血浆miRNAs在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)不同疾病状态中的表达特点

陈 霞 何 倩

血浆miRNAs在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)不同疾病状态中的表达特点

陈 霞 何 倩

目的 分析3种血浆miRNA在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)不同疾病状态中的表达特点。方法 选取急性淋巴细胞白血病患儿40例，其中初诊患儿12例，完全缓解患儿16例，复发患儿12例，同时收集我院经健康体检的儿童25例作为正常对照组。抽取所有儿童的空腹静脉血，离心后取血浆，采取直接扩增目的microRNA，并反转录为cDNA，qRT-PCR方法检测血浆miR150、miR155、miR233的表达。结果 ALL组中血浆miR150、miR155、miR233的表达均与正常组有统计学差异；血浆miR150和miR233在初诊组和复发组的表达显著低于缓解组和正常组(P<0.05)，血浆miR155在初诊组和复发组的表达显著高于缓解组和正常组(P<0.05)。3种miRNA在初诊组与复发组之间、缓解组与正常组之间比较均无统计学差异(P>0.05)；初诊组中3种血浆miRNA在不同年龄和性别之间表达均无统计学差异(P>0.05)；3种血浆miRNA的AUC(曲线下面积)和95%CI(95%可信区间)均有较好的满意度，且3种血浆miRNA联合检测的精确度更高。结论 血浆miR150、miR155、miR233的表达在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的诊断、治疗和复发监测中有较高的应用价值。

血浆miRNAs；儿童急性淋巴细胞白血病；不同疾病状态

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:192～195)

儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是儿童白血病中最常见的类型，据国内外报道其治愈率可达80%以上。但由于复发、密集的化疗方案带来的副作用，该疾病的死亡率仍较高[1]。miRNA是一种新型的非编码的小分子RNA，研究表明，包括白血病在内的多种癌症的发生均与miRNA的表达紊乱密切相关[2]。microRNA已成为目前肿瘤研究的热点，在很多疾病的诊断、治疗和预后预测中起到标志物的作用。然而目前的研究大多通过抽取患者骨髓或采集肿瘤组织的方式检测miRNA，创伤较大。近年来的大量研究表明，血浆miRNA在疾病的诊断、治疗和预后预测中可以发挥同样的作用，且创伤小、操作方便[3]。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2011年3月至2015年3月期间我院收治的急性淋巴细胞白血病患儿40例，其中初诊患儿12例，完全缓解患儿16例，复发患儿12例，所有患儿均经细胞形态学、遗传学、分子生物学、免疫学确诊，按照CCLG-08方案标准进行治疗。同时收集我院经健康体检的儿童25例作为正常对照组。急性淋巴细胞白血病组和正常组的年龄、性别均无统计学差异。

1.2 检测方法

抽取ALL患儿和正常组儿童的空腹静脉血，放入EDTA试管中，室温静置30 min后4 ℃ 3 000转/分离心10 min，吸取上清液(即血浆)至EP管，-80 ℃保存备用。将所有血浆采取直接扩增目的microRNA，并反转录为cDNA，qRT-PCR方法检测血浆miR150、miR155、miR233的表达。

1.3 统计学分析

通过qRT-PCR结果计算3种血浆miRNA的相对表达量，使用SPSS 17.0软件分析所有数据，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血浆miR150、miR155、miR233在急性淋巴细胞白血病和正常组中的表达比较

对3种miRNA正常组和急性淋巴细胞白血病组中的表达比较发现，血浆miR150和miR233在ALL组中的表达显著低于正常组(P<0.05)，血浆miR155在ALL组中的表达显著高于正常组(P<0.05)，见表1。

表1 血浆miR150、miR155、miR233的表达

2.2 血浆miR150、miR155、miR233在急性淋巴细胞白血病不同疾病阶段的表达比较

对3种miRNA在急性淋巴细胞白血病不同阶段的表达比较发现，血浆miR150和miR233在初诊组和复发组的表达显著低于缓解组和正常组(P<0.05)；血浆miR155在初诊组和复发组的表达显著高于缓解组和正常组(P<0.05)；3种microRNA在初诊组与复发组之间、缓解组与正常组之间比较均无统计学差异(P>0.05)，见表2。

表2 血浆miR150、miR155、miR233在ALL不同疾病阶段 的表达

*与缓解组相比，P<0.05；#与正常组相比，P<0.05。

2.3 初诊组中3种血浆miRNA在不同年龄、性别之间的表达

比较初诊组中不同年龄和性别之间血浆miR-150、miR-155、miR233的表达显示,3种血浆miRNA在不同年龄和性别之间表达均无统计学差异(P>0.05)，见表3。

表3 初诊组中3种血浆miRNA在不同年龄、性别之间的表达±s)

2.4 3种血浆miRNA诊断儿童急性淋巴细胞白血病的效能

结果显示，血浆miR150、miR155、miR233 的在诊断ALL时均有较高的敏感度和特异度，且相比于单独检测一种指标，三者血浆指标联合检测时的敏感度和特异度更高，诊断意义更大，见表4。

表4 3种血浆microRNA诊断ALL的效能

3 讨论

有关发病机制的研究已成为白血病研究的重要内容，近年的研究表明，miRNA在儿童急性淋巴细胞白血病的发病过程中扮演着重要角色。以往的研究多集中在组织和细胞中的miRNA，最新研究证实在血浆中同样存在miRNA，并且能够在白血病患者血浆中检测到miRNA的特异表达谱，在儿童急性淋巴细胞白血病的早期诊断、预后评估中发挥重要作用[4]。

miR150参与免疫和造血系统的调节，miR150通过调控靶基因引起下游基因的表达发生变化，从而参与各系统的发生，其表达紊乱常导致免疫系统、造血系统等系统恶性疾病的发生[5]。但是miR150在不同种类的肿瘤中的作用不同，在胃癌、慢性淋巴细胞性白血病、骨肉瘤等肿瘤中呈现高表达，而在慢性粒细胞性白血病、NK/T细胞淋巴瘤等肿瘤中呈现低表达。研究表明，miR150在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达降低[6-7]。本研究发现初诊组和复发组miR150的表达显著低于缓解组和正常组，而初诊组与复发组之间、缓解组与正常组之间比较均无显著差异，说明miR150在儿童急性淋巴细胞白血病的发生过程中通过降低表达水平而可发挥抑癌作用，且miR150的表达变化可反映患儿不同的疾病状态。

miR155是miRNA家族中最早发现的致癌因子之一，与造血、免疫等恶性疾病的发生密切相关。与miR150不同的是，miR155在恶性疾病的发生中均呈现高表达而发挥癌基因的作用[8]。Faraoni等的研究表明，miR155在儿童急性髓性血病患者中的表达上调，可用于评估儿童急性髓性血病患者的预后[9]。本研究结果也显示，儿童急性淋巴细胞白血病患儿的血浆miR155在初诊组和复发组的表达显著高于缓解组和正常组，说明miR155在儿童急性淋巴细胞白血病的发生中发挥癌基因的作用。

正常情况下，miR233在骨髓中表达较高，并在造血系统的分化过程中起重要作用，其表达异常则会导致血液系统恶性疾病的发生。在对骨髓中miR233的检测发现，miR233在儿童急性淋巴细胞白血病患儿缓解期的表达升高，在初诊期和复发期患儿中表达下降，说明miR233的表达下降与儿童急性淋巴细胞白血病的生存有相关性[10]。本研究通过监测儿童急性淋巴细胞白血病患儿血浆miR233水平发现，其在初诊组和复发组的表达水平与其在骨髓中的表达呈现相同的趋势，但血浆miR233在缓解组的表达与正常组相比并未出现统计学意义，这可能与我们的病例样本不足有关。

同时，我们对3种血浆miRNA对儿童急性淋巴细胞白血病的诊断价值进行了研究，发现血浆miR150、miR155、miR233对急性白血病的诊断均有较高的价值，但是由于每种血浆miRNA均可异常于表达多种疾病中，仅检测单个miRNA时往往会造成在疾病诊断时特异性不高的情况，因此，为了提高疾病诊断的精确度，需要多种miRNA联合检测。本研究的结果也证实，将miR150、miR155、miR233 3种血浆miRNA联合检测时的特异度和敏感度更高。

综上所述，血浆miR150、miR155、miR233在儿童急性淋巴细胞白血病的不同阶段呈现不同的表达特点，可作为监测该疾病进展的有效指标，且3种血浆miRNA联合检测的精确度更高，对该疾病的诊断、治疗和复发的监测有较好的应用价值。

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[4] 黄鹏丽,许丽婷,江 倩,等.血浆miRNA在儿童急性淋巴细胞白血病中表达特点〔J〕.中国小儿血液与肿瘤杂志,2015,20(2):69-73.

[5] 姚 乐.microRNA在原发性肝癌中的表达及意义〔J〕.实用癌症杂志,2016,31(1):165-168.

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(编辑：甘 艳)

Expression of Plasma miRNAs in Children with Acute Lymphoblastic Leukemia in Different Disease States

CHENXia,HEQian.

XiangyangCentralHospital,Xiangyang,441021

Objective To analyze the expression of 3 plasma miRNA in children with acute lymphoblastic leukemia in different disease states.Methods 40 children with acute lymphoblastic leukemia were collected,including 12 cases of newly diagnosed children,16 cases of complete remission,12 cases of relapse.At the same time,25 healthy children received physical examination was the control group.The fasting venous blood was extracted from all the children.After centrifugation,the plasma was taken directly to amplify the target microRNA,and the reverse transcription into cDNA.QRT-PCR method was adopted to detect the expression of miR150,miR155 and miR233 in plasma.Results The expression of miR150,miR155 and miR233 in all group were significantly different from that of the control group.The expression of plasma miR150 and miR233 in the newly diagnosed and recurrent group were significantly lower than that in the remission group and the control group(P<0.05).The expression of plasma miR155 in the initial and recurrent group was significantly higher than that in the remission group and the normal group(P<0.05).There was no significant difference in the 3 microRNA between the initial diagnosis group and the recurrence group,the remission group and the control group(P>0.05);Three kinds of plasma miRNA in newly diagnosed group between different age and gender expression showed no significant difference(P>0.05);Three plasma AUC microRNA(area under the curve) and 95%CI(95% confidence interval) had better satisfaction.And the accuracy of the combined detection of plasma miRNA in 3 kinds of plasma is higher.Conclusion The expression of plasma miR150,miR155 and miR233 has a good application value in the diagnosis,treatment and recurrence monitoring of children with acute lymphoblastic leukemia.

Plasma miRNAs;Acute lymphoblastic leukemia;Different disease states

441021 湖北省襄阳市中心医院

何 倩

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.02.006

R733.71

A

1001-5930(2017)02-0192-04

2016-03-10

2016-07-07)