流式细胞术检测多发性骨髓瘤患者免疫表型的意义

邓银芬，袁红建，孙善芳

（泰州市第二人民医院血液科，江苏 泰州 225500）

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2014年9月～2016年3月收治的多发性骨髓瘤患者40例作为本研究观察组，其中男性26例，女性14例，年龄57～87岁，平均年龄（69±9）岁，经临床诊断与张之南等主编的《血液病诊断及疗效标准》相符。血清免疫固定电泳检查结果：40例患者中IgG型20例，IgA型14例，IgD型4例，轻链型2例。按照Durie-Salmon分期诊断标准：IA组2例，IIA组5例，IIB组4例，IIIA组23例，IIIB组6例。按照ISS分期诊断标准：I期8例，II期13例，III期19例。

1.2 方 法

1.2.1 试剂与仪器

流式细胞仪采用美国BD公司提供的FACScantoⅡ多参数流式细胞仪，鼠抗人单克隆抗体CD19、CD56、CD117、CD38、CD138、CD13、CD33、CD20、CD34以及红细胞裂解液均由BD公司生产。

1.2.2 治疗过程

所有MM患者入院后均给予对症支持治疗，并采用多参数流式细胞术检测其免疫表型。所有患者给予硼替佐米或沙利度胺为基础的化疗方案，并对患者进行随访，化疗4疗程后评估疗效。

1.2.3 多参数流式细胞术检测

无菌操作下对患者进行骨髓穿刺，抽取骨髓液2 mL并给予肝素抗凝，将抗凝后的肝素用PBS制成5-10×106/mL的单细胞悬液。将各装有20μL鼠抗人单克隆抗体CD19、CD56、CD117、CD38、CD138、CD13、CD33、CD20、CD34的流式管中加入100 μL骨髓单细胞悬液常温孵育20 min，孵育时需进行避光处理。而后加入氯化铵溶血剂混匀并静置，室温避光静置15 min后将呈透亮的液体离心10 min，转速为1500 r/min。去除上清后加入PBS重悬，完成后上流式细胞仪检测。

1.3 统计学方法

本研究中所有资料均采用IBM公司SPSS 17.0专业统计分析软件进行分析，计数资料以例数（n）、百分数（%）表示，采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 MM患者瘤细胞表面抗原表达情况

采用流式细胞术对40例MM患者进行免疫表型分析，其中40例（40/40，100%）CD38+患者、38例（38/40，95%）患者、29例（29/40，72.5%）患者5例（5/40，12.5%）患者3例（3/40，7.5%）、患者2例（2/40，5%）、患者9例（9/40，22.5%）。

2.2 MM患者不同分期的免疫表型特点

具体见表1。

表1 不同ISS分期患者免疫表型特点

2.3 MM患者免疫表型CD56、CD117、CD28与疗效反应的关系

结束4个疗程的连续治疗后，需要对患者PR以上的疗效反应率进行科学的评估，各指标和疗效反应关系之间的比较主要利用的是x2检验。结果显示，CD56阳性的29例患者中26例达PR以上疗效，CD56阴性的11例患者中4例达到PR以上疗效，CD56阳性患者的疗效明显优于CD56阴性患者（P＜0.05）；CD117阳性的3例患者中1例达到PR以上疗

多发性骨髓瘤（MM）是一种高度异质性的血液系统恶性肿瘤，以骨髓内单克隆恶性浆细胞增生伴多克隆免疫球蛋白或轻链增多为特征，约占血液系统恶性肿瘤的10%[2]。近年来由于新药的出现和治疗方案的改进，MM患者的平均生存期得以延长，但仍有部分患者对治疗的反应不理想，所以对患者进行准确的预后判断，根据预后分组采取个体化治疗尤为重要。近年来，在诊断和预后评估血液系统恶性肿瘤的过程中，多参数流式细胞免术的疫表型分析的应用越来越广泛，但此类研究报道较少，且尚需临床数据加以验证，本文通过多参数流式细胞术检测多发性骨髓瘤患者的免疫表型，在此基础上深入研究和分析了这些患者骨髓瘤细胞免疫表型表达率、与临床分期、对化疗反应和预后之间的关系，旨在为MM患者的预后评估及个体化治疗提供参考，现将研究情况汇报如下。效，CD117阴性的37例患者有29例达到PR以上疗效，CD117阴性患者的疗效明显优于CD117阳性患者（P＜0.05）；CD28阳性的9例患者中4例达到PR以上疗效，CD28阴性的31例患者中16例达到PR以上疗效，CD28阳性和CD28阴性患者的疗效反应无统计学差异（P＞0.05）。

3 讨 论

多发性骨髓瘤是B细胞起源的浆细胞恶性克隆性增生性疾病，发病人群以中老年患者为主，其临床表现及预后具有高度异质性。流式细胞术是一种常规的MM诊断技术，能够将肿瘤性浆细胞的免疫表型特征进行准确的鉴别，在此基础上可以将骨髓瘤细胞免疫表型的异质性揭示出来。不同的免疫表型特征和患者预后是否有直接关系，是当下研究骨髓瘤免疫表型的热门话题，本身所存在的争议比较多。本文对我院的40例MM患者进行了流式细胞检测，通过对不同分期患者免疫表型特点的科学分析，希望可以对免疫表型与不同分期及疗效的相关性进行充分的了解。

CD56是一种介导血细胞粘附的粘附分子，属于免疫球蛋白超家族，在骨髓瘤细胞与其基质的相互作用中有重要意义，有研究表明CD56与MM的病情发展程度具有相关性[4-5]。Chang等学者研究证实接受常规化疗的CD56-患者较CD56+患者预后差，但接受大剂量化疗和自体骨髓移植的患者预后与CD56的表达与否相关性仍未明确，且CD56+与CD56-MM患者在总生存期及无进展生存期上无显著差异[6]。我们的研究中MM患者的CD56表达阳性率达75.5%，在不同分期中CD56阳性表达率无统计学差异，CD56阳性患者的疗效明显优于CD56阴性患者（P＜0.05），提示CD56阴性的患者可能预后较CD56阳性患者差。CD117是一种能有效介导络氨酸酶抑制剂抑制作用的跨膜蛋白受体，由c-kit原癌基因编码，是一种与肿瘤密切相关的标志性分子，某些研究表明，CD117可能是预后较差风险类别的代表[7]，或者CD117+MM患者预后良好[8]。研究结果的差异可能与样本量以及治疗的异质性有关。我们的研究表明，CD117+患者常见于更严重的临床分期，常有肿瘤高负荷表现，对化疗敏感性较差，提示可能预后较差，但我们的样本量较少，还有待于临床累积病例数进一步验证。CD28作为T淋巴细胞的一种表达抗原，也是T细胞在活化过程中所产生的重要抗原之一。CD28在正常的浆细胞中不表达，其过表达与疾病进展和复发有关[9]。研究发现，骨髓瘤细胞的高增殖性、肿瘤的侵袭性和治疗的失败在一定程度上决定了CD28的表达，并且与MM的非二倍体也有很多关系，这也是预后差的指标之一[10-11]。我们的研究表明，CD28+患者更常见有肾功能损害、多发骨质破坏，但CD28+患者及CD28-患者对化疗的有效率无明显统计学差异。总之，在多发性骨髓瘤的诊断中多参数流式细胞术获得较为广泛的应用，正常与异常浆细胞金额图通过过检测免疫表型的差异来区分，评价瘤细胞表面异常抗原表达率与临床特征的关系，为MM的诊断、鉴别诊断、病情的评估、预后的判断等提供了更多的参考依据。而我们的研究病例数尚少，尚有待于临床累积更多的数据来验证结果。

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