行，做好质控工作。

1.3 RhoE和MMP-9结果的判定 RhoE和MMP-9阳性均定位于细胞质中，以染成浅黄色至深棕色为阳性细胞，先在低倍镜下选择上皮细胞染色集中的区域(热点区)，选择3个400倍视野计算阳性率，取平均值，以阳性细胞<10%为阴性，≥10%为阳性。

1.4 统计学处理 应用SAS6.12软件进行χ2检验或线性相关分析。

2 结 果

2.1 两组RhoE和MMP-9阳性率的比较 观察组和对照组RhoE〔23例(40.35%)、30例(93.75%)〕和MMP-9的阳性率〔35例(61.40%)、1例(3.13%)〕差异显著(χ2=24.260 8,28.297 0,均P<0.000 1)。

2.2 观察组中不同临床特征患者RhoE和MMP-9表达阳性率的比较 观察组RhoE和MMP-9的表达与肿瘤的脉管累犯密切相关，RhoE的表达与肿瘤数量密切相关，MMP-9的表达与淋巴结转移密切相关。见表1。

表1 观察组中不同临床特征患者RhoE和 MMP-9表达阳性率的比较〔n(%)〕

2.3 观察组RhoE和MMP-9的相关性 RhoE和MMP-9呈负相关(r=-0.45，P=0.045 1)。

3 讨 论

肝细胞癌常见的病因学因素包括肝炎病毒的感染。肿瘤形成后其大体特点随着肿瘤的大小和有无肝硬化而变化〔6〕。多数与肝硬化有关的肿瘤趋向于呈膨胀性生长，伴有纤维包膜和肿瘤内分隔，而无肝硬化的肿瘤趋向于呈巨块型和无包膜。不同程度的浸润性生长、门静脉瘤栓和肝内转移在进展期肿瘤很常见。部分情况下，大量的微小肿瘤结节广泛分布于肝。肝细胞癌的一个特点是侵犯血管，尤其是门静脉，肝外转移多为血行性的，肺是最常受累的器官，局部淋巴结转移常见，而远处淋巴结则很少累及。因此探讨与转移相关蛋白的表达有一定价值〔7〕。MMPs家族是与转移相关的一组基因和表达的蛋白，是一组锌离子依赖性内肽酶，其在正常机体中表达较少或低表达，当病变发生时，尤其是进展期肿瘤性病变形成时，家族中的部分成员分泌增多，几乎能降解细胞外基质的所有成分〔8〕。MMP-9作用主要是针对Ⅳ型胶原、层黏连蛋白和弹性硬蛋白等，使细胞外基质的结构和形态出现明显变化，使肿瘤转移的屏障受到破坏，肿瘤细胞易于迁移〔9〕。也有研究认为MMP-9的作用可能更加具有多元性，如对细胞增殖的调控、对血管生成因子的激活、对间质血管生成的促进作用等〔10〕。RhoE又称为Rnd3，是Rho家族的主要成员之一，其分子结构与其他Ras鸟苷酸结合蛋白相同，只有一条多肽链，属于单体G蛋白，RhoE的氨基酸序列高度保守，但是32、79、81位点的氨基酸序列与传统的小G蛋白相比发生突变，并且含有较长的羧基端和氨基端〔11，12〕。近来研究认为RhoE可以诱导细胞发生改变、抑制细胞的增殖、调节细胞的迁移能力及细胞凋亡〔13〕。也有研究认为RhoE可以调节细胞的分化过程〔14〕。

RhoE在肿瘤中低表达，起抑癌基因的作用，RhoE可能通过对肝细胞癌的增殖进行抑制而发挥作用。研究认为RhoE虽然可以结合GTP，却并没有GTP 酶活性从而不能水解GTP，这种特性赋予RhoE许多不同于Rho蛋白家族其他成员的独特功能〔15〕，例如通过调控肌动蛋白细胞骨架重组来增强细胞的运动能力和肿瘤细胞的迁移及侵袭能力〔16，17〕。而MMP-9高表达，起癌基因样的作用，对肿瘤的侵袭有促进作用。本文结果提示RhoE和MMP-9参与肿瘤的脉管侵犯及脉管播散，促进肿瘤进展。RhoE与肿瘤的播散有关，尤其是肝内的播散及肝内的侵袭性生长相关。MMP-9是转移相关的促进蛋白，促进肿瘤进展。本文结果提示RhoE和MMP-9具有一定的协同作用，也提示RhoE在正常肝组织中高表达时，可以在一定程度上抑制MMP-9的分泌，当肿瘤形成时，RhoE表达下降或丢失，对MMP-9分泌的抑制作用可能减弱或直接促进肿瘤细胞产生MMP-9，进而使细胞外基质形成降解，肿瘤转移的屏障减弱或消失，细胞易于迁移，形成转移灶〔18〕。MMP-9高表达时还可以引起间质的血管生成，使肿瘤的血供丰富，肿瘤细胞繁殖能力增强，肿瘤细胞生长活跃〔19，20〕。

1 李明意，姚金科，周晓华，等.MKK-4、MMP-9基因的表达与原发性肝癌肿瘤侵袭转移的关系〔J〕.中国病理生理杂志，2006；22(8)：1480-3.

2 曾庆安，吕宝军，王晓鸿，等.RhoE在乳腺癌中的表达及与Kiss-1的相关性〔J〕.中华临床医师杂志：电子版，2011；5(2)：227-30.

3 Zhou J，Li K，Gu Y，etal.Transcriptional up-regulation of RhoE by hypoxia-inducible factor (HIF)-1 promotes epithelial to mesenchymal transition of gastric cancer cells during hypoxia〔J〕.Biochem Biophys Res Comm，2011；415(2)：348-54.

4 魏启幼，吴元清，范松青，等.MMP-2，MMP-9，TIMP-1和TIMP-2在肝癌中原位表达〔J〕.湖南医科大学学报，2003；28(3)：212-6.

5 陈 嫱，孙保存.Twist1、MMP-2及MMP-9在肝细胞肝癌血管生成中的表达及意义〔J〕.天津医药，2011；39(3)：193-5.

6 张树辉.肝细胞癌前病变及高分化肝细胞癌的病理诊断与鉴别诊断〔J〕.诊断病理学杂志，2008；15(1)：63-7.

7 文 明，蒋明东，彭志平，等.肝细胞癌治疗后肝内复发的临床病理特征〔J〕.重庆医科大学学报，2006；31(2)：268-71.

8 Cheng JC，Chou CH，Kuo ML，etal.Radiation-enhanced hepatocellular carcinoma cell invasion with MMP-9 expression through PI3K/Akt/NF-kappaB signal transduction pathway〔J〕.Oncogene，2006；25(53)：7009-18.

9 Chen JS，Wang Q，Fu XH，etal.Involvement of PI3K/PTEN/AKT/mTOR pathway in invasion and metastasis in hepatocellular carcinoma：Association with MMP-9〔J〕.Hepatol Res，2009；39(2)：177-86.

10 Qing Zhang，Chen X，Zhou J，etal.CD147，MMP-2，MMP-9 and MVD-CD34 are significant predictors of recurrence after liver transplantation in hepatocellular carcinoma patients〔J〕.Cancer Biol Ther，2006；5(7)：808-14.

11 殷红专，李 英，吕 赤，等.RhoE/Rnd3蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义〔J〕.现代肿瘤医学，2010；18(8)：1548-50.

12 王豪杰，施巩宁，赵 辉，等.食管鳞癌中RhoE与EGFR表达及相关性的研究〔J〕.中国医学创新，2015；12(6)：5-7.

13 Zhou JF，Yang JJ，Li Md K，etal.RhoE is associated with relapse and prognosis of patients with colorectal cancer〔J〕.Ann Surg Oncol，2013；20(1)：175-82.

14 Zhao H，Yang J，Fan T，etal.RhoE functions as a tumor suppressor in esophageal squamous cell carcinoma and modulates the PTEN/PI3K/Akt signaling pathway〔J〕.Tumour Biol，2012；33(5)：1363-74.

15 高 鸿，陈 勇，刘 颖，等.RhoE基因与肿瘤〔J〕.河北医药，2011；33(10)：1555-6.

16 朱亚杰，许 峰，周继陶，等.肺癌的乳腺癌组织中RhoE的表达及其临床意义〔J〕.中国肺癌杂志，2008；11(1)：85-8.

17 封 斌，李 凯，任 贵，等.RhoE促进胃癌转移及分子机制〔J〕.科学技术与工程，2010；10(31)：7631-4.

18 Yamamoto H，Vinitketkumnuen A，Adachi Y，etal.Association of matrilysin-2(MMP-26) expression with tumor progression and activation of MMP-9 in esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Carcinogenesis，2004；25(12)：2353-60.

19 Li HC，Cao DC，Liu Y，etal.Prognostic value of matrix metalloproteinases (MMP-2 and MMP-9) in patients with lymph node-negative breast carcinoma〔J〕.Breast Cancer Res Treat，2004；88(1)：75-85.

20 Struckmann K，Mertz K，Steu S，etal.pVHL co-ordinately regulates CXCR4/CXCL12 and MMP2/MMP9 expression in human clear‐cell renal cell carcinoma〔J〕.J Pathol，2008；214(4)：464-71.

〔2015-12-11修回〕

(编辑 杜 娟)

白 光(1959-)，男，教授，主要从事微创肝胆胰脾手术研究。

丁 峰(1981-)，男，博士在读，主治医师，主要从事微创肝胆胰脾手术研究。

R735.7

A

1005-9202(2017)04-0916-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.04.059

1 心脑血管外科