脑脊液中α-synuclein与帕金森病相关性的Meta分析

李宏伟 文 敏 芶 云 杨 铁 徐 利 赵文静 张春林 周 波

(贵州医科大学人体解剖学教研室，贵州 贵阳 550004)

脑脊液中α-synuclein与帕金森病相关性的Meta分析

李宏伟 文 敏 芶 云 杨 铁1徐 利2赵文静1张春林1周 波1

(贵州医科大学人体解剖学教研室，贵州 贵阳 550004)

目的 综合评价人脑脊液α-synuclein(α-syn)表达水平与帕金森病(PD)的相关性。方法 利用Meta分析方法对国内外公开发表的关于人脑脊液α-syn水平与PD相关性的研究文献进行综合定量分析。结果 共收集到符合纳入标准的文献16篇，累计病例共1 337例，对照共1 045例；Meta分析结果显示，PD患者脑脊液总α-syn表达水平显著低于对照组(总体效应检验Z=5.66，P<0.001，合并效应值为-0.89，95%CI=-1.20～-0.58，位于无效竖线左侧)；PD患者脑脊液α-syn寡聚体表达水平显著高于对照组(总体效应检验Z=6.20，P<0.001，合并效应值为0.73，95%CI=0.50～0.96，位于无效竖线右侧)；PD患者脑脊液α-syn寡聚体/总α-syn表达水平显著高于对照组(总体效应检验Z=4.51，P<0.001，合并效应值为1.22，95%CI=0.69～1.75，位于无效竖线右侧)；漏斗图分布呈倒漏斗形，近似对称，发表偏倚较小；敏感性分析显示结果可靠。结论 脑脊液总α-syn、α-syn寡聚体、α-syn寡聚体/总α-syn表达水平与PD密切相关，脑脊液α-syn寡聚体、α-syn寡聚体/总α-syn的变化更适于作为PD的诊断标记。

α-synuclein；寡聚体；帕金森病；脑脊液

目前帕金森病(PD)诊断主要依靠临床标准(患者的临床特征以及医生的临床经验等)，此标准仍存在缺陷，通常患者确诊时黑质多巴胺能神经元已经丢失70%以上〔1～3〕。因此，探寻一种特异性的早期诊断标记对PD的治疗尤为重要。目前临床上尚缺少稳定、可靠的诊断标记。近年发现α-synuclein(α-syn)的异常聚集与PD密切相关，PD的特异性病理标记路易小体中检测到了α-syn的多种成分，如α-syn单体、寡聚体等，推测其可能成为PD潜在的诊断标记〔4〕。我们在先前的研究中发现血浆α-syn表达水平与PD无明显相关性〔5〕。脑脊液能够更为直接地反映中枢神经系统的病理与代谢，以脑脊液α-syn表达水平作为PD诊断的生物标记已经成为当前研究的热点，但国内外各项研究结果差异较大，部分研究认为PD患者脑脊液α-syn表达水平显著低于正常对照〔6～16〕，另一部分则认为PD患者脑脊液α-syn表达水平与正常对照无显著差异〔17～21〕。因此，本研究拟通过对国内外公开发表的有关脑脊液α-syn表达水平与PD 相关性的研究文献进行Meta 分析，以期综合评价两者间的联系。

1 资料与方法

1.1 资料来源分别以“parkinson′s disease /PD/帕金森病”、“(α-synuclein/α-syn/alpha-synuclein/alpha-syn /α-突触核蛋白”、与“cerebrospinal fluid/CSF/脑脊液”结合以“主题、关键词、主题词”途径，联合检索中国生物医学文献数据库(CMB)和中国学术期刊全文数据库(CNKI)获得全部相关的中文文献，检索Pubmed，Web of Science，the Cochrane Library和China National Knowledge Infrastructure(CNKI)等外文数据库，收集1980～2014年国内外公开发表的有关人脑脊液α-syn表达水平与PD相关性的研究文献。

1.2 文献纳入标准 ①1980～2014年国内外发表的一次文献；②案例对照研究；③各文献研究对象来源明确，病例诊断明确；④原始数据提供了样本量、均数与标准差或中位数与四分位数间距。

1.3 文献排除标准 ①动物实验、细胞实验和尸检样本；②脑脊液中存在血液污染(脑脊液中红细胞数量>500个/mm3或血红蛋白>200 g/ml)〔9〕；③剔除重复报告、报道信息太少(未给出α-syn均数与标准差或中位数与四分位数间距)及无法利用的文献。

1.4 统计学方法 应用RevMan5.3.3分析软件进行异质性检验，如果各研究结果之间差异无统计学意义则用固定效应模型，若有则采用随机效应模型；运用标准化均数差(SMD)计算合并效应值及95%CI，画出森林图，并进行敏感性分析和发表偏移分析。中位数与四分位数间距依据Hozo的方法转换为均数与标准差〔22〕。

2 结 果

2.1 纳入文献特征 共收集到符合纳入标准的关于PD患者脑脊液α-syn表达文献16篇〔6～21〕，累计病例共1 337例，累计对照1 045例；关于PD患者脑脊液α-syn寡聚体表达文献4篇〔6，7，17，20〕，累计病例共168例，累计对照共186例；关于PD患者脑脊液α-syn寡聚体/总α-syn表达文献3篇〔6，7，20〕，累计病例共145例，累计对照168例。见表1。

2.2 脑脊液中总α-syn与PD的相关性 森林图结果显示，总体效应检验(Z=5.66，P<0.001)，标准化均数差(SMD)为(-0.89，95%CI=-1.20～-0.58)，95%CI横线位于无效竖线左侧，提示PD患者脑脊液α-syn表达水平显著低于对照组。见图1。

2.3 脑脊液中α-syn寡聚体与的PD相关性 森林图结果显示，总体效应检验(Z=6.20，P<0.001)，标准化均数差(SMD)为(0.73，95%CI=0.50～0.96)，95%CI横线位于无效竖线右侧，提示PD患者脑脊液α-syn寡聚体表达水平显著高于对照组。见图2。

表1 纳入文献一般情况

作者发表时间(年)检测方法PD组n总α-syn(ng/mL)α-syn寡聚体α-syn寡聚体/总α-syn对照组n总α-synα-syn寡聚体α-syn寡聚体/总α-synParnetti等〔6〕2014ELISA4422.15(11.86～38.64)4838(3049～8141)0.061(0.034～0.175)2536.5(25.8～49.6)3139(1500～6140)0.021(0.014～0.043)Parnetti等〔7〕2014ELISA7122.00(13.50～38.60)4838.50(2746.00～11196.50)5.81(2.26～11.34)4539.67(27.72～64.60)3284.50(1664.50～11719.60)2.15(1.34～4.33)Hansson等〔20〕2014液相芯片3061.50(51.25～68.25)73309(36361～326297)1333(492～5973)9867.00(52.00～86.00)37882(21763～136685)549(372～2149)Park等〔17〕2011ELISA230.14±0.020.33±0.25-180.13±0.030.18±0.11-Aerts等〔18〕2012ELISA5826.0(20.5～32.5)--5725.0(18.0～42.0)--Hall等〔8〕2012液相芯片9055(40～70)--10767(51～85)--Hong等〔9〕2010液相芯片1170.50±0.38--1320.47±0.31--Shi等〔10〕2011液相芯片1260.38±0.10--1370.49±0.17--Ohrfelt等〔19〕2009ELISA15417(246～522)--55395(298～452)--Parnetti等〔11〕2011ELISA3843.1±47--3268.9±71--Mondello等〔12〕2014ELISA520.84(0.69～1.01)--221.31(0.94～1.5)--vanDijk等〔13〕2014荧光共振能量转移531.48±0.41501.70±0.47Mollenhauer等〔14〕2013ELISA781339±236481504±337Mollenhauer等〔21〕2011ELISA2731.34±0.81232.22±1.31511.19±0.81761.73±1.83Wang等〔15〕2012液相芯片83389±13751520±130109399±13771487±181Toledo等〔16〕2013ELISA630.95(0.66～1.35)391.30(0.95～1.64)

图1 PD患者脑脊液α-syn表达水平与对照组比较森林图

2.4 脑脊液中α-syn寡聚体/总α-syn与PD相关性分析 森林图结果显示，总体效应检验(Z=4.51，P<0.001)，标准化均数差(SMD)为(1.22，95%CI=0.69～1.75)，95%CI横线位于无效竖线右侧，提示PD患者脑脊液α-syn寡聚体/总α-syn表达水平显著高于对照组。见图3。

2.5 发表偏移 各Meta分析漏斗图呈对称分布，提示发表偏倚较小。见图4。

2.6 敏感性分析 在每次分析中逐一剔除其中一组数据后，再行Meta分析，结果显示，合并后95%CI无明显改变，说明敏感性低，各研究结果较为稳定可信。

图2 PD患者脑脊液α-syn寡聚体表达水平与对照组比较森林图

图3 PD患者脑脊液α-syn寡聚体/总α-syn表达水平与对照组比较森林图

图4 PD患者脑脊液α-syn、α-syn寡聚体、α-syn寡聚体/总α-syn表达水平与对照组比较漏斗图

3 讨 论

关于脑脊液中α-syn表达水平与PD相关性的各研究结果间存在较大差异，主要是由于以下原因：①各研究的PD患者存在明显的异质性，包括患者的年龄、性别、严重程度和诊断标准等。对照人群也存在不同，包括健康人群和其他非PD神经系统疾病患者；②脑脊液的采集、储存、检测方法和检测抗体不同；③部分研究排出了血液污染的样本，一部分未排除是否存在血液污染。本文Meta分析结果显示，PD患者脑脊液α-syn表达水平显著低于对照组。脑脊液中α-syn主要来自于中枢神经系统的神经元〔23〕，PD患者脑脊液α-syn表达降低可能与α-syn在神经元内异常聚集形成寡聚体，单体数量降低，从而导致单体向脑脊液中的释放减少。Wakabayashi等〔24〕研究证实PD患者脑神经元内α-syn异常聚集形成寡聚体，寡聚体是α-syn的主要毒性成分。本文提示脑脊液α-syn寡聚体或α-syn寡聚体/总α-syn可反映神经元内α-syn的变化，较α-syn单体更适于作为诊断标记。

与Zetterberg等〔25〕在先前发表的Meta分析相比，此次研究与其存在一些不同：①在筛选脑脊液α-syn表达水平与PD 关系文献过程中，我们排除了尸检标本的研究〔26〕，因为尸体标本中存在大量细胞自溶现象，将影响脑脊液α-syn表达水平；②剔除了未检测样本是否受到血液污染的研究，血液中α-syn呈高水平表达，尤其是红细胞，血液污染将显著影响检测结果〔27〕；③除了分析α-syn外，我们还分析了α-syn寡聚体与α-syn寡聚体/总α-syn的变化；④虽然各研究采用相同的计量单位，但各检测结果间相差较大，最高差距超过百倍。因此，本研究采用SMD替代加权均数差(WMD)计算合并效应值。

由于严格限定了文献纳入标准，使得部分研究难以用于分析，建议今后在病例对照研究的文章中尽可能提供基本的原始数据，尽可能的规范脑脊液采集、储存和检测流程，以增加纳入分析的文献数量，增加分析结果的可靠性。

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〔2015-05-11修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)

贵州省科技厅项目〔黔科合LG字(2012)021号; 黔科合LG字(2011)023号〕

周 波(1979-)，男，副教授，硕士，主要从事神经退行性疾病研究。

李宏伟(1970-)，男，讲师，硕士，主要从事神经退行性疾病的研究。

R742.5

A

1005-9202(2017)01-0164-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.01.073

1 贵州医科大学生物学教研室 2 贵州医科大学附属医院神经内科