张耀武,陈万光,乔明超,阿古叶赫,张亚男,苏家宜
(1.洛阳师范学院,河南洛阳 471000;2.河南省冷水鱼养殖工程技术研究中心,河南洛阳471000;3.洛阳昌盛水产有限公司,河南洛宁471700;4.河南科技大学动物科技学院,河南洛阳471000)
西伯利亚鲟鱼的人工繁殖试验总结
张耀武1,2,陈万光1,2,乔明超3,阿古叶赫1,张亚男4,苏家宜4
(1.洛阳师范学院,河南洛阳 471000;2.河南省冷水鱼养殖工程技术研究中心,河南洛阳471000;3.洛阳昌盛水产有限公司,河南洛宁471700;4.河南科技大学动物科技学院,河南洛阳471000)
选取故县水库性成熟的西伯利亚鲟鱼作为亲鱼,采用人工技术对4尾雄性及6尾雌性西伯利亚鲟进行人工繁殖。催产前将亲鱼雌雄分开暂养,并且将水温逐步提升到15~16℃。经过人工催产,4尾雄鱼通过人工挤压腹部顺利排精,6尾雌鱼通过微创手术获得成熟卵子,再通过人工授精、脱粘、孵化,共获得受精卵61.5万粒,鲟鱼稚鱼58.2万尾,受精率89.98%,孵化率94.5%。
西伯利亚鲟;人工繁殖;总结
西伯利亚鲟(Acipenser baeri)为鲟科、鲟属鱼类。鲟鱼类由于其特有的经济价值、营养价值和生物学特性而备受人们的关注。古罗马、古俄罗斯和中国皇室均视其为珍品[1]。西伯利亚鲟鱼目前是豫西山区冷水鱼养殖的主要品种,其产量占鲟鱼、虹鳟、三文鱼等冷水性鱼类产量的85%。长期以来,鲟鱼苗种全部依靠从省外购进,随着鲟鱼养殖业的发展,其苗种供应的矛盾越来越突出,严重地制约了河南鲟鱼产业的发展。为解决鲟鱼苗种的瓶颈问题,笔者于2015年4月2日开始对西伯利亚鲟鱼的人工繁殖进行了试验研究。现把试验情况总结如下。
1.1 试验材料
1.1.1 亲鱼:雌、雄亲鱼均为8龄性成熟的西伯利亚鲟鱼,由洛阳昌盛水产有限公司培育。2015年4月2日,实验选取8龄的体表光滑无伤、体质健壮的亲鱼雌鱼6尾,雄鱼4尾。
1.1.2 催产药物:宁波三生药业有限公司生产的促黄体素释放激素类似物(LRH-A2)。
1.1.3 产卵池:6个直径3 m,深1.2 m的圆形亚克力池子,水位控制在0.6 m。
1.1.4 孵化器:自己研发的鲟鱼筛式孵化器,主体包括:支架、水槽、盛卵槽(每台16个)、翻斗(16个)、分水器、供水管、排水槽和接苗器等。水槽左右各1只,每只中间是不分割的盛卵槽,8只盛卵槽放在一个水槽中。盛卵槽除不锈钢板的4个筐和不锈钢网底外,还有一个很精密的气箱和接水槽。在正常状态下,接水槽是放空的,气箱使盛卵槽浮在水槽内,接水槽加满水后,在重力和水重量的共同作用下,盛卵槽被压入水中。接水槽下面有一个孔,在几秒钟内将水排净,盛卵槽再度浮出水面,完成下一次往返动作。
1.2 亲鱼培养
水温达到14℃时,把发育成熟的亲鱼雌鱼6尾、雄鱼4尾移入产卵池中,通过深层水和浅层水的相互注入调控产卵池的水温,逐渐提升池内温度,使水温保持在15~16℃。
1.3 人工催产
1.3.1 催产部位
背骨板左右两侧两骨板之间的肌肉部位或者胸鳍基部。
1.3.2 催产时间及药量
雄鱼为一次注射,时间为早上9∶00,剂量为4 mg/kg;雌鱼分2次注射,第一针晚上9:00,剂量为1 mg/kg,第二针间隔12 h,剂量为7 mg/kg。亲鱼注射催产激素后按雌雄性别分池放回暂养观察。雌鱼在第2次注射后,每隔3~4 h检查有无排卵情况。
1.4 人工采精和挤卵
1.4.1 人工采精
雄鱼在注射10~12 h后,将雄鱼放置在小木台上,用手轻敲鱼的腹部,即可采出精液,取1滴精液放在载玻片上于显微镜下观察其活性(精子快速运动时间不低于30 s)。合格后,挤压雄鱼腹部,挤出精液贮存于3~4℃冰箱内备用[2-4]。
1.4.2 人工采卵
检查发现暂养池底有游离卵粒出现时,把排卵亲鱼用担架抬至手术床,用干毛巾擦干鲟鱼生殖孔,挤压腹部,将卵直接从生殖孔挤出。当挤卵、排卵不畅时,在鲟鱼生殖孔前端4~6 cm处,用手术刀纵向切开2~3 cm,形成出卵口,用手从上至下轻度挤压腹部使成熟卵不经输卵管而直接排出体外[5],待卵基本排净后将亲鱼尾部抬高,从出卵口用500~1000 mL生理盐水灌洗腹腔,排出腹腔中的游离卵并清洗腹腔。产出的卵用烧杯或量筒测量产卵量[5]。手术的时候还要不断向鱼鳃内淋水,保证鱼在手术时的呼吸,避免造成亲鱼死亡。采卵结束后用缝合针、线将伤口缝合,用药物对缝合伤口及周围进行局部涂抹消毒、消炎处理后放回养殖池,并连续3 d对雌亲鱼注射消炎药物。
1.5 人工授精
采用半干法受精,将收集好的亲鱼的卵和低温收藏的精液混入无水容器中,每1000 mL鱼卵用10mL精原液,精液的稀释比例为精液:水=1:150[6]。待受精卵充分接触后加清水漂洗。
1.6 人工脱粘
加入20%的滑石粉溶液手工搅拌,时间为1 h,期间每隔20 min换一次滑石粉溶液。等到鱼卵脱粘后移入孵化箱中进行孵化。
1.7 人工孵化
把受精卵放入筛式孵化器中,保持水温在16℃-19℃,约110 h出膜。孵化的过程中,要不断注意水的流速,保证水中溶氧充足,还要注意鱼卵密度及清除死卵等杂物。
2.1 雄鱼催产
雄鲟鱼4尾经过注射催产激素后,效应时间12~14 h采出活力正常的精子,共采集到550 mL精液。
2.2 雌鱼催产及手术取卵
雌鲟鱼6尾经过2次催产注射后,全部在30~42 h出现排卵反应。采用微创手术,共采集鱼卵13.3 L(共有62.1万粒)。经手术缝合后的所有亲鱼,产后恢复良好,检查手术创口无发炎和溃烂现象。
2.3 授精与孵化
经半干法授精,共获得受精卵55.9万粒,受精率89.98%。经过96~120 h的孵化,共获得52.8万尾鲟鱼稚鱼,孵化率达94.5%。
3.1 性成熟年龄和时间
自然状态下西伯利亚鲟的性成熟年龄,在鄂毕河为10~12龄,在叶尼塞河为17~23龄,其产卵时间为5~6月,水温在9~18℃之间[7]。故县水库培育达到8龄的西伯利亚鲟亲鱼,同样能够性成熟,催产前将亲鱼的水温逐步提升到15~16℃,刺激雌鱼排卵,通过人工繁殖技术可以顺利进行西伯利亚鲟鱼人工繁殖。鲟鱼的繁殖技术关键在于营造好鲟鱼亲鱼生长最佳的生态环境,包括水质、水温、光照和营养[8]。
3.2 催产药物选择
西伯利亚鲟在人工养殖过程中不能主动排卵主要是因为环境与原生环境不同,所以在人工繁殖过程中需要注射催产针,实验证明这次选用的宁波三生药业有限公司生产的促黄体素释放激素类似物(LRH-A2)是有效果的,催产效果良好。
3.3 精子保存
采集到精子后要低温保存,鱼类精子糖酵解能力很弱,主要靠氧化代谢获取能量。精子产出体外后基本不能利用环境中的碳水化合物,只能依靠自身储存能量进行生命活动[9]。在高温环境中,精子很难存活,因此采用低温保存,能够提高精子存活时间。
3.4 手术后的防范措施
在手术完成之后,及时将伤口缝合牢固,并要进行伤口的消毒等防范措施。伤口在水中暴露,容易引发疾病感染[10]。要及时检查亲鱼手术后的状况,对开线的伤口进行二次缝合,出现感染的部位及时用药,避免亲鱼手术后死亡,该亲鱼经培育2-3年后仍可用于繁殖。
[1]石振广,董双林,王云山,等,我国鲟鱼养殖业现状及问题分析[J].中国渔业经济,2008,26(2):58-62.
[2]邓岳松,林浩然.鱼类精子活力研究进展[J].生命科学研究,1999,3(4):27l-278.
[3]孙大江,曲秋芝,马国军,等.养殖史氏鲟的人工繁殖[J].中国水产科学,2003,10(6):485-490.
[4]何珍,许平,周效广.鲟鱼人工繁殖获取精液新方法试验[J].黑龙江水产,2002(4):29-30.
[5]杨兴,刘霆,周洲,等.贵州山区西伯利亚鲟人工繁殖研究[J].贵州农业科学,2012,40(10):139-140.
[6]李禾,李军,王泽仁.池养西伯利亚鲟的人工繁殖试验[J].水产科技情报,2015,04:202-204,208.
[7]谢忠明,孙大江,王树京,等.鲟鱼养殖技术[M].北京:中国农业出版社.2000.258-263.
[8]任华,兰大华.鲟鱼人工繁殖关键技术探讨[J].河北渔业,2011,(08):41-42.
[9]陈松林,刘宪亭.鱼类精液超低温冷冻保存的基本原理、研究现状及应用前景[J].淡水渔业,1991,(05): 43-46.
[10]潘鹏,刘晓勇,齐茜,等.西伯利亚鲟产后护理技术[J].中国水产,2016,03:88-90.
A summary of artificial propagation experiment on Siberian sturgeon (Acipenser baeri)
Zhang Yaowu1,2,Chen Wanguang1,2,Qiao Mingchao3,Agu Yehe1,Zhang Yanan4,Su Jiayi4
(1 Luoyang Normal University,Luoyang 471000;2 Research Center of Aquaculture Engineering Technology of Cold Water Fish in Henan Province, Luoyang 471000;3 Changsheng Limited Company of Aquculture in Luoyang City,Luoning 471700;4 College of Animal Science&Technology,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471000,Henan,China)
The mature Siberian sturgeons were selected from the reservoir of Guxian County.Four male and six female Siberian sturgeons were used for artificial propagation.The parent fishes were separately cultured before induced spawning and the temperature of culturing water was gradually raised to 15-16℃.After induced spawning, four males were squeezed abdomen to obtain the sperm,and six females were carried out minimally invasive surgery to obtain the eggs.Then,by artificial insemination,unsticking and hatching,615,000 embryos and 58.2 million juveniles were obtained,and the fertilization and hatching rate were 89.98%and 94.5%respectively.
Siberian sturgeon(Acipenser baeri);artificial propagation;summary
2017-02-20
河南省产学研合作计划(162107000035)。
张耀武(1967-),男,汉族,河南邓州人,副教授,主要从事水产养殖学相关教学科研及技术推广等工作。