CD36基因多态性与动脉硬化心脏病的相关性

丁法明 李 娜 宓宝斌 毕丽丽

(滨州医学院附属医院，山东 滨州 256600)

CD36基因多态性与动脉硬化心脏病的相关性

丁法明 李 娜 宓宝斌 毕丽丽

(滨州医学院附属医院，山东 滨州 256600)

目的 探讨动脉硬化心脏病与CD36单核苷酸多态性的关系。方法 121例动脉硬化心脏病患者及体检的健康者217例进行研究；空腹12 h后采集静脉血5 ml，检查甘油三酯、空腹血糖、血细胞、低密度脂蛋白、总胆固醇、高密度脂蛋白、血栓素B2等主要生化指标，记录其体质量、升高、体质量指数、血压等一般指标，并详细问询其疾病史；采用聚合酶链反应-连接酶检测反应法(PCR-LDR法)检测CD36的 SNPs基因型。结果 对照组冠心病、高血压、糖尿病患者比例及血压、体质量指数、甘油三酯、血糖、总胆固醇、血栓素、低密度脂蛋白显著低于病例组(P<0.05)，病例组患者血高密度脂蛋白水平显著低于对照组(P<0.05)；rs1761667位点存GG、AG、AA 3种基因型，两组基因频率差异具统计学意义(P<0.05)；分析分布频率发现，病例组AG基因型显著高于对照组(P<0.05)；AG基因型人群中病例组患者收缩压、舒张压、体质量指数、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白显著高于对照组(P<0.05)，高密度脂蛋白水平显著低于对照组(P<0.05)；AG基因型均可明显增加动脉硬化心脏病的患病风险(P<0.05)；甘油三酯、收缩压、糖尿病史、冠心病史、低密度脂蛋白与rs1761667AG基因型为影响动脉硬化心脏病的独立性危险因素(P<0.05)；CD36 SNPs具有群体代表性，符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。结论 动脉硬化心脏病与CD36 rs1761667的AG型存相关关系，是导致动脉硬化心脏病的遗传因素。

CD36；基因多态性；动脉硬化心脏病

动脉硬化心脏病是临床中常见的严重威胁老年人生命健康及生活质量的临床多发性疾病，血栓及动脉硬化斑块的形成在动脉硬化心脏病的发生及发展过程中扮演着重要角色，此外，血脂异常及血小板活化异常又是导致该病发生的危险性因素〔1,2〕。虽有学者指出动脉硬化可能与遗传因素有关，但现阶段尚未表明遗传因素与动脉硬化心脏病存在直接关系〔3〕。CD36是最早发现于血小板的糖蛋白属B族清道夫受体，后由大量实验证实其也存在于微血管内皮细胞、肝细胞、巨噬细胞等〔4〕。研究发现，高血脂患者体内氧化低密度脂蛋白与CD36特异性结合，促进血小板活化，提高凝血状态，加速内血栓形成〔5〕。有研究指出，通过CD36巨噬细胞可摄取大量氧化低密度脂蛋白并形成泡沫细胞〔6〕。因而推断CD36表达水平与CD36基因多态性关系密切，其可能与动脉硬化心脏病紧密相关。本研究分析探讨动脉硬化心脏病与CD36单核苷酸多态性的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 经我院伦理委员会批准，选取2014年1月至2015年5月我院收治的121例动脉硬化心脏病患者作为受试者，女31例，男90例，平均年龄(80.83±3.74)岁。所有患者均经彩超、MRI或CT诊断后确诊为动脉硬化心脏病。同期选取于我院体检的健康者217例作为对照组，女42例，男175例，平均年龄(80.29±3.72)岁。两组一般临床资料无统计学差异(P>0.05)，分组合理，具有可比性。入组患者及家属均知情同意并签署知情同意书。

1.2 入选标准 (1)患者均未并发动脉炎、血液病、外伤、肿瘤、血管畸形、动脉瘤；(2)患者肝肾功能正常，无发热、感染；(3)患者均排除自身免疫性疾病、恶性肿瘤、血液病；(4)未使用过免疫抑制剂；(5)参与本研究前30 d内未服用他汀类、氯吡格雷、华法林及阿司匹林类药物。

1.3 方法

1.3.1 生化指标及一般资料 空腹12 h后采集静脉血5 ml，使用日立全自动生化分析仪检查患者体内甘油三酯、空腹血糖、血细胞、低密度脂蛋白、总胆固醇、高密度脂蛋白等主要生化指标。此外对有所有入组人员的体质量、身高、体质量指数、血压等一般指标进行测量记录，详细问询病史，如高血压史、糖尿病史、冠心病史等。

1.3.2 测定血浆血栓素B2 使用ELISA法检测患者血浆中血栓素B2水平，采集血样品后离心15 min(1 000 r/min)收集血浆，使用酶联免疫试剂盒(Cayman公司，美国)检测血栓素B2水平，严格依照说明书进行操作。

1.3.3 CD36 SNPs检测 使用Haploview分析中国汉族人群CD36的SNPs位点即rs9784998及rs1761667，后采用聚合酶链反应-连接酶检测反应法(PCR-LDR法)检测CD36的 SNPs基因型。PCR扩增：使用Pubmed查询rs9784998及rs1761667的PCR引物序列，并委托上海翼和应用生物技术有限公司合成，以20 μl作为PCR反应体系，PCR扩增完成后使用琼脂糖凝胶电泳(3%)检测产物。连接酶检测：委托上海翼和应用生物技术有限公司合成LDR探针，以10 μl作为LDR反应体系，反应完成后取LDR产物进行测序，并使用Genemapper软件分析处理数据。

1.4 统计学分析 使用SPSS17.0软件计量资料使用t检验率的比较采用χ2检验分析Logistic回归分析相关性，使用拟合优度法检验基因型是否符合Hardy-Weinberg平衡定律。

2 结 果

2.1 一般资料及血栓素B2检测结果 对照组冠心病、高血压、糖尿病患者比例显著低于病例组(P<0.05)，且该组血压、体质量指数、甘油三酯、血糖、总胆固醇、血栓素、低密度脂蛋白均显著低于病例组(P<0.05)。病例组患者高密度脂蛋白水平显著低于对照组(P<0.05)。见表1。

指标对照组(n=217)病例组(n=121)P值男性(n)175900.18年龄(岁)80.29±3.7280.83±3.740.21体质量指数(kg/m2)24.07±3.0425.29±3.700.00冠心病史(n)116920.00高血压史(n)1301010.00糖尿病史(n)36380.00舒张压(mmHg)76.20±10.9779.46±11.630.01收缩压(mmHg)144.04±14.93152.10±19.980.00甘油三酯(mmol/L)1.00±0.421.27±0.690.00空腹血糖(mmol/L)5.67±0.976.04±1.510.02低密度脂蛋白(mmol/L)2.82±0.703.10±0.830.00总胆固醇(mmol/L)4.80±0.825.10±1.000.01高密度脂蛋白(mmol/L)1.49±0.371.39±0.380.02血栓素B2(pg/ml)340.36±4.22550.04±4.570.01血小板计数(×108/L)184.60±58.76187.60±46.260.64

2.2 CD36基因多态性结果 应用Genemapper对两位点基因分型进行分析，见图1、图2。

图1 rs9784998位点分析图

图2 rs1761667位点分析图

2.3 CD36多态性分布频率 rs1761667位点存在GG、AG、AA 3种基因型，两组基因频率差异显著(P<0.05)；深入分析分布频率发现，病例组AG基因型显著高于对照组(P<0.05)。rs9784998存在TT、CT、CC 3种基因型，但两组间3种基因型的分布频率无统计学差异(P>0.05)，见表2。病例组患者收缩压、舒张压、体质量指数、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白显著高于对照组(P<0.05)，高密度脂蛋白水平显著低于对照组(P<0.05)，见表3。

表2 CD36 SNPs基因型及分布频率比较〔n(%)〕

SNPs病例组(n=121)对照组(n=217)χ2值P值Rs9786998C180(75.63)310(71.43)1.370.24T58(24.37)124(28.57)TT5(4.20)22(10.14)3.700.16CC66(55.46)115(53.00)CT48(40.34)80(36.86)Rs1761667A93(39.08)159(36.81)0.030.86G145(60.92)273(63.19)GG39(32.77)92(42.60)AA13(10.93)35(16.20)7.140.03AG67(56.30)89(41.02)

指标对照组(n=89)病例组(n=67)P值体质量指数(kg/m2)23.40±2.8425.56±3.560.00甘油三酯(mmol/L)0.97±0.411.29±0.670.00收缩压(mmHg)143.15±13.97151.83±20.450.01舒张压(mmHg)75.67±1.1879.75±11.750.03低密度脂蛋白(mmol/L)2.80±0.723.09±0.900.03高密度脂蛋白(mmol/L)1.49±0.341.37±0.370.04总胆固醇(mmol/L)4.76±0.825.05±1.030.05血栓素B2(pg/ml)336.97±4.26473.43±4.570.17血小板计数(×108/L)182.45±44.85180.06±42.200.74

2.4 rs1761667 SNPs对动脉硬化心脏病影响 调整性别、冠心病、年龄、体质量指数、糖尿病、甘油三酯、收缩压、低密度脂蛋白前后rs1761667，AG基因型可明显增加动脉硬化心脏病的患病风险(P<0.05)，见表4。

表4 rs1761667 SNPs对动脉硬化心脏病的影响

基因型对照组(n=89)病例组(n=67)调整前OR(95%CI)P值调整后OR(95%CI)P值AA35130.88(0.42～1.83)0.730.67(0.27～1.62)0.37AG89671.77(1.09～2.90)0.021.93(1.08～3.45)0.03GG92391.00-1.00-

2.5 动脉硬化心脏病危险因素筛选 使用Logistic回归分析发现，甘油三酯、收缩压、糖尿病史、冠心病史、低密度脂蛋白与rs1761667AG基因型进入回归方程，为影响动脉硬化心脏病的独立性危险因素(P<0.05)，见表5。

表5 多元Logistic回归分析结果(rs1761667 AG型VS GG型)

危险因素Wsdfr值OR(95%CI)P值冠心病9.520.3010.932.53(1.40～4.55)0.00收缩压10.220.0110.031.03(1.01～1.04)0.00低密度脂蛋白6.150.1910.461.58(1.10～2.27)0.01甘油三酯4.930.2610.581.78(1.07～2.95)0.03AG4.710.2910.631.88(1.06～3.34)0.03糖尿病4.930.3110.681.97(1.08～3.59)0.03

2.6 Handy-Weinberg平衡定律检测结果 CD36 SNPs(rs9784998和rs1761667)具有群体代表性符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。

3 讨 论

人源CD36基因外显子数不低于15个，位于7号染色体q11.2区。CD36 cDNA序列结果显示，其由471个氨基酸组成，分子量为88 kD〔7〕。研究发现，CD36共存2 900个以上基因多肽位点，且其大部分为SNPs；全基因组研究发现，CD36 存15个SNPs，可能增加动脉硬化心脏病的患病风险〔8〕。有学者指出， CD36为巨噬细胞及血小板上受体，可特异性结合氧化低密度脂蛋白，而SNPs可改变CD36在靶细胞上的表达，提示氧化低密度脂蛋白可能在动脉硬化性心脏病的发病及发展过程中扮演重要角色〔9〕。此外，诸多动脉硬化疾病可能与CD36 SNPs密切相关。

本组研究结果显示，CD36 rs1761667的AG型可显著增加动脉硬化心脏病的发病风险，分析认为与其可影响靶细胞表面CD36表达水平有关。有研究发现，CD36在不同人种中表达水平存一定差异，且其可能与rs1761667基因型密切相关，如AA型人体内CD36表达量最低，而GG与AG型表达量明显高于AA型〔10〕。AG型基因频率在病例组中明显高于对照组。分析认为其可能导致CD36表达量增高，导致单核细胞大量吞噬氧化低密度脂蛋白，最终导致单核细胞形成泡沫细胞，进一步导致动脉硬化病灶区的形成。有学者指出，受rs1761667影响，CD36在血小板表面表达水平可明显增加，增强血小板活化及聚集水平，加速血栓形成〔11〕。本次研究中在评价学习血小板活化水平时使用血浆血栓素B2作为评价指标，结果显示病例组患者血栓素B2水平明显偏高。病例组AG型个体内血栓素B2水平虽有升高趋势，但与对照组相比并无显著性差异，分析认为其可能与临床样本数较少或与CD36以外影响血小板活化水平因素有关。此外，有学者指出，rs1761667可通过调节体内代谢增高动脉硬化心脏病患病风险〔12〕。作为一类典型的长链脂肪酸受体，CD36参与游离脂肪酸向胞内转移。有学者研究证实，rs1761667可使清中游离脂肪酸水平明显增高，而在动脉硬化的发生及发展过程中游离脂肪酸又起着极其重要作用〔13〕。有研究发现，人体血清中高密度脂蛋白与CD36表达负性相关，低密度脂蛋白与CD36表达正性相关〔14〕。本研究结果显示，AG型组中病例组低密度脂蛋白水平明显偏高，低密度脂蛋白水平显著偏低，与其研究结果相似。此外，近年来有研究指出代谢综合征、2型糖尿病与rs1761667水平密切相关，可增加患者动脉硬化心脏病患病率〔15〕。

综上所述，动脉硬化心脏病与CD36 rs1761667的AG型存相关关系，是导致动脉硬化心脏病发病的遗传因素。但本次研究临床样本数较少，其是否具有广泛临床意义还有待进一步研究。

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〔2016-08-09修回〕

(编辑 曲 莉)

山东省自然科学基金(ZR2014HP024)

宓宝斌(1979-)，男，主治医师，主要从事老年常见病的诊疗工作。

丁法明(1984-)，男，硕士，主要从事冠心病及心律失常的介入治疗研究。

R541.4

A

1005-9202(2017)01-0079-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.01.034