近20年气滞血瘀证动物造模进展研究

李楠，刘丽＊，李硕熙

（黑龙江中医药大学附属第一医院妇二科，黑龙江 哈尔滨 150040）

近20年气滞血瘀证动物造模进展研究

李楠，刘丽＊，李硕熙

（黑龙江中医药大学附属第一医院妇二科，黑龙江 哈尔滨 150040）

本文主要讨论近20年气滞血瘀证实验动物模型造模方法。发现单一因素造模主要以肾上腺素注射液为主，多因素主要以化学药物联合其他方法：物理因素（夹尾、冰水浴、束缚、声光电等）；饮食（高脂高糖）等；环境因素（昼夜颠倒及改变照明等）为主；而选用多因素造模越来越普遍。本文总结出选用大鼠、多因素、慢性造模更适合临床气滞血瘀证的研究，以期为今后的实验提供有利的指导。

气滞血瘀；实验动物；造模方法

1 气滞血瘀模型

本动物模型模仿人类气滞血瘀状态，患者临床往往出现心烦气躁，易激惹的情感状态，血液黏稠易凝，流速降低，血管痉挛状态等[1]。纵观近20年来文献报道，我们可以总结出造模成功的动物往往精神抑郁或烦躁不安，易激惹，活动减少，白昼异常兴奋或夜晚嗜睡，毛发变黄干枯，目赤，唇四白发黑，舌紫暗，舌下络脉瘀紫，耳色变深瘀斑，爪甲色黄开裂，进食量少，排泄物少，饮水少，体质量减轻，血液流变学可检测各项凝血指标等均可支持气滞血瘀证造模成功。前人的实践给后人研究血瘀证生物表征模型的建立以很大启发[2]。造模方法主要有注射肾上腺素；夹尾；束缚；声光电；冰水浴；电针；干预饮食等。

1.1 单一因素造模 章正祥[3]采用注射肾上腺素的方法造模。《内经·经脉别论》曰：疾走恐惧，汗出于肝。肾上腺素由肾上腺分泌，通过增加心输出量，有供养机体超负运转的作用。当人兴奋、恐惧时，这种激素分泌增加。注射肾上腺素是为了模仿动物激怒恐惧状态，从而实现气滞血瘀模型。

1.2 多因素造模 除了注射肾上腺素以外，还有物理因素（包括声、光、电）、环境因素等。陈辉[4]等指出，以上物理因素刺激动物，则可促进其交感神经活动增强，出现微循环障碍等血瘀表现。而环境作为治病因素在“整体观念”中即有体现。王文丽[5]用大鼠采用高脂饮食加夹尾刺激。高脂饮食配方为：6%蔗糖，1%谷氨酸钠，5%蛋黄粉，8%花生油，1.5%胆固醇，0.4%甲基硫氧嘧啶，78.1%基础饲料。夹尾频率为每次30分钟，每天4次。王家历[6]选用大鼠实验，采用多因素造模分别为夹尾每次30 min，每日2次；束缚每次30 min；冰水浴1oC-4oC冰水中每日游泳5 min，每日2次；倾斜鼠笼45度2 h，每日1次。昼夜颠倒，改变照明24 h；悬尾10 min；禁食24 h；皮下注射肾上腺素1 g/L 1次，每只0.1 mL；每日给予上述刺激中的一种。Wang等[7]采用注射肾上腺素及冰水浴的方法造模，肾上腺素浓度0.8 mg/kg，两次注射间隔4 h，第一次注射2 h后冰水浴5 min。陈嘉斌等[8]分别采用电针刺激、中药灌胃、以及注射肾上腺素等方法联合造模，电刺激方法如下于：固定板上对足底进行电针刺激，频率2 HZ，刺激3 h/d，固定3 h/d，共计处理20 d；中药灌胃造模方法如下：灌胃黄连、石膏水煎剂，给药剂量15 g/kg，灌胃2次/d，每次2 mL，共计处理15 d），肾上腺素造模方法如下：肾上腺素组皮下注射0.1%肾上腺素，每只0.2 mL，每天1次，共计处理7 d造模。测量血流变、高中低切变率、血浆黏度等指标。

2 总结

闫珊珊等[9]指出，气滞血瘀是一个漫长的病理过程，短时间之内造模可信度较弱，且缺乏量化标准。且单一因素造模周期长，成功率低，病变的全面性和准确性无法保障。复合因素造模能提高成功率，降低死亡率。实验人员也认识到了这些不足，任建勋等[10]通过实验证明了多因素刺激对于血液流变学的影响比单一因素刺激更明显。近20年文献的查询中，笔者发现，单一因素造模主要以肾上腺素注射液为主，多因素主要以化学药物肾上腺素为主联合其他方法如物理因素（夹尾、冰水浴、束缚、声光电等）；饮食因素（高脂高糖等）；环境因素（昼夜颠倒及改变照明等）；而选用多因素造模越来越普遍，这是因为与单一的西医化学药物刺激（肾上腺素等）相比，物理以及情志刺激更符合中医证候之于人的进展过程，保证实验的顺利进行。其次，王婷婷等[1]验证了只要达到造模的目的不需要对每一种方法都应用在动物身上。从伦理学的角度来讲，这也体现了对实验动物的尊重和情感关怀。此外，不同的药物浓度，以及刺激强度的差异均可不同程度的影响实验结果，以上方法还需反复、多次实验，通过对实验数据的反复计算，推导，从而精益求精，得出最具有参考价值的实验操作方法。田金洲等[11]等指出，临床上研究气滞血瘀证模型进行动物实验应用的动物最多的是大鼠，其次是小鼠，也有兔等等。而笔者认为本实验更适合用大鼠。这是因为：（1）生理习性：小鼠天性怕惊，实验员抓取小鼠时易受伤。大鼠性情较为温和，依从性较小鼠为优；小鼠体型较小，身体娇嫩，对环境适应性差，对疾病抵抗能力差，过冷过热均会造成死亡；如果采用小鼠将对实验室的条件要求更为严苛。而大鼠抗病能力强，不易感染病菌，生存时间长，基本可以持续到实验结束。（2）实验数据：验证气滞血瘀造模实验需要实验数据支持，大鼠体型大于小鼠，因此对于实验所需血量以及所需器官量较小鼠更多、更易获得[12]。

将中医的气滞血瘀证通过造模表现在实验动物模型身上对于临床试验研究治疗气滞血瘀证的进展以及治疗有里程碑的意义。

[1]王婷婷,贾乘,陈宇,等.大鼠气滞血瘀证模型的建立及影响因素分析[J].中国中药杂志,2012(11): 1629-1633.

[2]杜金行,史载祥.血瘀证及活血化瘀研究回顾与展望[J].福建中医药大学学报,2012,22(4): 1-4.

[3]章正祥,曹克刚,王芬,等.皮下注射肾上腺素复制气滞血瘀模型的血流动力学初探[J].天津中医药,2011,28(1): 9-11.

[4]陈辉,吴英,杨思进.血瘀证动物模型造模方法研究进展[J].内蒙古中医药,2010(8): 98-99.

[5]王文丽,李冬梅,施雷.痰瘀同治法干预咳嗽变异性哮喘大鼠病症结合动物模型气道慢性炎症疗效的实验研究[J].中华中医药学刊,2017(1): 223-226.

[6]王家历.化瘀止痛散对气滞血瘀EM的临床疗效和模型鼠的HMGB1、OPN等影响的研究[D].山东中医药大学,2016.

[7]Wang Y,Yan J,Li S,et al.Composition of the essential oil from danggui-zhiqiao herb-pair and its analgesic activity and effect on hemorheology in rats with blood stasis syndrome [J].Pharmacogn Mag,2016,12(48): 271-275.

[8]陈嘉斌,柴可夫,郑杨,等.三种方法建立糖尿病气滞血瘀证型大鼠模型的对比实验研究[J].浙江中医药大学学报,2013,37(3):234-239.

[9]闫珊珊,窦维华,董少龙,等.血瘀证动物模型的制作及存在问题的探讨[J].中国中医基础医学杂志,2004,10(2): 35-37.

[10]任建勋,林成仁,王敏,等.多因素整合建立气滞血瘀证动物模型研究[J].中药药理与临床,2007(5): 210-211.

[11]田金洲,王永炎,徐意,等.血瘀证动物模型的种类、评价与研究[J].北京中医药大学学报,2006,29(6): 396-400.

[12]郝光荣.实验动物学[M].北京: 第二军医大学出版社.1999.

黑龙江省自然科学基金面上项目（No.H2015026）