2014年-2015年粤北规模猪场H1亚型猪流感血清学调查与分析

胡鸿惠，黄健强，南文金，吴静波，彭国良

(韶关学院,广东韶关 512005)

2014年-2015年粤北规模猪场H1亚型猪流感血清学调查与分析

胡鸿惠，黄健强，南文金，吴静波，彭国良

(韶关学院,广东韶关 512005)

为调查粤北地区规模化猪场H1亚型猪流感病毒的流行和感染情况，采用H1亚型猪流感抗体检测试剂盒检测2014年-2015年采自粤北25个未进行SIV免疫的规模化猪场的376份猪血清。结果表明,2014年和2015年H1亚型猪流感感染总抗体率分别为13.04%和14.58%，而 1月～3月的感染抗体阳性率分别为19.05%和25.00%。该地区H1亚型猪流感感染抗体阳性率相对较低，表现出一定的区域性特征，1月～3月感染抗体阳性率均明显高于其他月份，该地区冬季抗体阳性率相对较高。

猪流感；抗体阳性率；H1亚型

猪流感(Swine influenza，SI)广泛存在我国各地，能使患病猪群生产性能下降，影响猪群健康及猪肉品质，给养猪业造成极大危害。与禽流感不同，甲型H1N1流感能够以人传人，早在2009年4月，墨西哥公布发生人传人的甲型H1N1流感案例，引起了各界重视，这是一宗由H1N1病毒感染给人的病例，并在基因分析的过程发现基因内有猪、鸡及来自亚洲、欧洲及美洲人种的基因，继而引发了科研工作者们对猪流感病毒(Swine influenza virus，SIV)的研究热潮，而养殖场户则并不是非常重视[1-2]。根据流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原性不同，流感病毒分为15种不同的H抗原亚型和9种不同的N抗原亚型，其中H1和H3亚型的猪流感在一些省市的猪群中表现为地方性流行的特点[3-4]。徐敏等[5]调查研究发现广东省内猪流感流行情况存在明显的地域性差异，粤西和珠三角地区猪流感抗体阳性率较高，而粤东和粤北则较低。有关广东省的猪流感监测和报道较少，但粤北地区是广东省的南大门，又是广东省、湖南省、江西省三省交汇的重要交通枢纽地，鉴于猪流感具有较大的公共卫生学意义和粤北的区域特征，该病的监测和防御不容忽视。本研究旨在调查广东省粤北及其周边区域规模化猪场的H1亚型猪流感的流行情况，了解区域内猪流感的流行动态，为猪流感的防控提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清样品 抽选2014年-2015年粤北地区及周边规模猪场送检的376份猪血清样品，其中2014年的184份送检样品分别来自13个猪场，大部分为常规免疫监测的样品；2015年的192份送检样品来自12个猪场，均为常规免疫监测送检样品。送检猪场均未进行过猪流感疫苗的免疫。采集的猪血使用实验室常规方法进行血清分离，置-20℃保存。

1.1.2 试剂盒 猪流感病毒H1亚型ELISA抗体检测试剂盒，武汉科前动物生物制品有限责任公司产品，生产批号为20150302。1.1.3 仪器设备 Multiskan MK3酶标仪，美国Thermo公司产品；台式冷冻离心机，美国Sigma公司产品；单道移液器、多道移液器，德国Brand公司产品；303A-4恒温培养箱，购自上海申安医疗器械厂。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 根据猪流感病毒H1亚型ELISA抗体检测试剂盒说明书进行血清样品的检测，检测前将试剂盒和检测样品恢复到室温，反应步骤在25℃恒温培养箱中孵育。

1.2.2 结果判定 按照试剂盒说明书进行判定，两个阳性对照孔的OD 630 nm值相差应<0.3，阳性对照孔OD 630 nm值均应≥0.8，且<2.0，试验才成立。如果样品OD 630 nm≥0.4，判为阳性；如果OD 630值<0.4，判为阴性。

2 结果

2.1 2014年不同规模猪场猪流感抗体检测

检测2014年的13个猪场184份猪血清，其中H1亚型猪流感血清样品抗体阳性数为24份，总血清样品阳性率为13.04%；H1亚型猪流感抗体阳性场数为8个，场阳性率为61.54%，每个场的阳性率由0～50%不等(表1)。

2.2 2015年不同规模猪场猪流感抗体检测

检测2015年的12个猪场192份猪血清，其中每个猪场各随机抽选了16份猪血清，检测结果显示H1亚型猪流感血清样品抗体阳性数为28份，总血清样品阳性率为14.58%；H1亚型猪流感抗体阳性场数为8个，场阳性率为66.67 %，各场血清样品阳性率由0～43.75%不等(表2)。

2.3 2014年、2015年各季度猪场猪流感抗体检测结果与分析

统计分析2014年和2015年各个季度猪场的H1亚型猪流感感染抗体阳性率，结果表明2014年第一季度的感染抗体阳性率最高，为19.05%；第二、三、四季度依次为15%、12.7%、7.5%。2015年也是第一季度最高，为25%，第二、三、四季度依次为14.58%、8.33%、10.41%。2015年较2014年相比，总感染抗体阳性率略有上升，但差异不显著，与相关报道相比均处于相对较低水平(表3)。从4个季度总的检测结果来看，这2年的第一季度抗体阳性率均高于其他季节，但两年的感染抗体阳性率基本保持相同的规律。

表1 2014年不同猪场猪流感病毒抗体检测结果

表2 2015年不同规模猪场猪流感病毒抗体检测结果

表3 2014年和2015年各季度猪流感病毒抗体检测结果比较

3 讨论

本研究中，采集血清的猪场均未进行过猪流感疫苗的免疫接种，猪群中H1亚型猪流感病毒抗体阳性情况可以客观地反映区域内猪群感染猪流感病毒的情况。

从送检的2014年-2015年广东省粤北及周边地区规模猪场的血清样品中抽选376份血清进行猪流感病毒H1亚型抗体的检测。结果表明,第一，2014年和2015年粤北及周边区域规模化猪场猪流感病毒H1亚型总感染抗体阳性率分别为13.04%和14.58%，但不同猪场的猪流感病毒抗体阳性率分别由0～50%和0～43.75%不等。有研究人员对中国南方1976年-1982年进行的猪流行病学监测中，分离出104株猪流感病毒，其中72株为H1N1亚型，占分离株总数的74.6%。而广东省的猪流感的流行情况一直备受关注，其中倪汉忠等[6]调查显示，1998年采集的广东省猪群162份血清中H1亚型抗体阳性率30.9%；李海燕等[7]测定2001年来自广东省的205份猪血清，抗SWN77(H1)阳性率为4.4%；孙彦伟等[8]调查显示，2006年广东省部分地区规模化猪场中H1亚型抗体阳性率为46.09%；董尚智等[9]对2005年-2007年广东省珠海珠海地区规模养猪场调查结果显示，该区域普遍受到猪流感威胁，且主要感染的猪流感病毒是H1 亚型；林文等[10]调查2009年广东省9个地级市931份血清的结果显示，H1亚型抗体阳性率高于其他亚型猪流感，在3.5%～44.0%之间；徐敏等[5]对2009年-2010年广东省14 个市28个规模化猪场1 015份猪血清测定结果显示，H1 亚型抗体总阳性率为40.9%，过去粤北去养殖量相对较少，而养殖环境较优，可能是粤北区域猪流感抗体阳性率明显较低的因素之一。

本调查结果显示，猪流感抗体阳性率与徐敏等的研究基本相一致，且2015年总感染抗体阳性率比2014年略高约1.5个百分点，无显著差异，均表现为粤北区域猪流感的总感染抗体阳性率相对较低；而不同猪场的阳性率范围与林文等研究基本相同，这可能与不同猪场的管理水平和猪群状况相关。但是，随着广东省畜牧产业的转移，近年来粤北区域的规模化养殖量大幅度增加，仅粤北韶关市的生猪出栏量就扩大到约300万头每年。这种区域疫病防控的优势能否保持和延续，就与区域内的养殖理念、防疫理念、防控布局等息息相关。当然，每个场的养殖和管理水平更是决定疾病发生率的重要因素，所以不同猪场的表现相差较大。第二，2014年和2015年的检测结果均表明，冬季猪流感病毒H1亚型感染抗体阳性率明显高于其他3个季节，与林文等报道秋冬两季的阳性率明显高于春夏季节的结论略有差异。粤北地区地处南岭山脉之脚，全年最高气温可到39℃，最低气温可达0℃，气温相对广东省其他地方而言，冬季相对较冷，这应该是造成冬季猪流感感染抗体阳性率相对较高的主要因素。

总之，猪流感的影响不仅在于其动物传染病学的意义，更在于其深远的公共卫生意义。现有的研究表明，猪流感病毒HA序列上受体结合位点具有与2种流感病毒受体相同的结合特异性，决定了猪流感不仅可感染猪，同时也具有感染禽、人、马等鸟类和其他哺乳动物的能力，而预防猪流感病毒H1亚型必须做好以下三方面的工作：一是预防猪感染H1亚型猪流感；二是预防猪流感传染人；三是预防猪流感在人与人之间的传播[10-11]。同时，应该加强猪流感病毒感染情况的监测，监控猪群中猪流感的发展动态。因此，本研究为摸清猪流感病毒H1亚型在粤北地区的流行情况获得了重要数据，研究工作可为制定该病的防控措施提供了基础资料。

[2] Rajao D S,Anderson T K,Gauger P C,etal.Pathogenesis and vaccination of influenza A virus in swine[J].Curr Top Microbiol Immunol,2014(385):307-326.

[3] 赵德明,张仲秋,周向梅,等.猪病学[M].10版.北京:中国农业出版社,2014.

[4] 林 文,黄良宗,刘远佳,等.广东省部分猪场猪流感抗体监测与分析[J].广东农业科学,2012(24):126-128.

[5] 徐 敏,贾春玲,杨德胜,等.广东省H1和H3 亚型猪流感病毒抗体血清学调查[J].动物医学进展,2010,31(10):116-120.

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[10] 李海燕,于康震,华英佐.猪流感病毒的种间传播及分子进化[J].中国兽医学报,2014,24(3):304-309.

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Serological Investigation and Analysis of Swine Influenza H1 Subtype in Farms of North Guangdong from 2014 to 2015

HU Hong-hui,HUANG Jian-qiang,NAN Wen-jin,WU Jing-bo,PENG Guo-liang

(ShaoguanUnivercity,Shaoguan,Guangdong,512005,China)

In order to investigate the epidemic and infection of H1 subtype SIV in north region of Guangdong,the H1 subtype swine influenza virus antibody detection reagent box was used to detect 376 porcine serum samples collected from 25 large-scale pig farms without SIV immunization in northern Guangdong.Results showed the total positive rates of H1 SIV antibody were 13.04% and 14.58% respectively in 2014 and 2015,while the positive rates from Junuary to March were 19.05% and 25.00% respectively.The positive rate of H1 SIV antibody in this area was relatively low,showing a certain regional characteristics.The antibody positive rate was significantly higher from January to March than that in other monthes,and showed relatively high antibody positive rate in winter only.

Swine influenza virus; antibody positive rate;H1 subtype

2016-06-02

广东省科技计划项目(2013B0203606008，2016A040402038)；广东省农业科技项目(016LM1141)；广东省协同创新发展中心平台项目(YKY-2014-52-16)；韶关市科技计划项目(2013/NO6,2014CX/N319)

胡鸿惠(1982-)，女，湖南郴州人，助理研究员，硕士研究生，主要从事动物生产与疾病研究。

S852.659.5;S858.28

B

1007-5038(2017)01-0125-04