“植物细胞骨架的显示和观察”的简化方法

赵紫平

(甘肃省临夏中学 731100)

1 提出问题

细胞骨架是细胞重要的结构，它是由蛋白质丝组成的复杂的网状结构，根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维，它们对于细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化、物质运输、能量转换、信息交流和基因表达等起到重要的作用。在高中阶段，涉及细胞结构的基本实验有细胞膜的制备、线粒体和叶绿体的观察以及DNA和RNA在细胞中的分布等实验。这些实验的开展，有利于学生对细胞的整体结构和部分细胞器有一定的了解。但是如果真正要让学生对细胞的结构有整体的了解，还应该开设“细胞骨架的显示和观察”实验。然而对大多数的普通高中来说，没有条件和设备来支持完成细胞骨架的显示和制备。按照高中对于实验要求来说，只要能显示和观察就可以，所以可以进行如下的简化实验。

2 实验原理

用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可将细胞质膜和细胞质中的蛋白质和全部脂质溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受到破坏而得到保存，经戊二醛固定处理和考马斯亮蓝R250染色后，能在光镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构，就是细胞骨架。

3 实验步骤

3.1 仪器用具 显微镜、烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、镊子、剪刀、载玻片、盖玻片、吸水纸等。

3.2 实验试剂 6 mmol/L磷酸缓冲液(pH 6.8)、M-缓冲液、1% Triton X-100液、3%戊二醛、0.2%考马斯亮蓝R250染料、1/15 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.8)，实验材料可以选洋葱鳞叶。

3.3 具体步骤 ①取洋葱鳞茎内表皮，用剪刀剪成约1 cm2大小，置于装有pH 6.8磷酸缓冲液的50 mL烧杯中，使其下沉；②用吸管吸去磷酸缓冲液，用1% Triton X-100液，处理20～30 min；用吸管吸去Triton X-100液，再加入M-缓冲液，反复洗涤3次，每次10 min，除去Triton X-100；用吸管吸去M-缓冲液，加入3%戊二醛溶液，固定0.5～1 h；用吸管吸去固定液，用6 mmol/L磷酸缓冲液(pH 6.8)反复冲洗3次，每次10 min；用吸管吸去6 mmol/L磷酸缓冲液(pH 6.8)，加入0.2%考马斯亮蓝R250染液，染色20～30 min，吸去染液，用蒸馏水洗1～2次；③用镊子取出标本，置于载玻片上，用解剖针摊平，滴一滴蒸馏水，加盖玻片，制成临时装片。

4 实验结果

在显微镜下观察洋葱鳞茎表皮细胞的细胞质，视野中被染成深蓝色的网络状结构，即为细胞骨架结构。