枇杷叶多糖的分离纯化及组分鉴定

黄素华，陈秋妹，陈瑞红，洪燕萍

（龙岩学院生命科学学院，福建龙岩364000）

枇杷叶多糖的分离纯化及组分鉴定

黄素华，陈秋妹，陈瑞红，洪燕萍*

（龙岩学院生命科学学院，福建龙岩364000）

提取纯化枇杷叶多糖，并对其组分进行研究。枇杷叶多糖提取液经大孔树脂除杂，醇沉后干燥即得枇杷叶可溶性总多糖。经DEAE-52纤维素柱层析及Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析，得到纯化后多糖，并采用Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱测定多糖的分子量，水解多糖后采用薄层层析对枇杷叶多糖进行组分鉴定及单糖的组成比例测定。通过DEAE-52柱层析得3个枇杷叶多糖酸性组分，分别经过SephadexG-200柱层析得到3个乳白色组分，分别为PSL-1、PSL-2、PSL-3。3个组分的洗脱曲线均为单一对称峰，初步判断3个组分含有单一成分的多糖。PSL-1、PSL-2、PSL-3分子量分别约为700、500、400 kDa。经过薄层层析初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖，含量之比为1∶0.602；PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖，含量之比为1∶1.415∶1.408；PSL-3含有半乳糖和鼠李糖，含量之比为1∶1.03。

枇杷多糖；DEAE-52纤维素柱层析；Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析；分子量测定；薄层层析；单糖组分

枇杷为蔷薇科枇杷属植物，在我国有2 200多年的栽培历史，是一种传统的中药材，药用历史悠久，始载于《名医别录》，列为中品，具有清肺止咳、降逆止呕的功效，试验研究表明具有抗炎和止咳作用[1]。

枇杷叶的药用研究及应用都很普遍，许多研究集中在萜类及黄酮类成分和活性的研究上[2]，对枇杷叶多糖的研究较少。对多糖活性研究发现，多糖及其复合物与细胞的免疫调节相关[3]。初步的研究发现枇杷叶多糖具有提高免疫力及抗氧化的功能[4]，因此枇杷叶多糖应该也是枇杷叶活性成分的一个重要组成。枇杷叶多糖的初步纯化，已见报道的不多，且采用的方式为常规的除杂蛋白的方法[5]（如酶法、TCA法、sevage法或两种方法结合使用等），以及一些除色素的方法进行纯化。

ASD-7大孔吸附树脂[6]是一种非极性吸附树脂，具有表面和氢键吸附功能，树脂性能稳定。其对蛋白、黄酮和多酚类物质有很好的吸附作用，可以用于多糖的除杂，而且在部分植物中已有初步应用研究。DEAE纤维素阴离子柱可通过可吸附蛋白质、酸性多糖等离子型物质，去除杂质，而大多数的中性多糖不被吸附，通过收集流出液可以达到回收多糖去除杂质的目的。利用弱碱性树脂DEAE纤维素还可以吸附酚型化合物色素[4]，达到去除多糖中色素的作用。同时DEAE还可起到分子筛的作用。

凝胶层析又称分子排阻层析[7]，可以将混合物中不同分子量物质进行分离纯化，为多糖的纯化提供了一种温和的分离方法。因此采用葡聚糖凝胶纯化多糖能够较好的保留多糖的性质，纯化效果显著。通过已有的资料可得，枇杷叶多糖的分子量在43 000Da左右[8]，SephadexG-200分离范围在5000Da～600000Da，适用于生物大分子纯化、分子量测定，因此选用Sephadex G-200进行对枇杷叶多糖进行纯化和分子量的测定[9]。

枇杷多糖的分离纯化一般要经过提取、脱蛋白、脱酚、脱色等几个步骤才能得到精制多糖。多糖在植物体内并不是以单一的形式存在，而是大多数以其他物质结合的形式存在，水提醇沉法是现在提取粗多糖最常用的方法。而对多糖的纯化有许多方法，可以采用金属络合法、季铵盐沉淀法、部分沉淀法、甲醇分级沉淀法、亲和层析法、离子交换柱色谱法等方法进行纯化。但目前采用较多的纯化方法是DEAE-纤维素离子交换柱色谱和葡聚糖凝胶及其他凝胶柱色谱法[10]。

本文研究探讨了枇杷多糖的提取及分离纯化的方法，试验中采用大孔树脂吸附法去除枇杷粗多糖中的杂蛋白及酚性色素，用DEAE-52纤维素柱层析、Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析进行分级分离纯化，用凝胶柱测定多糖的分子量，再利用薄层层析对枇杷叶多糖的单糖的组成及组成比例进行分析，对枇杷多糖的结构作一些初步的研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 原料与试剂

枇杷叶：采自福建龙岩红坊乡果园，叶片洗净后阴干，粉碎得枇杷叶干粉。

大孔树脂ADS-7：南开大学；DEAE-52填料、福林酚试剂、考马斯亮蓝G-250：国药集团化学试剂有限公司；Sephadex G-200填料：Pharmacia进口分装；透析袋：分子截留量3 500 kDa，北京瑞达恒辉；标准葡聚糖（Biopped Dextran T-20、T-40、T-50、T-70）：Blue 2000试剂有限公司；牛血清白蛋白标准溶液：北京元亨圣马生物技术研究所；其他试剂均为分析纯。

1.1.2 仪器

UV-2000紫外可见分光光度计：尤尼柯；ALPHR 24 LD PLUS冷冻干燥机：德国Christ；FA-1004电子分析天平：上海良平仪器仪表有限公司；N-1001S旋转蒸发仪：东京理化；SHB-3循环水多用真空泵；DHL-A恒流泵：上海沪西分析仪器有限公司；BSZ-100自动部分收集器：上海沪西分析仪器厂。

1.2 多糖含量的测定—苯酚-硫酸法

采用苯酚-硫酸法[11]测定多糖含量。以葡萄糖为标准品，配制不同浓度梯度溶液，分别取1.0mL，加5%苯酚溶液1.6mL，随后加入浓硫酸7mL，40℃水浴0.5 h反应，取出冷却至室温。另取1.0mL蒸馏水同法操作，作为空白对照。测定493 nm处吸光值，绘制标准曲线。取适当浓度多糖溶液0.1mL加入0.9mL蒸馏水，摇匀，立即加入5%苯酚溶液1.6mL，摇匀，再加入浓硫酸7mL，40℃水浴0.5 h，反应结束后取出冷却到室温，于493 nm处测定吸光值。根据标准曲线计算多糖的浓度。

1.3 蛋白含量的测定—考马斯亮蓝法

采用考马斯亮蓝法[12]测定蛋白含量。配制系列浓度牛血清白蛋白标准溶液，分别取1.0mL加入5mL考马斯亮蓝试剂，震荡混匀，3min后于595 nm测定吸光值，绘制标准曲线。取样品液1mL，然后加入5mL考马斯亮蓝试剂，震荡混匀，3min后于595 nm测定吸光值。根据标准曲线得到相应的浓度。

1.4 多酚含量的测定—福林酚法

采用福林酚氧化法[13]测定多酚含量。以没食子酸为标准品，配制不同浓度溶液，分别取0.3mL不同浓度梯度没食子酸溶液，加1.5mL福林酚试剂（原液浓度为2 mol/L，稀释10倍），加1.2 mL 7.5%碳酸钠，45℃水浴15min，于760nm测定吸光值。取适当浓度的样品溶液1mL，加1.5mL福林酚试剂（稀释方法同1.3），加1.2mL 7.5%碳酸钠，45℃水浴15min，于760 nm处测定吸光值。根据标准曲线计算浓度。

1.5 枇杷粗多糖的提取及初步纯化

提取：取经工业酒精除杂后的枇杷叶干粉，沸水浸提两次，趁热过滤，将两次滤液合并，经减压浓缩得粗多糖溶液，加入体积分数95%乙醇至乙醇终浓度达85%，于4℃冰箱中静置过夜，抽滤，所得滤饼置烘箱中60℃烘24 h，烘干后滤饼研磨得粗多糖干粉，冷藏备用[14]。

ADS-7大孔树脂吸附法初步纯化[6]：以一定浓度粗多糖溶液上样，达到蛋白质泄露点时停止上样，以体积分数10%乙醇，洗脱回收多糖，体积分数95%乙醇洗脱蛋白质和多酚，再生大孔树脂。合并上样流出液和10%乙醇洗脱液，为回收多糖溶液，经减压浓缩至适当体积，加入体积分数95%乙醇至乙醇最终浓度为85%，静置过夜，抽滤，将所得滤饼置于60℃烘箱中干燥24 h，研磨得到初步纯化多糖粉，冷藏备用[9]。

1.6 DEAE-52柱纯化

将大孔树脂纯化后的多糖配制成8mg/mL溶液，经过DEAE-Cellose-52色谱柱（6 cm×60 cm，填料量约1130mL）纯化，上样量为交换容量的15%，约为169mL。依次使用水、0.1mol/L NaCl和0.5mol/LNaCl分段洗脱，每50mL为一个流份；硫酸苯酚法检测每个流份多糖含量，记录洗脱体积，绘制洗脱曲线。依据洗脱曲线收集洗脱峰部分，分别合并各主峰的流份，重蒸水透析2 d，将脱盐后的多糖主峰溶液分别冷冻干燥，得枇杷叶多糖[15]。

1.7 SephadexG-200柱纯化

取经DEAE-52纯化收集处理后的多糖配置成8mg/mL，上样量为交换容量的15%，约为10mL。用Sephadex G-200进一步纯化，将多糖溶液上样后，以0.05mol/LNaCl洗脱，每30min收集5mL一流份，硫酸苯酚法检测每个流份多糖含量，记录洗脱体积，绘制洗脱曲线。依据洗脱曲线收集洗脱峰部分，分别合并各主峰的流份，重蒸水透析2 d，将脱盐后的多糖主峰溶液分别冷冻干燥，得枇杷叶纯化多糖[16]。

1.8 多糖的鉴定

多糖初步鉴定的方法如下[4]。

颜色、溶解性试验：取适量的多糖分别溶于热水、冷水、乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂，观察其溶剂速度的快慢及溶解程度，判断其溶解性。

碘反应：分别配制1mg/mL多糖溶液和淀粉溶液，以淀粉作为阳性对照，滴加碘液观察多糖溶液颜色的变化。

茚三酮反应：取1mL多糖溶液（1mg/mL），加入0.5mL质量分数0.1%茚三酮乙醇溶液，摇匀，加热沸腾1min～2min后冷却，观察颜色变化，以蒸馏水为阴性对照，氨基酸为阳性对照。

苯酚-硫酸试验：取配制好的多糖溶液1mL于20mL比色管中，加入1mL 5%的苯酚试液，摇匀，立即加入适量的硫酸（注意滴加硫酸要缓慢，以免反应溅出），观察溶液颜色的变化。

α-萘酚试验（Molish反应）：取1mL多糖溶液，滴加2滴～3滴的5%α-萘酚试剂，混匀，缓慢加入浓硫酸1mL，观察反应后溶液的现象。

碘碘化钾反应：配置1mg/mL的多糖溶液，分别以蒸馏和淀粉溶液作为阴阳对照组，分别滴加于点滴板小孔内，再滴加少量碘-碘化钾溶液，观察溶液颜色的变化。

1.9 多糖分子量的鉴定

采用柱层析方法测定分子量。多糖上样浓度为10mg/mL，Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析（2 cm× 30 cm），填装量为柱体积的2/3，为63mL。上样量为交换容量的15%，即为9mL流动相为0.05mol/LNaCl（pH 7.0）缓冲液，流速为0.5mL/min，硫酸苯酚法检测，记录洗脱峰，求出洗脱体积[9]。用同样方法测定4种已知分子量（T-20、T-40、T-50、T-70）的葡聚糖的洗脱体积Ve，用蓝色葡聚糖测出柱床的外水体积V0，将Ve/V0与分子量对数作图得标准曲线，以回归方程求得样品的平均分子量。

1.10 枇杷多糖组分分析

1.10.1 多糖的水解

取PSL-2 10mg，加入1mol/LH2SO4溶液3mL，封管100℃下水解5 h，取出，加入BaCO3中和，离心除去BaSO4沉淀，取上清液，点样分析鉴定[17]。

1.10.2 薄层层析法

薄层层析板：将硅胶板活化，即放入105℃烘箱中干燥30min，取出冷却至室温。110℃活化1 h。

展开剂[19]为正丁醇∶乙酸乙酯∶异丙醇∶乙醇∶水= 7∶20∶12∶7∶6；展开PSL-1和PSL-3水解样品时，取1mL展开剂于层析缸中，展开PSL-2水解样品时加1 mL展开剂后再加0.1mL氨水于层析缸中。显色剂采用苯胺-二苯胺-磷酸-丙酮试剂[18]。

点样展开[19]：用毛细管吸取微量配好糖液点于距薄层板下端上1.5 cm处，不要靠近层析板的边缘，避免发生边缘效应。分次点样，每点一次样应立刻吹干，点样直径不超过0.3mm，将点好样的薄层板置于饱和过的层析缸中密闭展开，溶剂距薄层上端约1 cm时取出。

显色：将薄层板取出，电吹风迅速吹干，浸泡于染色剂中迅速取出，在110℃条件下10min即可显色。

以标准葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖、鼠李糖、甘露糖作为对照，薄层层析、显色、观察斑点，计算迁移率。

1.10.3 杷叶多糖的单糖比例分析

根据薄层层析判断出各个组分含有的单糖，利用硫酸-酚法制作判断出单糖的标准曲线，制作方法与葡萄糖标准曲线一致。标准品与样品薄层层析显色后，再制作一个未染色的薄层层析板，与显色后的薄层层析板对比，分别刮下不同条带的硅胶，溶于1mL甲醇中，加入苯酚和硫酸，分别于分光光度493 nm处测定吸光度A。以标准单糖浓度C为自变量，吸光度A为因变量作标准曲线，求出回归方程并计算样品的浓度，即可求出各个单糖比例。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

葡萄糖标准曲线：y=6.002 1x-0.001 6，R2=0.998 8，浓度范围0.05mg/mL～0.40mg/mL。

蛋白标准曲线：y=1.867 9x+0.004 1，R2=0.999 3，浓度范围0.01mg/mL～0.08mg/mL。

多酚标准曲线：y=13.149x+0.025 1，R2=0.999 6，浓度范围0.01mg/mL～0.06mg/mL。

2.2 DEAE-52柱层析

将经大孔树脂除杂后的枇杷叶多糖，用DEAE-52离子交换作用对其进行纯化。依次用含有0、0.1、0.5 mol/L的NaCl梯度洗脱[20]，每20mL一流份，苯酚-硫酸法检测试验结果如图1。

图1 DEAE-52柱层析多糖梯度洗脱曲线Fig.1 Gradient elution curve of polysaccharides in DEAE-52 column chromatography

由图1可看出有3个洗脱峰，第一个洗脱峰的洗脱剂为蒸馏水，峰在第14管，收集洗脱液约700mL；第二个洗脱峰的洗脱剂为0.1moL/LNaCl，峰在36管，收集洗脱液约250mL；第三个峰在第68管，收集洗脱液约400mL。分别收集3个峰，浓缩后，重蒸水透析2 d，冷冻干燥后得到灰白色絮状物多糖，冷藏备用。分别将3个组分命名为PSL-1、PSL-2、PSL-3。经过DEAE-52柱层析后的3个组分均由深褐色变为灰白色，说明DEAE-52柱层析具有吸附色素的作用[4]。

2.3 PSL-1、PSL-2、PSL-3分别经Sephadex G-200柱纯化结果

利用Sephadex G-200对枇杷叶多糖进行分离，依次将PSL-1、PSL-2、PSL-3 3个组分上Sephadex G-200柱，得到以下3个洗脱曲线，如图2～图4。

图2 PSL-1经Sephadex G-200柱洗脱曲线Fig.2 Elution curve of PSL-1 in Sephadex G-200 column chromatography

图3 PSL-2经Sephadex G-200柱洗脱曲线Fig.3 Elution curve of PSL-2 in Sephadex G-200 column chromatography

图4 PSL-3经Sephadex G-200柱洗脱曲线Fig.4 Elution curve of PSL-3 in Sephadex G-200 column chromatography

由这3个图可以看出，经过两次过柱，3个组分都得到单一对称性很好的洗脱峰，可初步断定3个组分均为单一组分。3个组分洗脱峰的洗脱体积分别为40、47.5、65mL，大致可以判断3个组分分子量的大小，PSL-3＜PSL-2＜PSL-1。为得到相对分子质量均一的组分，分别收集3个洗脱峰，冷冻干燥后得到乳白色的絮状物多糖，冷藏保存。

2.4 多糖的鉴定

对PSL-1、PSL-2、PSL-3经过Sephadex G-200纯化后得到的组分进行一般理化性质鉴定，结果显示：PSL-1、PSL-2、PSL-3纯化物冻干后均呈乳白色絮状物，无臭无味，无明显的熔点；溶于水，不溶于乙醇、乙醚和丙酮等有机溶剂；苯酚-硫酸试验反应呈红色，α-萘酚反应生成紫色，证实了3个组分是糖类；与茚三酮反应未出现紫色沉淀，说明3个组分不含氨基酸杂质。3个组分的水溶液与碘—碘化钾溶液反应呈阴性，表明它们可能为β构型的多糖。

2.5 PSL-1、PSL-2、PSL-3分子量的测定

利用Sephadex G-200柱层析，用蓝色葡聚糖测定Sephadex G-100层析柱的外水体积V0为17.1mL，葡聚糖标准品Dextran T70、T50、T40及T20的洗脱体积Ve分别为20.9、22.5、23、25.5mL，按lgMr-Ve/V0关系作图得相对分子质量标准曲线，其方程为y=-0.482 9x+ 2.121 9，R2=0.992。多糖相对分子量的标准曲线如图5。

图5 多糖相对分子质量标准曲线图Fig.5 The standard curve of relative molecular weight of polysaccharides

根据PSL-1、PSL-2、PSL-3各自的洗脱体积分别为21.0、22.2、23.0mL，代入回归方程，可得PSL-1、PSL-2、PSL-3的相对分子质量分别为700、500、400 kDa。

2.6 枇杷多糖组分分析

2.6.1 薄层层析

将Sephadex G-200分离纯化后3个多糖分别进行水解，进行薄层层析见图6。

图6 单糖组分薄层层析图Fig.6 Thin-layer chromatography of monosaccharide components

图6-a的展开剂为正丁醇：乙酸乙酯：异丙醇：乙醇：水=7：20：12：7：6，标准单糖的颜色为：木糖浅棕色、果糖浅棕色、半乳糖浅蓝色、葡萄糖浅蓝色、甘露糖浅蓝色、鼠李糖浅黄色，PSL-1由下到上3个点的颜色分别为浅棕色、浅蓝色、浅黄色，PSL-3的颜色与PSL-1的颜色一致。图6-b的的展开剂为正丁醇∶乙酸乙酯∶异丙醇∶乙醇∶水=7∶20∶12∶7∶6，取1mL再加0.1m L的氨水，标准单糖显色与图6-a一致。因PSL-2由下到上3个点颜色为浅蓝色、浅蓝色、浅黄色，所以排除木糖和果糖。

2.6.2 样品的比移值Rf

样品和标准单糖的比移值Rf见表1及表2。

表1 多糖样品水解单糖组分的比移值RfTable1 The Rf value of monosaccharide components of acid hydrolysis polysaccharids

表2 不同单糖标准品比移值RfTable2 The Rf value of monosaccharide standard

根据样品薄层层析板的颜色以及Rf与标准样品对比，可以看出PSL-1和PSL-3均有一个点未能与标准单糖吻合，未能判断单糖种类，其余单糖根据颜色及比移值，初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖及一个未知单糖，PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖，PSL-3含有半乳糖和鼠李糖[16]及一个未知单糖。

2.7 杷叶多糖的单糖含量分析

2.7.1 半乳糖及鼠李糖标准曲线

分别以半乳糖和鼠李糖为标准品，取不同浓度标准液经显色反应，测定493 nm的OD值。分别以半乳糖、鼠李糖的浓度（mg/mL）为x轴，吸光值为y轴，得到半乳糖标准曲线为y=6.184 8x-0.065 1，R2=0.989 7，线性浓度范围0.05mg/mL～0.40mg/mL，鼠李糖标准曲线为y=4.685x+0.139 3，R2=0.990 0，线性浓度范围0.05mg/mL～0.40mg/mL。

2.7.2 PSL-1、PSL-2和PSL-3单糖的组成比例分析

3个样品经薄层层析显色后，再分别制作一个未染色的薄层层析板，与显色后的薄层层析板对比，分别刮下不同条带的硅胶，溶于1mL甲醇中，加入苯酚和硫酸，分别于分光光度计493 nm处测定吸光度A。通过标准曲线计算各个单糖的浓度，分别计算出3个样品单糖的比例：PSL-1中葡萄糖、鼠李糖的含量之比为1∶0.602；PSL-2中葡萄糖、鼠李糖、半乳糖的含量之比为1∶1.415∶1.408；PSL-3中半乳糖、鼠李糖的含量之比为1∶1.03。

3 结论

采用水提醇沉法提取枇杷叶粗多糖，经过大孔树脂初步除杂，得到初步纯化的多糖。与常规的多糖脱蛋白和多酚方法相比，大孔吸附树脂具有吸附容量大、吸附快、解吸温和、再生方便、环保节约等优点。因此采用大孔树脂吸附法纯化枇杷多糖，进行杂蛋白和多酚的脱除，是一种较为可行的方法。

大孔树脂纯化后的多糖经过DEAE-52纯化后，得到3个洗脱峰，分别为PSL-1、PSL-2和PSL-3。经过DEAE-52柱层析后的3个组分均由深褐色变为灰白色，说明DEAE-52柱层析具有纯化、吸附色素的作用。

PSL-1、PSL-2和PSL-3经过Sephadex G-200柱层析后，3个组分都得到单一对称性很好的洗脱峰，可初步断定3个组分均为单一组分。枇杷叶多糖的黏性比较大，过Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱的上样量不宜大。

经多糖的性质鉴定试验，从外观，溶解性及α-萘酚试验等证实了纯化的3个组分是糖类；碘反应不变蓝，碘-碘化钾反应未变蓝及茚三酮反应呈阳性，说明不含淀粉及氨基酸杂质。

经过这3种层析柱可以得到单一组分的多糖，说明此纯化路线是可行，而且能够较为完整的保留多糖的结构和性质。

通过Sephadex G-200柱层析测定Sephadex G-200纯化后PSL-1、PSL-2和PSL-3 3个组分的分子量分别为700、500、400 kDa。

多糖水解的难易与单糖组成、水解试剂、水解温度等因素有关。以2mol/L硫酸水解，BaCO3中和，水解条件最好，斑点完整清晰。经过薄层层析对PSL-1、PSL-2和PSL-3的单糖组成分析，初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖，PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖，PSL-3含有半乳糖和鼠李糖。PSL-1和PSL-3均有一个点未能与标准单糖吻合。3个样品单糖的比例：PSL-1中葡萄糖、鼠李糖的含量之比为1∶0.602；PSL-2中葡萄糖、鼠李糖、半乳糖的含量之比为1∶1.415∶1.408；PSL-3中半乳糖、鼠李糖的含量之比为1∶1.03。

枇杷不仅是一种亚热带果树，其成熟叶也是一种传统中药，目前研究发现其主要化学成分如三萜酸、黄酮等具有止咳、祛痰、抗炎、抗肿瘤等多药理活性[2]，但枇杷叶多糖化学组分的研究目前还不深入，相关的活性研究也较少。为了更好地利用这一资源，本论文通过对枇杷叶多糖的初步纯化及分离和结构研究，将为枇杷叶多糖的进一步研究开发提供一定的理论基础。此外多糖是生物大分子，其生物活性与其相对分子质量、黏度、糖链结构密切相关[21]。本试验对枇杷叶多糖纯化方法和单糖的组成进行了初步研究分析，枇杷叶多糖的绝对构型、多糖药理学作用等，还有待进一步的深入研究。

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Purification and Identification of Polysaccharide from Loquat Leaf

HUANG Su-hua，CHEN Qiu-mei，CHEN Rui-hong，HONG Yan-ping*
（College of Life Science，Longyan University，Longyan 364000，Fujian，China）

Polysaccharides of loquat leaf was extracted and purified，and its composition was studied.The total soluble polysaccharide of loquat leaf was prepared from the crude extract which was primary purified by macroporous resin and then precipitated by adding alcohol.Pure polysaccharides were obtained by DEAE-52 cellulose column chromatography and Sephadex G-200 gel column chromatography，and then the molecular weights of polysaccharides were determined by Sephadex G-200 gel column chromatography.The polysaccharides were hydrolyzed，and then the monosaccharide component and ratio were identified by thin layer chromatograph. Three fractions were obtained by DEAE-52 column chromatography，and then three components were obtained through Sephadex G-200 column chromatography that confirmed to be single component based on single symmetrical pea of the elution curves respectively，named PSL-1，PSL-2 and PSL-3.The molecular weight of PSL-1，PSL-2 and PSL-3 were 700，500，400 kDa respectively.The monosaccharide component and ratio of the three polysaccharides of loquat leaf were identified by thin layer chromatograph.PSL-1 contains rhamnose and glucose，and the ratio was 1∶0.602.PSL-2 contains glucose，galactose and rhamnose，and their ratio was 1∶1.415∶1.408.PSL-3 contains galactose and rhamnose，and their ratio was 1∶1.03.

loquat polysaccharide；DEAE-52 cellulose column chromatography；Sephadex G-200 column chromatography；determination of molecular weight；thin layer chromatography；monosaccharide composition

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.04.010

2016-06-07

福建省科技计划重点项目（2012N00190）；福建省自然科学基金项目（2012D100）；福建省教育厅项目（JB12204）；福建省大学生创新训练计划项目（201511312058）

黄素华（1968—），女（汉），副教授，本科，研究方向：果树生物技术，天然产物提取与应用。

*通信作者：洪燕萍（1970—），女，教授，研究方向：果树生物技术，天然产物提取与应用。