乌头汤合防己黄芪汤的镇痛抗炎作用研究

刘志标，陈笑媚

乌头汤合防己黄芪汤的镇痛抗炎作用研究

刘志标，陈笑媚

目的 比较乌头汤合防己黄芪汤、乌头汤、防己黄芪汤的镇痛抗炎作用。方法 采用热板法、扭体法观察乌头汤合防己黄芪汤、乌头汤、防己黄芪汤的镇痛作用；采用蛋清所致的小鼠足跖肿胀炎症模型、二甲苯致小鼠耳肿胀模型，观察3种汤剂的抗炎作用。结果 乌头汤合防己黄芪汤组的热板镇痛作用强于乌头汤组、防己黄芪汤组，冰醋酸扭体镇痛率为62.32%，足跖肿胀率低于乌头汤组、防己黄芪汤组，二甲苯致耳肿胀抑制率为68.68%。结论 乌头汤合防己黄芪汤有镇痛抗炎作用，且作用强于乌头汤、防己黄芪汤。

乌头汤合防己黄芪汤；镇痛；抗炎

0 引言

乌头汤首见于《金匮要略·中风历节病脉证并治五》，主治历节病，即骨质增生、痛风、风湿性关节炎等，是治疗风寒湿痹的代表方[1]。防己黄芪汤见于《金匮要略》，主治风湿气虚症，是风湿证、治疗风水的常用方剂[2-3]。笔者观察了乌头汤合防己黄芪汤对活动期强直性脊柱炎(AS)患者血清TNF-α、IL-1、IL-6的影响，结果表明，乌头汤合防己黄芪汤治疗AS疗效显著，优于乌头汤组、防己黄芪汤组(P<0.05)[4]。从中医角度辨病辨证，AS病因由风热、风寒、风湿或兼杂所致，从临床实际出发，可分为风湿热郁、风寒湿阻、肝肾空虚、痰热互结等证型[5]。从中西医结合防治的思路及方法上，应调节机体阴阳平衡，提高免疫功能，抗炎镇痛，改善关节自主活动能力[6]。本文是在已有研究[4]基础上，针对镇痛抗炎模型进行的药理学研究，以验证支持临床合方用药的疗效。

1 材料与仪器

1.1 实验动物 小鼠，雌雄兼用，体重(20±2)g，由广东省实验动物中心提供，许可证号：SCXK(粤)2014-0005。根据实验性质和性别分笼喂养，自由采食饮水。

1.2 药品 制川乌AconitumcarmichaeliiDebx.产于四川江油(批号：140420)，麻黄EphedrasinicaStapf.产于内蒙古(批号：140423)，白芍PaeonialactifloraPall.产于安徽亳州(批号：140506)，黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bunge.产于内蒙古(批号：140425)，甘草GlycyrrhizauralensisFisch.产于内蒙古乌拉(批号：140513)，防己StephaniatetrandraS.Moore.产于广东(批号：140522)，白术AtractylodesmacrocephalaKoidz.产于浙江(批号：140526)，药材均购于康美药业股份有限公司，经陈笑媚主管中药师鉴定。吲哚美辛片(广东华南药业集团有限公司，批号：140511)；其他所用试剂均为分析纯，水为纯净水。

1.3 仪器 智能热板仪(RB-200，成都泰盟科技有限公司)；万分之一分析天平(SH1MADZU，广州仪通兴化仪器仪表有限公司)；双拼数控超声波清洗器(上海声彦超声波仪器有限公司)。

2 方法

2.1 给药剂量的设置 分别以人用乌头汤合防己黄芪汤、乌头汤、防己黄芪汤、吲哚美辛的剂量，根据体重换算法：动物用药剂量(g/kg)=K×人用剂量(g/kg)，计算小鼠的用药剂量(20 g K=9.01)。各组给药剂量：乌头汤合防己黄芪汤组为2.00 g/kg，乌头汤组为2.00 g/kg，防己黄芪汤组为2.00 g/kg，阳性对照吲哚美辛组为0.65 g/kg，生理盐水对照组剂量为20.00 g/kg。

2.2 药液的制备 乌头汤合防己黄芪汤(制川乌∶防己∶麻黄∶白芍∶黄芪∶甘草∶炒白术为6∶12∶9∶9∶15∶9∶9)各单味药混合，进行2次煎煮，煎煮时间均为1.5 h，过滤，合并2次滤液。旋蒸浓缩至所需体积，以0.4 g/mL放入冰箱备用。乌头汤(制川乌∶麻黄∶白芍∶黄芪∶甘草为6∶9∶9∶9∶9)、防己黄芪汤(防己∶黄芪∶甘草∶炒白术为12∶15∶6∶9)的制备方法同乌头汤合防己黄芪汤。

2.3 热板镇痛试验[7-8]取雌性小鼠，放入(55±0.5) ℃热板测痛仪中，以舔后足作为疼痛反应指标，测定小鼠给药前痛阈值。痛阈值<30 s视为合格小鼠，将50只合格小鼠随机分为5组，每组10只。连续6 d灌胃给药，实验前禁食不禁水24 h，第7天各组小鼠继续给药，给药后30、60、90、120 min测量小鼠的痛阈值。测定过程中，如60 s内小鼠无痛厥反应，立即取出，并以60 s计算。痛阈值提高百分率(%)=(给药后痛阈值-给药前痛阈值)/给药前痛阈值×100%。

2.4 冰醋酸扭体试验[9]取小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，给药方法同“2.3”项。末次给药后30 min，腹腔注射0.6%冰醋酸，0.2 mL/只，同时用秒表计时，记录小鼠15 min内出现的扭体次数。各给药组与空白对照组比较。药物镇痛百分率(%)=(对照组扭体次数-给药组扭体次数)/对照组扭体次数×100%。

2.5 足跖肿胀试验[10]取雄性小鼠50只，随机平均分为5组。在小鼠左后足跖正面上端作一清晰横线，利用容积测量装置，采用排水法测定鼠爪体积(Vn)，分别测3次，取平均值为给药前的足跖体积。连续灌胃给药5 d，于末次给药1 h后，用生理盐水溶液调配好的10%蛋清(0.1 mL/跖)注入小鼠左后腿跖皮下，测定小鼠足跖体积(Vt)，计算足跖的肿胀率。肿胀率=(致炎后足跖体积-致炎前足跖体积)/致炎前足跖体积×100%。

2.6 二甲苯致耳肿胀试验[11]取健康小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。阳性药物仅第3天给药，其余各组均连续灌胃给药3 d，1次/d，末次给药60 min后，在小鼠右耳正反面均匀涂抹二甲苯20 μL/只致炎，左耳不涂作为对照，用直径9 mm的打孔器在左右耳相同位置打下耳片，称量左右耳的质量，并计算其差值(肿胀度)及抑制率。肿胀度=右耳质量-左耳质量。肿胀率=(右耳质量-左耳质量)/左耳质量×100%。

3 结果

3.1 热板法镇痛试验 由表1可见，防己黄芪汤组的镇痛作用不明显，1h后，乌头汤组的镇痛作用较生理盐水对照组减弱，而乌头汤合防己黄芪汤组、吲哚美辛组的镇痛效果与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，且作用时间长。

表1 热板法镇痛试验结果

注：与生理盐水对照组比较，*P<0.05；与给药前痛阈值比较，△P<0.05

3.2 冰醋酸扭体试验 乌头汤合防己黄芪汤组、吲哚美辛组的镇痛效果与生理盐水对照组相比，差异有统计学意义(P<0.01)，乌头汤合防己黄芪汤组的镇痛率为62.32%，接近吲哚美辛的镇痛率(71.06%)，而防己黄芪汤组、乌头汤组的镇痛率低于乌头汤合防己黄芪汤组(P<0.05)。见表2。

3.3 足跖肿胀试验 在1、2 h时，乌头汤组、防己黄芪汤组与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，防己黄芪汤组在4 h时、乌头汤组在6 h时的足跖肿胀率与生理盐水对照组比较，差异无统计学意义，说明其抗炎作用减弱，而6 h时，乌头汤合防己黄芪汤组与生理盐水对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

3.4 二甲苯致耳肿胀试验 乌头汤合防己黄芪汤组、吲哚美辛组的抑制率高于生理盐水对照组(P<0.01)；防己黄芪汤组、乌头汤组的抑制率低于乌头汤合防己黄芪汤组(P<0.05)，肿胀度高于乌头汤合防己黄芪汤组(P<0.05)。见表4。

表2 冰醋酸扭体试验结果

注：剂量同表1；与生理盐水对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

表3 足跖肿胀试验结果

注：与生理盐水对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

表4 二甲苯致耳肿胀试验结果(n=10)

注：与生理盐水对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

4 讨论

本实验结果表明，乌头汤合防己黄芪汤组的镇痛、抗炎作用均强于单用乌头汤、防己黄芪的效果，且其镇痛、抗炎作用与阳性对照吲哚美辛接近，表明乌头汤、防己黄芪汤合用起到了加合的作用，优于单个方剂使用。本试验从另外一个方面验证了文献[4]的研究结果，为临床合方用药提供了数据和参考依据，说明乌头汤合防己黄芪汤的药理药效及临床研究具有一定的价值。

[1] 毛丽珠,黄丽华,吴定奇.二藤乌头汤治疗活动期类风湿关节炎的疗效及护理[J].黑龙江医学,2013,37(3):220-221.

[2] 骆洪道.防己黄芪汤临床应用举例[J].浙江中医杂志,2008,43(10):568.

[3] 吴永江.防己黄芪汤临床及实验研究概况[J].中国中医药,2012,10(13):163-164.

[4] 陈笑媚,温天燕,陈远林,等.乌头汤合防己黄芪汤对活动期强直性脊柱炎患者血清TNF-α、IL-1、IL-6的影响[J].今日药学,2015,25(7):491-493.

[5] 王丽敏.强直性脊柱炎的中医证治体会[J].中国中医急症,2009,18(1):141-142.

[6] 马武开,钟琴,姚血明.中医药防治强直性脊柱炎的思路及方法[J].中医杂志,2008,49(7):651-653.

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[8] 王艳,杨静,李志响,等.金樱根茎抗炎作用的对比研究[J].中国现代中药,2010,12(3):34-35.

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[10]易荆丽,赵永恒,周毅生,等.五甲氧基黄酮的镇痛抗炎作用研究[J].中成药,2014,36(12):2609-2611.

[11]王丹华,刘春芳,谭淑芳,等.乌头汤对大鼠的镇痛作用及初步机制探讨[J].中国实验方剂学,2014,20(10):109-112.

Study on the analgesic and anti-inflammatory effect of Wutou decoction with fangji huangqi decoction

LIU Zhi-biao,CHEN Xiao-mei

(Pharmacy Department of Longgang Central Hospital,Shenzhen 518100,China)

Objective To compare the analgesic and anti-inflammatory effects among Wutou decoction with fangji huangqi decoction,Wutou decoction and Fangji huangqi decoction.Methods The analgesic effects of Wutou decoction with fangji huangqi decoction,Wutou decoction and Fangji huangqi decoction were observed by using hot plate method and torsion body method.The anti-inflammatory effects of the 3 decoctions were observed by antagonism by egg-white-induced paw edema model and xylene-induced mice ear swelling model.Results The analgesic effect of Wutou decoction with fangji huangqi decoction was better than that of Wutou decoction and Fangji huangqi decoction,and the analgesic rate of acetic acid was 62.32%;the foot swelling rate of Wutou decoction with fangji huangqi decoction was lower than that of Wutou decoction and Fangji huangqi decoction,and the inhibition rate of xylene-induced ear swelling was 68.68%.Conclusion Wutou decoction with fangji huangqi decoction has analgesic and anti-inflammatory effect,which is better than Wutou decoction and Fangji huangqi decoction.

Wutou decoction with fangji huangqi decoction;Analgesia;Anti-inflammatory

2016-05-29

深圳市龙岗中心医院药剂科，深圳 518100

深圳市龙岗区2013年度科技计划医疗卫生项目(YS2013129)

10.14053/j.cnki.ppcr.201701008