CTHRC1在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

冯春翠 周 琦 徐伏兰 广 怡

CTHRC1在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

冯春翠 周 琦 徐伏兰 广 怡

目的 探讨胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在子宫内膜癌中的表达情况及其临床意义。方法 选取子宫内膜癌(癌症组)、子宫内膜不典型增生(增生组)及正常子宫内膜(对照组)患者各50例，采用免疫组化法和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测CTHRC1蛋白在子宫内膜组织中的表达情况，并比较其表达情况与子宫内膜癌病理分级、临床分期及是否有淋巴结转移的关系。结果 CTHRC1主要表达在细胞质中，少许表达在细胞核中，其在癌症组阳性表达43例(86%)，增生组阳性表达4例(8%)，对照组无阳性表达。CTHRC1蛋白在癌症组中的表达明显高于增生组及对照组(P<0.05)。CTHRC1在子宫内膜癌中的表达在病理分级、临床分期及是否有淋巴结转移方面差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CTHRC1在子宫内膜癌患者体内高表达，且其表达与患者病理分级、临床分期及是否有淋巴结转移有关，有望成为子宫内膜癌发生发展的检测指标之一。

子宫内膜癌；免疫组化；ELISA；表达

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:221～223)

子宫内膜癌是女性生殖道三大恶性肿瘤之一，其发病率逐年上升。欧美最近研究发现子宫内膜癌的发生率接近宫颈癌，且有年轻化的趋势[1]。目前普遍认为在缺乏孕激素的状态下，长期的雌激素刺激会增加子宫内膜癌的发病几率，但是其具体的发病机制及疾病的发生发展仍不清楚。肿瘤的复发和转移是导致癌症患者死亡的主要原因[2]。近年来多项研究表明，胶原三股螺旋重复蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1，CTHRC1)参与肿瘤的浸润和转移，并在多种实体肿瘤中检测其高表达[3]。本研究采用免疫组化法分析CTHRC1在子宫内膜癌中的表达，并采用ELISA法检测患者血清中CTHRC1水平，分析其与病理分级、临床分期及是否有淋巴结转移的关系，报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取子宫内膜癌(癌症组)、子宫内膜不典型增生(增生组)及正常子宫内膜(对照组)患者各50例，子宫内膜癌组患者年龄52～70(60.87±7.97)岁；增生组患者年龄40～58(48.95±5.67)岁；正常组患者年龄53～71(61.87±3.28)岁。3组间年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 标本来源 子宫内膜癌组及增生组组织标本来源于治疗前病理检查标本；正常组标本来源于因功血、子宫肌瘤及子宫脱垂行子宫切除的患者。标本经过甲醛溶液固定后，经石蜡包埋，切片厚度3 μm。所有患者的血清均为空腹静脉血，之前未接受治疗。血液室温自然凝固10～20 min，离心20 min取上层液即为血清，1∶20稀释作为样品。

1.2.2 试剂来源 CTHRC1酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒购于上海研卉生物科技有限公司，酶标板购自于JETPLATES公司。采用免疫组织化学SABC法，CTHRC1多克隆抗体购自Santa cruz公司，细胞免疫组化(SABC)和二氨基联苯胺(DAB)试剂盒购自美国博士德生物工程有限公司。

1.2.3 实验方法 ELISA采用间接法，按照试剂盒操作步骤包被、加样、加酶标抗体、加底物液显色、终止反应及结果判定进行。免疫组化采用SABC法按照试剂盒操作说明进行，磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照，该试剂公司提供的阳性切片作为CTHRC1阳性对照。

1.3 结果判定

ELISA结果判定是测定吸光度(OD450)值。免疫组化所有标本均由2位病理医生评定：CTHRC1主要在细胞质表达，少数表达于细胞核，光镜下观察到细胞质有棕黄色颗粒沉淀为阳性，不染色为阴性。评分参照王辉等[4]的评定方法进行评估，采用二级计分方式，取5个以上高倍镜视野，根据阳性细胞所占视野比例计数：5%～24%为1分，≥25%～49%为2分，≥50%～75% 为3分，> 75%为4分。染色强度分类:淡黄色为1 分，黄或深黄色为2 分，褐或棕褐色为3 分。两者计分相乘>1 为阳性。

1.4 统计学处理

采用SPSS 13.0进行统计学处理。计数资料间比较采用t检验或方差分析，组间比较采用q检验。χ2检验分析不同临床病理因素(病理分型、临床分级及有无淋巴结转移)的CTHRC1表达情况，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 CTHRC1在不同子宫内膜组织中的表达情况

CTHRC1蛋白阳性表达呈棕黄色颗粒样物质，主要表达在细胞质中，少数表达于细胞核。正常子宫内膜组织无表达；子宫内膜不典型增生中有极少量的表达；子宫内膜癌组织中细胞质和包膜上均有较强表达，少数细胞核上有表达。其阳性表达率在癌症组、增生组及对照组中逐渐下降，CTHRC1在血清中的表达即OD450的表达量也逐渐下降，而且其表达量在癌症组中与其他组别相比，差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1 CTHRC1在不同内膜组织中的表达

2.2 CTHRC1表达与子宫内膜癌不同临床病理特征的关系

CTHRC1在癌症组织中的表达与病理分级、临床分型及有无淋巴结转移有关(P<0.05)(表2)。

表2 CTHRC1的表达与子宫内膜癌不同临床病理特征关系

3 讨论

子宫内膜癌是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一，其发病率逐年上升。欧美最近研究发现子宫内膜癌的发生率接近宫颈癌，且有年轻化的趋势。目前子宫内膜癌的发病机制及其病因目前尚不清楚，因此，寻找子宫内膜癌发生发展机制、评估其预后的标志性分子，对于临床指导子宫内膜癌的治疗与病情预后的转归具有重要的意义。

胶原三股螺旋重复蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1，CTHRC1)在大鼠损伤组织中首次被发现，主要表达在成纤维细胞和平滑肌细胞中，正常组织中未见其表达。Tang等[3]最先报道了CTHRC1 在恶性黑色素瘤中表达升高，且在转移性黑色素瘤中的表达更高，同时发现抑制CTHRC1 的表达可以抑制肿瘤细胞迁移。随后开始其在人实体肿瘤，如肝癌、大肠癌、宫颈癌等中研究，发现其表达与肿瘤的临床分期、病理分级及是否有淋巴结的转移等相关。

本研究探讨CTHRC1在子宫内膜癌患者体内的表达情况。免疫组化及ELISA法均提示CTHRC1在子宫内膜癌患者体内高表达，且其表达水平随疾病的严重程度而逐渐增加，各组间蛋白表达的差异均有统计学意义(P<0.05)；而且CTHRC1蛋白的表达与肿瘤的病理分型、临床分期及有否转移有关。由此推测CTHRC1可能参与子宫内膜癌的发生与发展。近年的研究发现CTHRC1参与癌细胞的发生发展及转移的可能机制有：①血管的生成是肿瘤细胞生长发展及转移的基础，CTHRC1主要通过抑制胶原蛋白的沉积及促进细胞的迁移，进而促进血管重构，参与肿瘤发生发展和转移[5]。②参与Wnt/PCP信号通路，促进细胞的迁移，减少胶原的沉积，而促进肿瘤的发展[6-7]。③CTHRC1诱发肿瘤细胞发生形态学改变，使其黏附及增殖增加，改善其生活环境，使其生存能力增加。④TGF及BMP4能够诱导CTHRC1的表达，并能促进肿瘤细胞迁移[8]。其具体的作用机理仍需大量研究证实，其是否为肿瘤患者的特异性分子，亦需进一步的研究。

[1] 杨 曦，马 珂，吴 成.子宫内膜癌的流行病学及高危因素〔J〕.实用妇产科杂志,2015，31(7)，485-488.

[2] Kim K,Ryu SY.Major clinical research advances in gynecologic cancer in 2009〔J〕.J Gynecol Oncol,2009,20(4):203-209.

[3] Tang L1,Dai DL,Su M,et al.Aberrant expression of collagen triple helix repeat containing 1 in human solid cancers〔J〕.Clin Cancer Res,2006,12(12):3716-3722.

[4] 王 辉，许 青.CTHRC1在食管鳞癌中的表达及其临床意义〔J〕.临床肿瘤学杂志,2015，20 (6)，531-534.

[5] Leclair RJ,Durmus T,Wang O,et al.CTHRCI is a novel inhibitor of transforming growth factor-beta signaling and neointimal lesion formation〔J〕.Circ Res,2007,100(6):826-833.

[6] S Yamamoto，O Nishimura，K Misaki,et al.Cthrcl selectively activates the planar cell polarity pathway of wnt signaling by stabilizing the wnt-receptor〔J〕.Complex Developmental Cell,2008,15(1):23-36.

[7] Tan F,Liu F,Liu H,et al.CTHRC1 is associated with peritonealcarcinomatosis in colorectal cancer:a new predictor for prognosis〔J〕.Med Oncol,2013,30(1):473.

[8] Pyagay P，Heroult M，Wang Q，et al.Collagen triple helix repeat containing 1,a novel secreted protein in injured and diseased arteries,inhibits collagen expression and promotes cell migration〔J〕.Circ Res，2005，96(2)：261-268.

(编辑：甘 艳)

Expression and Clinical Significance of CTHRC1 in Endometrial Cancer

FENGChuncui，ZHOUQi，XUFulan,etal.

CenterHospitalofXiaogan，Xiaogan，432100

Objective To explore the expression and clinical significance of CTHRC1 in endometrial cancer.Methods50 cases of endometrial cancer,50 cases of atypical endometrial hyperplasia and 50 cases of normal patients were selected.Using immunohistochemical method and ELISA method to detect the expression of CTHRC1 protein,and compared its expression with pathological grades,clinical stages and lymph node metastasis.Results CTHRC1 was mainly expressed in cytoplasm，with the positive expression rate of 86%(43 cases) in endometrial cancer group,8%(4 cases)in atypical endometrial hyperplasia group and 0 in the control group.The positive expression rate in endometrial cancer group was significantly different from that in the atypical endometrial hyperplasia and the control group(P<0.05).There was significant difference in CTHRC1 protein expression with pathological grades,clinical stages and lymph node metastasis(P<0.05).Conclusion CTHRC1 is highly expressed in endometrial cancer,and is correlated with pathological grades,clinical stages and lymph node metastasis,and it is expected to become one of the important indicators predicting the development of endometrial cancer.

Endometrial cancer；Immunohistochemistry；ELISA；Expression

432100 湖北省孝感市中心医院

徐伏兰

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.02.014

R737.33

A

1001-5930(2017)02-0221-03

2016-03-04

2016-08-02)