针刺配合益智饮对血管性痴呆大鼠海马组织Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

吴咚咚,李岩,张智龙

(1.天津中医药大学，天津 300193；2.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040;3.天津市中医药研究院附属医院，天津 300193)

针刺配合益智饮对血管性痴呆大鼠海马组织Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

吴咚咚1,李岩2*,张智龙3

(1.天津中医药大学，天津 300193；2.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040;3.天津市中医药研究院附属医院，天津 300193)

目的：通过观察醒神开窍针刺法配合益智饮对VD大鼠学习记忆能力和海马组织细胞凋亡相关因子表达的影响，以期从调控海马组织细胞凋亡角度揭示其作用机制。方法：将成年SD大鼠通过随机数字表分为假手术组、模型组、针刺组、中药组、针药结合组和西药组，每组6只。采用线栓法制成大鼠大脑中动脉梗塞血管性痴呆模型。针刺组给予醒神开窍法针刺治疗，每日1次，每次30min，共治疗8周；中药组给予中药益智饮灌胃治疗，每日1次，每次2mL；针药结合组同时给予针刺和中药治疗，方法同前；西药组给予盐酸多奈哌齐口服，疗程同前。采用避暗法和穿梭箱法进行学习记忆能力测试；采用免疫组化方法观察大鼠海马神经元Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果：避暗法和穿梭箱法结果表明，模型组大鼠潜伏期缩短，错误次数和电击时间增多，与假手术组相比具有显著差异(P<0.05)；针刺组、中药组、针药组和西药组VD大鼠潜伏期有所延长，错误次数和电击时间也有所减少，与模型组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。针药组大鼠潜伏期显著延长，错误次数和电击次数均明显减少，与针刺组、中药组和西药组相比，疗效更加显著(P<0.05)。免疫组化检测结果显示，模型组Bax蛋白表达阳性细胞数增加，Bcl-2阳性细胞数降低，与假手术组比较具有显著差异(P<0.05)。与模型组相比，治疗后针刺组、中药组、针药组和药物组Bax的表达降低，Bcl-2的表达增加，差异显著(P<0.05)。与针刺组、中药组和药物组比较，治疗后针药组Bax的表达降低，Bcl-2的表达增加，差异显著(P<0.05)。结论：针刺配合益智饮治疗能够显著改善血管性痴呆大鼠学习认知功能，其作用机制可能是通过上调Bcl-2，下调Bax蛋白表达，从而抑制神经细胞凋亡发挥作用。

血管性痴呆；醒神开窍针刺法；益智饮；细胞凋亡

血管性痴呆(VascularDementia，VD)是指由缺血性或出血性脑卒中所致脑区低灌注而引起的严重认知及记忆行为等功能障碍症候群[1]。目前，对于VD的发病机制尚不明确，研究较多的主要包括胆碱能机制、氨基酸损伤机制、自由基损伤机制和神经细胞凋亡机制等[2-3]。细胞凋亡是生物界细胞的一种基本生物学现象，是区别于细胞坏死的一种特殊死亡形式，在外界生理或病理因素诱导下可启动程序基因调控细胞凋亡的发生，细胞会按照一定的程序控制而自我死亡[4]。细胞凋亡在生物体的进化、内环境的稳定以及生物体多个系统的发育中起着重要的作用。细胞凋亡是缺氧缺血过程中神经元损伤的一种形式，细胞凋亡与临床上很多疾病的发生有关[5]，细胞凋亡机制在血管性痴呆研究中越来越受到重视[6]。

面对血管性痴呆的发病机制尚不明确，并且治疗药物疗效尚不确切、不良反应多的难题，运用针灸和中药治疗血管性痴呆越来越受到人们的关注[7-11]，针灸和中药治疗血管性痴呆的优势和特色在于不仅可以显著改善临床症状，而且不良反应少，然而其作用机制尚未完全阐明。本研究通过建立血管性痴呆大鼠模型，观察不同治疗方法对VD大鼠学习记忆能力和海马组织细胞凋亡相关因子Bcl-2和Bax表达的影响，有望阐明针刺配合益智饮治疗血管性痴呆的子生物学作用机制，同时也为中医药方法治疗血管性痴呆提供新的靶点和思路。

1 材料与方法

1.1 实验动物

清洁级健康雄性SD大鼠60只，体质量(220±30)g，由黑龙江中医药大学动物实验中心提供(动物合格证号SCXK(黑)2008004)。动物适应性饲养1周后，采用随机数字表法将实验大鼠分成6组，分别为假手术组、模型组、针刺组、中药组、针药结合组、西药组，每组各10只。

1.2 实验仪器

西门子电冰箱(KK26U79TI型，德国西门子)，电热恒温培养箱(HH.B11-360型，上海跃进)，电热恒温干燥箱(GZX-DH400型，上海跃进)，全自动石蜡切片机(HM355S型，德国美康)，OLYMPUS显微镜(BX-60型，日本奥林巴斯)；避暗箱(YLS-17B，安徽省淮北市正华科技有限公司)；穿梭箱(ZH-CSC型，安徽省淮北市正华科技有限公司生产)。

1.3 药品及试剂

Bcl-2，Bax多克隆抗体试剂盒(武汉博士德)，生物素化山羊抗兔IgG(A0277，中国碧云天)，辣根酶标记链酶亲合素(A0303，中国碧云天)，无水乙醇(10009218，中国国药)，山羊血清(SL2-10，中国Solarbio)，过氧化氢(10011218，中国国药)；益智饮由黑龙江中医药大学附属第一医院中药房提供，根据自拟方，将药物用双蒸水经超声细胞粉碎机制备成浓度为 2.5mg/L的混悬液，高压灭菌，4℃保存备用，用前摇匀。盐酸多奈哌齐(安理申)，规格：5mg/片(卫材)。

1.4 实验方法

1.4.1 线栓及线栓头端的处理

将直径 0.24mm的尼龙线剪成5cm左右的小段，均匀地涂上一层聚胺酯在尖端3mm长度在60～70℃加热使线段软化，制作成切角约为20度左右的弧形(为了保证头端圆润)，头端快速烧灼熔化成球形，然后一端用细砂纸显微镜下打磨，并用75%的酒精浸泡处理备用。在尖端3mm长度蘸上一层聚胺酯后倒垂，待头端凝固成球形，保持头端直径均为 0.30mm，在距打磨端18、19、20mm处用黑色记号笔做上标记。

1.4.2 模型制备

采用改良Longa线栓法[12]，麻醉以10%水合氯醛(3.5mg/kg)，常规术区消毒，在颈部右侧旁正中做切口，逐层分离，充分暴露右侧颈总动脉(CCA)，并于CCA挂手术线备用同时在颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)处挂线，分离暴露ECA主干，在其根部打结并采用小动脉夹夹闭CCA近心端，夹闭ICA在CCA近头端距分叉部5mm处斜行剪一小口,导入线栓进入ICA移开夹在ICA的小动脉夹，将线栓插入至设计深度，注意标记的深度，遇阻力停止插入，结扎切口处CCA挂线，去除CCA的小动脉血管夹同时确认无出血后缝合皮肤，皮肤外留线头约0.5cm，术后2h抽出线栓。假手术对照组大鼠除不用栓线栓塞外其余处理同实验组。

1.4.3 动物分组

由于手术过程死亡1只，因手术导致大鼠无任何自发活动的1只。余大鼠通过体质量随机分组，分为假手术组，模型组，针刺组，中药组，针药结合组，西药组，每组各10只。

1.4.4 动物治疗

假手术组:术后与其它各组同等条件下饲养，给予生理盐水2mL每日灌胃，直至实验结束，其余未经任何治疗。

模型组:术后与其它各组同等条件下饲养，给予生理盐水2mL每日灌胃，直至实验结束，其余未经任何治疗。

针刺组:醒神开窍针法选穴：神庭、百会。针具和皮肤常规消毒，选用安迪牌0.25mm×25mm的毫针，快速进针，每日1次，每次留针40min，连续治疗8周。

中药组:口服益智饮(自拟方)：黄芪50g，山茱萸15g，制首乌50g，肉桂10g，熟地黄15g，远志15g，石菖蒲10g，川芎15g，竹茹10g，酸枣仁30g，甘草10g。用法及用量每只大鼠每次益智饮制剂灌胃2mL，每日2次。共治疗8周。

针药组:给予针刺和中药联合治疗，疗程同上。

西药组:按体质量1mg/(kg·d)盐酸多奈哌齐溶于2mL生理盐水中每日两次灌胃。共治疗8周。

各组大鼠分笼饲养，每笼4～5只，保证动物饲养室温度为21～24℃，室内湿度50%～70%，12h交替照明，自由进食和饮水[13]。

1.4.5 动物取材

动物行为学观察后，用10%水合氯醛腹腔麻醉(3.5mg/kg)，迅速开胸，暴露心脏，将注射器针头快速插入左心室，固定针头后缓慢注入生理盐水，大约注入200mL后可出现清澈透亮的液体自右心耳流出，接着用注射器缓慢注入4%多聚甲醛溶液，约100～200mL后可见大鼠四肢抽搐，皮肤、肺脏、肝脏及眼睑变白，迅速断头，自前囟处打开颅骨，取出完整大脑，在冰盒上迅速取出海马组织，置于备好的装有4%多聚甲醛溶液的瓶中固定，然后将海马组织保存于4℃冰箱中备用。每组取材6只。

1.4.6 免疫组织化学染色法

用振荡切片机将组织块行连续冠状切片，层厚5μm；将组织切片用0.01MPBS漂洗30min×2；组织用滤纸吸干后，用内源性过氧化物酶封闭液在室温下封闭10min，再用0.01MPBS漂洗5min×3；将脑组织切片置于0.3%Triton-100中30min；用山羊血清封闭液封闭1h。封闭用正常羊血清工作液封闭1h；用0.01MPBS将一抗稀释为1∶100比例，将组织切片置于一抗稀释液中4℃过夜；用0.01MPBS漂洗5min×3，以去除残留的一抗稀释液；加入二抗工作液，室温下置于水平摇床上2h；用0.01MPBS漂洗5min×3，以去除残留的二抗工作液；加入辣根过氧化酶标记的链酶亲和素，室温下孵育1h；将组织切片按照DAB显色液使用说明书依次加入显色液，待其变为棕黄色后，放入蒸馏水中终止反应，然后将组织切片置于清洁的载玻片上，滤纸吸干；经梯度酒精脱水，并二甲苯溶液透明后，用明胶封片；每组选择6只大鼠取材，每只大鼠海马组织选择3张切片，在400倍镜下随机选择连续5个视野，分别计算每个视野中的Bcl-2和Bax阳性细胞数。

1.5 统计学分析

2 实验结果

2.1 大鼠学习记忆能力检测

避暗法检测结果表明，模型组大鼠潜伏期缩短，错误次数增多，与假手术组相比具有显著差异(P<0.05)；针刺组、中药组、针药组和西药组VD大鼠潜伏期有所延长，错误次数有所减少，与模型组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。针药组大鼠潜伏期显著延长，错误次数明显减少，与针刺组、中药组和西药组相比，疗效更加显著(P<0.05)。

穿梭箱法检测结果表明，模型组大鼠电击次数增多，电击时间延长，主动回避次数减少，与假手术组相比具有显著差异(P<0.05)；针刺组、中药组、针药组和西药组VD大鼠电击次数减少，电击时间缩短，主动回避次数增多，与模型组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。针药组大鼠电击次数显著减少，电击时间明显缩短，主动回避次数显著增多，与针刺组、中药组和西药组相比，疗效更加显著(P<0.05)。以上结果表明，针药结合能够改善VD大鼠学习记忆能力，疗效优于针刺组、中药组、和西药组。详见表1，表2。

表1 避暗法观察不同治疗组对VD大鼠学习记忆功能的影响

注:与假手术组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05；与针刺组、中药组和西药组比较，#P<0.05

表2 穿梭箱法观察不同治疗组对VD大鼠学习记忆功能的影响

注:与假手术组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05；与针刺组、中药组和西药组比较，#P<0.05

2.2 各组大鼠海马组织Bcl-2和Bax蛋白的表达

2.2.1 各组大鼠海马组织Bax的表达

结果显示，Bax蛋白染色呈棕黄色颗粒，位于胞浆内。假手术组无明显Bax阳性表达，模型组Bax蛋白表达阳性细胞数增加，与假手术组比较差异显著(P<0.05)。与模型组相比，治疗后针刺组、中药组、针药组和药物组Bax的表达降低，差异显著(P<0.05)。与针刺组、中药组和药物组比较，治疗后针药组Bax的表达降低，差异显著(P<0.05)。以上结果表明，针刺组、中药组、针药组和药物组均能抑制脑组织海马区Bax的表达，从而减少神经细胞凋亡，保护受损神经细胞，但针药组的治疗优势更加明显，疗效显著。见图1。

图1 各组大鼠海马组织bax蛋白表达情况注:与假手术组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05；与针刺组、中药组和西药组比较，#P<0.05

2.2.2 各组大鼠海马组织Bcl-2的表达

结果显示，Bcl-2 蛋白染色呈棕黄色颗粒，位于核膜或胞浆内。假手术组未见明显Bcl-2表达，模型组Bcl-2阳性细胞数降低，与假手术组比较差异显著(P<0.05)。与模型组相比，治疗后针刺组、中药组、针药组和药物组Bcl-2的表达增加，差异显著(P<0.05)。与针刺组、中药组和药物组比较，治疗后针药组Bcl-2的表达增加，差异显著(P<0.05)。以上结果表明，针刺组、中药组、针药组和药物组均能促进脑组织海马区Bcl-2的表达，从而抑制神经细胞凋亡，保护受损神经细胞，尤以针药组疗效更加显著。见图2。

图2 各组大鼠海马组织bcl-2蛋白表达情况注:与假手术组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05；与针刺组、中药组和西药组比较，#P<0.05

3 讨论

血管性痴呆属中医学“呆病”“健忘”范畴[14]。本病病位在脑，涉及五脏，尤与心、肝、脾、肾有关，病变多见虚实夹杂证。本病起因于中风，而中风多发于中、老年人，《素问·阴阳应象大论》曰：“年四十而阴气自半也，起居衰矣。”肾精亏虚是中风发病的根本，肾为先天之本，主骨生髓，而脑为髓海，元神之府。正如《医林改错·脑髓说》曰：“年高无记忆者，脑髓渐空；年高肾亏髓海空虚，发为呆病”，由此可见，肾精不足，大脑失养，灵气不通则出现意识模糊、神情呆滞、精神抑郁、语无伦次、遇事多忘、头目不清、喃喃独语、不思饮食等症。百会是诸多经脉的交会穴、诸阳之会，针刺百会有醒神益智、填髓充脑的功效[15]；神庭穴为督脉要穴，并与足太阳经相交，可以治疗一切神志病症。血管性痴呆中医防治以补肾益精为主，活血袪瘀为辅，并且重视疏肝解郁法在治疗血管性痴呆中的重要地位。益智饮汤药可以补肾活血，益精补脑，醒神益智：黄芪与党参两者能够补气健脾；熟地、山茱萸补肾滋阴、益髓填精；炙首乌和酸枣仁能够补精益血，从而益智健脑；远志、石菖蒲、竹茹均能祛痰开窍，远志还有益智安神之效；肉桂一味能够温通经脉，使气血运行；川芎活血化瘀兼具行气之功效，配合甘草调和诸药，诸药合用，共奏补肾填精健脑之功效。

避暗法的原理是利用小鼠或大鼠具有趋暗避明的习性设计的装置，一半是暗室，一半是明室，中间有一小洞相连，暗室底部铺有通电的铜栅，动物进入暗室即受到电击。计算机自动记录动物进入暗箱的潜伏期(s)和5min内被电击的次数(错误次数)。将小鼠放在暗箱，给予0.4mA电击，持续5s，电流强度为能够引起小鼠发声和退缩的最小电流，将小鼠放回笼内，清洁操作箱，进行下一只的训练，1h后重复训练1次。避暗潜伏期不足60s的，1h后重复训练1次，仍不达标的，淘汰。24h后进行测试，记录5min小鼠从明区到暗区的潜伏期和达到回避标准的动物数。穿梭箱法是利用计算机自动记录动物电击次数，电击时间和主动回避次数。该装置由实验箱和自动记录装置组成。箱底部由一挡板分成左右两侧，箱顶部有光源控制器。训练时将大鼠放在其中一侧，20s之后打开光源，持续5s后打开电流刺激，共刺激10s，使大鼠逃离至另一侧，通过多次训练使大鼠形成条件反射。在实验记录前3天开始，给予大鼠每日1次的训练，共训练3次后开始记录大鼠遭受电击次数，遭受电击的总时间和逃避潜伏时间，以此来反映大鼠学习记忆能力。本研究避暗法检测结果表明，模型组大鼠潜伏期缩短，错误次数增多，与假手术组相比具有显著差异(P<0.05)；针刺组、中药组、针药组和西药组VD大鼠潜伏期有所延长，错误次数有所减少，与模型组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。针药组大鼠潜伏期显著延长，错误次数明显减少，与针刺组、中药组和西药组相比，疗效更加显著(P<0.05)。穿梭箱法检测结果表明，模型组大鼠电击次数增多，电击时间延长，主动回避次数减少，与假手术组相比具有显著差异(P<0.05)；针刺组、中药组、针药组和西药组VD大鼠电击次数减少，电击时间缩短，主动回避次数增多，与模型组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。针药组大鼠电击次数显著减少，电击时间明显缩短，主动回避次数显著增多，与针刺组、中药组和西药组相比，疗效更加显著(P<0.05)。以上结果表明，针药结合能够改善VD大鼠学习记忆能力，疗效优于针刺组、中药组、和西药组。

细胞凋亡是由基因控制的程序性细胞死亡[16]，Bcl-2蛋白家族是目前研究发现的参与调控神经元凋亡的基因中发挥着至关重要作用的一类[17]。Bcl-2家族根据其在细胞凋亡中发挥的作用不同，又可以分为两类：一类是以Bcl-2基因为代表的抗细胞凋亡基因；另一类是以Bax基因为代表的促细胞凋亡基因。研究发现，Bcl-2表达升高，则细胞凋亡被抑制，而Bax表达增高，则发挥促凋亡作用，因此推测Bcl-2和Bax两者在体内表达水平的高低与凋亡调控具有直接关系[18]。本研究结果显示，Bax蛋白染色呈棕黄色颗粒，位于胞浆内。假手术组无明显Bax阳性表达，模型组Bax蛋白表达阳性细胞数增加，与假手术组比较差异显著(P<0.05)。与模型组相比，治疗后针刺组、中药组、针药组和药物组Bax的表达降低，差异显著(P<0.05)。与针刺组、中药组和药物组比较，治疗后针药组Bax的表达降低，差异显著(P<0.05)。以上结果表明，针刺组、中药组、针药组和药物组均能抑制脑组织海马区Bax的表达，从而减少神经细胞凋亡，保护受损神经细胞，但针药组的治疗优势更加明显，疗效显著。Bcl-2蛋白染色呈棕黄色颗粒，位于核膜或胞浆内。假手术组未见明显Bcl-2表达，模型组Bcl-2阳性细胞数降低，与假手术组比较差异显著(P<0.05)。与模型组相比，治疗后针刺组、中药组、针药组和药物组Bcl-2的表达增加，差异显著(P<0.05)。与针刺组、中药组和药物组比较，治疗后针药组Bcl-2的表达增加，差异显著(P<0.05)。以上结果表明，针刺组、中药组、针药组和药物组均能促进脑组织海马区Bcl-2的表达，从而抑制神经细胞凋亡，保护受损神经细胞，尤以针药组疗效更加显著。

综上所述，针刺配合益智饮治疗能够显著改善血管性痴呆大鼠学习认知功能，其作用机制可能是通过上调Bcl-2，下调Bax蛋白表达，从而抑制神经细胞凋亡发挥作用。

[1] 贾建平．神经病学[M]．北京:人民卫生出版社，2008:205．

[2] 高广生，高广慧，刘淑华，等.中西医结合治疗血管性痴呆的研究进展[J].中医药信息，2015,32(4):127-129.

[3] 杨申,崔瑞亭,刘运林.血管性痴呆的细胞学和分子机制研究进展[J].中华临床医师杂志(电子版),2016,10(12):1785-1789.

[4] 向军军,赖菁菁,胡跃强.近3年线粒体介导细胞凋亡的研究进展[J].中西医结合心脑血管病杂志,2016,14(13):1497-1499.

[5] 马丙祥,陈恬恬,王怡珍.中药抑制神经细胞凋亡作用的研究进展[J].现代中西医结合杂志,2016,25(11):1241-1243+1254.

[6] 孙邈.复智胶囊及大黄素对VD大鼠海马和SH-SY5Y线粒体凋亡通路与I_k电流关系的影响[D].北京:北京中医药大学,2016.

[7] 韩飞,荆志伟,于亚南,等.中药有效成分治疗血管性痴呆的研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2012，18(7):273-276.

[8] 张亚敏,孙华,陈素辉.针灸干预血管性痴呆的临床研究进展[J].针灸临床杂志,2012,28(8):65-68.

[9] 冯德琳，张倩，孙远征.头穴丛刺为主治疗血管性痴呆的临床研究[J].中医药信息，2014,31(4):139-141.

[10] 张立，李季，陈静，等.头穴丛刺结合康复训练治疗血管性痴呆的临床观察[J].中医药信息，2015,32(1):95-96.

[11] 牛文民，刘智斌，杨晓航，等.头皮发际区微针疗法对血管性痴呆患者认知功能及内皮素的影响[J].中医药信息，2015,32(1):73-75.

[12] 李岩,赵军,赵桂君,等.益智饮对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马神经元保护作用的实验研究[J].中国中医药科技,2014,21(4):377-378.

[13] 王胜男,李岩.醒脑调神针刺法配合电项针治疗血管性痴呆的临床观察[J].针灸临床杂志,2015,31(4):20-22.

[14] 高广生，高广慧，刘淑华，等.醒脑胶囊对拟血管性痴呆大鼠脑内GSH-PX和AchE活性影响的实验研究[J].中医药学报，2015，43(3)：39-41.

[15] 李雪岩,刘刚,井哲,等.头项针治疗血管性痴呆的临床疗效观察[J].针灸临床杂志,2016,32(3):24-26.

[16] 张运克.补阳还五汤及拆方对脑缺血再灌注SD大鼠模型细胞凋亡及Bcl-2，Bax蛋白表达的影响[J].中华中医药杂志，2007，22(6):404.

[17]LockRM.MurphyImmunodetectingmembersofthebcl2familyofproteins[J].MethodsMolMed，2005，111:83.

[18]AmemiyaS，KamiyaT，NitoC，etal.Anti-apoptoticandneuro-protectiveeffectofedaiavonefollowingtransientfocalischemiainrats[J].EurJPharmacol，2005，516(2):125.

Effect of Acupuncture Combined with Yizhi Decoction on the Expression of Bcl-2 and Bax Protein in Hippocampus of Vascular Dementia Rats

WU Dong-dong1，LI Yan2，ZHANG Zhi-long3

(1.TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine,Tianjin300193,China;2.TheFirstAffiliatedHospitalofHeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China;3.TianjinAcademyofTraditionalChineseMedicineAffiliatedHospital,Tianjin300193,China)

Objective: To observe the effect of Xingshen Kaiqiao acupuncture plus Yizhi decoction on the learning and memory ability and related factors of hippocampus tissue apoptosis in VD rats, in order to reveal the mechanism on the regulation of hippocampus cell apoptosis. Methods: Adult SD rats were randomly divided into a sham operation group,a model group,an acupuncture group,a Chinese medicine group,an acupuncture and drug combination group and a western medicine group,with 6 rats in each group. Rat models with vascular dementia were induced by middle cerebral artery occlusion. The acupuncture group was given acupuncture treatment of Xingshen Kaiqiao acupuncture, 1 time daily, 30 minutes each time, a total of 8 weeks for the treatment; traditional Chinese medicine group was given intragastric administration of Yizhi decoction, 1 time daily, 2 mL each time; at the same time acupuncture and Chinese medicine therapy was given in the acupuncture combined with medicine group;the western medicine group was given Donepezil. The learning and memory ability was tested by the method of dark avoidance and shuttle box method. The expressions of Bcl-2 and Bax protein in hippocampus of rats were observed by immunohistochemistry. Results: Dark avoidance test and shuttle box test showed that the latency of the rats in the model group was shortened and error times and shock time were increased.Compared with the sham operation group there was a significant difference (P<0.05);in the acupuncture group, Chinese medicine group, acupuncture group and western medicine group VD rats were prolonged,and the error number and electric shock time were also reduced. Compared with the model group, the difference was statistically significant (P<0.05). Rats in the acupuncture group were significantly prolonged,and the number of errors and the number of shocks were significantly reduced.Compared with the acupuncture group, Chinese medicine group and western medicine group, the effect was more significant (P<0.05). The results of immunohistochemistry showed that the number of Bax positive cells in model group was increased; the number of Bcl-2 positive cells was decreased, and there was a significant difference between the model group and the sham operation group (P<0.05). Compared with the model group, the expressions of Bax in the acupuncture group, the traditional Chinese medicine group, the acupuncture group and the medicine group after treatment were decreased, but the expressions of Bcl-2 were increased significantly (P<0.05). Compared with the acupuncture group, the traditional Chinese medicine group and the medicine group, the expression of Bax was decreased,but the expression of Bcl-2 was significantly increased in the acupuncture group (P<0.05). Conclusion: Acupuncture combined with Yizhi decoction can significantly improve the cognitive function of vascular dementia rats.Its mechanism may be through upregulation of Bcl-2 and downregulation of Bax protein expression to inhibit the apoptosis of nerve cells.

Vascular dementia; Xingshen Kaiqiao acupuncture; Yizhi decoction; Apoptosis

2016-11-29

2016-12-30

黑龙江中医管理局项目(ZHY12-Z053)

吴咚咚(1983-)，男，博士研究生，研究方向：针灸防治脑血管疾病。

*通讯作者：李岩(1963-)，女，主任医师，硕士研究生导师，主要从事针灸临床工作。

R245.3;R

A

1002-2392(2017)01-0031-06