甘草多糖提取纯化工艺研究进展

姜莉 林霖

哈药集团世一堂制药厂 150000

甘草多糖提取纯化工艺研究进展

姜莉 林霖

哈药集团世一堂制药厂 150000

目的：通过对甘草中提取甘草多糖的工艺进行研究，对其提取的最佳的工艺条件进行判断。方法：使用单因素试验来对甘草多糖在提取时产生的影响进行判断，对实验实施正交优化手段。结果：甘草多糖在90摄氏度的提取温度时，提取耗费的时间为30分钟，料液的配比为1：30g/g，提取的次数为2次，乙醇浓度的最佳醇沉条件为82%，絮凝耗费的时间为12.5小时。结论：不同的因素对甘草多糖提取的纯度的影响程度不同，影响程度最大的是温度，其次是料液比、提取时间、提取次数对于提取的纯度影响最小。

甘草多糖；提取纯化工艺；进展

对甘草进行提纯，提出的一种α-D-吡喃多糖就是我们所说的甘草多糖。甘草是一种比较常见的草本植物，又被称为国老、粉草、灵通。一般外皮为红褐色，有一些甘草也呈现出暗褐色，内部为黄色，在我国的分布范围比较广，是一种既可食用也可用来制药的多功能植物。我国在近几年对于甘草多糖的研究进入了一个新的发展阶段，更加重视其提取的精度。本文对从各种客观因素对于从甘草中提取甘草多糖的纯度与提取率的影响程度出发，进行试验，希望可以给广大制药同行参考的价值。

1 材料与方法

1.1 材料

甘草：市售；甲醇、无水乙醇、苯酚（以上均为分析纯），硫酸，甲醇

1.2 仪器与设备

YP 型电子天平、LSY 电热恒温水浴锅、DG404 真空电热干燥箱、LG16-W 离心机、QL-901 微型漩涡混合器。

1.3 方法

1.3.1 测定方法

采用苯酚-硫酸比色法测定甘草多糖。

1.3.2 测定原理

甘草多糖与浓度硫酸发生反应，在高温的环境中发生水解的现象，产生多糖这种物质之后，以最快的速度脱水成为糠醛的衍生物，由于实验中使用了浓度硫酸，使得实验环境中酸度较大，糠醛的衍生物与苯酚也发生反应，起到显色的效果，产生了橙黄色的新物质，糖浓度C与吸光度A值在490nm的波长处呈现出线性的关系，实验人员可以通过比色法对甘草多糖的含量进行测定。

1.3.3 配置标准溶液

将实验之前准备好的呈现干燥状态的葡萄糖通过天平称取20毫克，将称好的葡萄糖放置在容量瓶之中，容量瓶的容量为500毫升，再将水加入到容量瓶之中，将葡萄糖稀释，当稀释的溶液达到刻度线的位置，再将容量瓶摇晃均匀，取得标准溶液。

1.3.4 配置苯酚溶液

使用天平称取苯酚药品80g，放置在容量瓶中，容量瓶的容量与配置标准溶液的容量瓶相同，加入20克水进行稀释与溶解，保证得到的苯酚溶液为百分之八十的浓度，将苯酚溶液存放在冰箱中保存，避免光照。采取同样的方法再配置出浓度为百分之六的溶液同样放置在冰箱中进行隔离保存。

1.3.5 对各种客观条件因素的测定

测定料液配比。使用天平称取粉末状的甘草 5份，每份的质量为1g，将这五份甘草分别放置在容量为250毫升的烧瓶中，再依次加入35、30、25、20倍的纯净水，保持水浴的温度为100摄氏度，回流提取的时间为一小时，浸提溶液达到100毫升时就可以对烧瓶中的水进行定容，从中取出2毫升放置在容量为10毫升的试管中，通过硫酸-苯酚法进行吸光度的测定。

提取温度影响。称取5份甘草粉末各1.0 g，置于250 m L 圆底烧瓶中，各加入15倍水，分别在 40、50、60、70、80、90、100 ℃水浴下，回流提取 1 h，离心分离（5 000 r/min，15min），浸提液至100mL容量瓶蒸馏水定容，取2 mL于10mL试管中用硫酸-苯酚法测其吸光度值。

称取5份甘草粉末各1.0 g，置于250 mL 圆底烧瓶中，各加入15倍水，70℃水浴下，分别回流提取0.5、1、1.5、2、2.5、3 h，离心分离（5 000 r/min，15 min），浸提液至100mL容量瓶蒸馏水定容，取2mL于10m试管中用硫酸-苯酚法测其吸光度值。

称取5份甘草粉末各 1.0 g，置于250 mL圆底烧瓶中，各加入 15倍水，70 ℃水浴下，分别回流提取 1、2、3、4、5、6、7、8 次，每次提取 0.5 h，离心分离（5 000 r/min，15 min），浸提液至 100 m L容量瓶蒸馏水定容，取 2 m L于 10 m L 试管中用硫酸-苯酚法测其吸光度值。

按照最佳提取工艺进行提取，然后再用醇沉最佳条件进行纯化，得出甘草多糖的提取率

2 结果

取粉碎样品，提取条件为 100 ℃、1 h、提取次数1 次，料液比分别为 1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35 g/g。甘草多糖提取量随料液比的增大而增加。当料液比大于 1∶30 g/g 时，甘草多糖提取量缓慢降低。

取粉碎样品，提取条件为料液比 1∶15 g/g、提取时间 1 h、提取次数 1 次，温度分别为 40、50、60、70、80、90、100 ℃。提取温度由 40 ℃增加到 70 ℃时，甘草多糖提取量随温度的提高而上升，当温度超过 70 ℃以后，继续提高温度，甘草多糖的提取量缓慢下降。

取粉碎样品，提取条件为料液比 1∶15g/g、温度 70 ℃、提取次数为 1 次，提取时间分别为 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h。在提取时间 1 h 时提取率较高，随着时间的延长，提取率下降。

取粉碎样品，提取条件为料液比 1∶15g/g、温度 70 ℃，提取时间为 0.5 h、提取次数分别为 1、2、3、4、5、6、7、8 次。随着提取次数的增加，提取率不断提高，当增加到 6 次后，提取率缓慢下降。

根据甘草多糖提取正交试验及方差分析结果，单因素对提取效果的影响顺序为：温度＞料液比＞提取时间＞提取次数，其中温度具有显著性，料液比和提取时间较显著，提取次数不显著；甘草多糖提取最佳工艺条件为，即温度 90 ℃，料液比 1∶30 g/g，时间0.5 h，提取次数2次。按最佳条件进行验证，甘草多糖提取率为59.80 %

根据醇沉条件正交试验及方差分析结果，单因素对醇沉条件的影响顺序为：乙醇浓度＞絮凝时间＞醇沉温度，其中乙醇浓度具有显著性，絮凝时间和醇沉温度较显著，，即乙醇浓度82 %，絮凝时间 12.5 h，室温下醇沉。

3 讨论

甘草多糖属于一种天然性的植物多糖，能够有效地抵抗病毒以及肿瘤，还能提高人体的免疫力，常被用于制药之中，甘草多糖有比较好的抵抗病毒效应，能够抑制艾滋病毒，甚至可以达到高达百分之三十以上的抑制率，为了使甘草多糖能够发挥出更多的药效，对于甘草多糖的提取以及纯化工作就极其重要了，本文分析了我国的提取与纯化甘草多糖工艺的手段，能够在一定程度上提升对于甘草的提纯水平。甘草多糖能够对细胞的各种生面现象进行调节，对于免疫细胞的调节工作有着独特的效果，主要功能为保健，能够加强免疫细胞之间的传递以及感受，不仅仅能够作用于药品，还能在食品以及工业等多种领域中发挥作用。

研究表明，甘草多糖可作为抗病毒制剂，影响病毒合胞体的形成，对牛艾滋病病毒（BIV）具有一定的抑制作用，抑制率为36.2%；对腺病毒Ⅲ型（AdVⅢ）和柯萨奇病毒（CBV3）具有明显的抑制与直接灭活作用，可用于治疗和预防病毒感染。甘草多糖具有免疫增强和肿瘤抑制作用，能促进小鼠血清溶血素IgM和IgG的生成，提高抗体生成细胞水平和胸腺、脾脏指数，增强巨噬细胞的吞噬活性，抑制肿瘤细胞S180的生长。甘草多糖对细菌有较强的抑菌作用，其最低抑菌浓度（MIC）值分别为枯草芽孢杆菌6.25μg/mL、大肠杆菌12.5μg/mL。

[1] 孙玉敬，叶柄鸿，庞杰.多糖研究热点[J].粮食与油脂.2005（08）

[2] 石雪萍.植物多糖研究进展[J].粮食与油脂.2005（08）

[3] 王航宇，刘金荣，江发寿，赵文斌，但建明.新疆甘草多糖的超声提取及含量测定[J].基层中药杂志.2002（01）

R567.7+1

A

1672-5018（2017）02-331-1