化学

汪晨，吴洁，宗晨，等

化学

化学发光免疫分析方法与应用进展

汪晨，吴洁，宗晨，等

化学发光免疫分析是将化学发光检测系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入化学发光体系中的其它相关反应产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或定性检测。化学发光免疫分析方法具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、设备简单、线性范围较宽等优点，在环境、临床、食品、药物检测等领域得到了广泛应用，日益受到人们的青睐。在实际应用中，常常需要对大量复杂样品或低丰度分析物样品进行测定。而经典商品化的免疫分析方法所需时间长、样品消耗多、成本高，不能满足这些要求。因而建立快速、高通量、高灵敏和低成本的免疫检测方法已成为化学发光免疫分析方法的研究热点和发展趋势。本文总结了近几年化学发光免疫分析方法学研究与应用进展。包括：（1）减少温育时间。通过外场驱动或对溶液进行有效混合策略加快抗原、抗体等生物大分子的传质速率，或提高反应体系的温度来加速免疫反应的动力学，从而实现快速免疫检测；（2）多组分检测。多组分免疫分析模式主要有多组分同时检测模式和顺序检测模式两种。同时检测模式常结合空间分辨技术与阵列检测器实现对多个待测物进行同时检测；顺序检测则是在一段时间内对多个组分逐个进行检测；（3）信号放大技术。纳米技术的发展为高灵敏化学发光免疫分析方法的发展提供了契机，使得纳米粒子在生物标记分析得到了广泛应用。已有多种基于金纳米粒子信号放大方法用于高灵敏免疫分析。利用DNA标记抗体，通过免疫反应后的分子生物学信号放大，也是实现高灵敏化学发光免疫分析的有效途径。这些例子证明化学发光免疫分析法具有广泛的应用前景和可操作性，论文进一步指出了未来的发展方向及研究重点，包括：（1）化学发光成像技术、化学发光免疫分析与分离技术的联用，可以使免疫分析的选择性、灵敏度和检测速度、检测通量得到进一步提高；（2）为了更好地适应临床、环境等领域的实际应用，需要大力发展微型化、集成化和自动化的化学发光免疫分析仪器；（3）随着分子生物学及纳米与传感技术的进步，新的化学发光免疫分析原理与高灵敏的免疫分析方法将得到不断发展，发展新型标记技术用于信号放大，建立化学发光免疫分析新方法。

来源出版物：分析化学, 2012, 40(1)： 3-10

入选年份：2015

超高效液相色谱-串联质谱法测定柑橘及柑橘精油中4种农药残留

孔志强，董丰收，刘新刚，等

摘要：我国柑橘种植面积和产量均位列世界第一。柑橘除用于鲜食外，也可加工成柑橘精油等副产品。柑橘精油被广泛用于食品工业和日化工业，具有美容保健、镇静止痛等作用。为了保证柑橘的产量，吡虫啉、多菌灵、咪鲜胺和高效氯氰菊酯等作为柑橘上常用的杀虫杀菌剂应用十分广泛，难免导致柑橘及其制品中存在农药残留，给人体健康带来潜在威胁。精油作为柑橘果皮中的一种化学成分，主要通过水蒸汽蒸馏法、压榨法、和溶剂浸提法提取获得，由于加工过程中水分丢失，很可能增加农药残留的浓度。目前已报道的柑橘中农药的残留检测方法主要采用高效液相色谱、气相色谱、液相色谱-质谱联用及酶联免疫法等。采用气相或液相色谱法易受杂质干扰，且灵敏度低；酶联免疫方法操作过程繁琐，且条件要求苛刻；而液相色谱-质谱联用方法溶剂消耗量大、耗时长。本研究针对样品前处理过程和超高效液相色谱-电喷雾串联质谱方法（UPLC-MS/MS）分离条件进行了优化。QuEChERS（Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged和Safe）方法因其快速、简易、价廉等特点，在农残分析领域被广泛应用。该方法中样品量和提取剂的体积比多采用1︰1，但在本实验中发现回收率较低，用体积相当于2倍样品量的提取剂提取，回收率和相对标准偏差均能得到满意的结果。由于柑橘精油中含水量较少，在提取过程中加入了10 mL水，保证了柑橘精油较好的回收率。进一步考察了C18、Shield RP18、HILIC、Phenyl等4种不同固定相的色谱柱对4种目标农药的分离效果。结果表明，采用C18色谱柱可获得最理想的分离效果。分别从选择性，灵敏度和分离效果的角度考察了不同流动相对4种农药的色谱行为和离子化程度的影响。结果表明，当流动相为甲醇-水体系时，仪器响应值高于乙腈-水为流动相时的响应值。此外，在比较了甲醇-水体系中分别加入2%乙酸和2 mmol/L乙酸铵后，发现以甲醇-2 mmol/L乙酸铵水溶液作为流动相时，可获得最优的色谱分离效果和质谱信号响应。最终建立了柑橘及柑橘精油中吡虫啉、多菌灵、咪鲜胺和高效氯氰菊酯4种农药的多残留分析方法。采用乙腈作提取剂、N-丙基乙二胺（PSA）为分散净化剂的QuEChERS方法，利用UPLC-MS/MS在多反应离子监测模式下进行检测，外标法定量。在0.01～1 mg/kg添加水平范围内，平均回收率为73.5%～113.3%，相对标准偏差为0.9%～19.6%。方法：检出限（LOD）在0.02～0.6 μg/kg范围内，定量限（LOQ）在0.06～2 μg/kg范围内。建立了快速、简便、准确、灵敏和高效的分析方法。

来源出版物：分析化学, 2012, 40(3)： 474-477

入选年份：2015

基于轻质萃取剂的溶剂去乳化分散液-液微萃取-气相色谱法测定水样中多环芳烃

祝本琼，陈浩，李胜清

摘要：目的：分散液-液微萃取技术（DLLME）具有操作简单、快速、高效等优点，已成为一种极具潜力的分离富集技术。传统DLLME以密度大于水的有机溶剂为萃取剂，需通过离心将有机相与水相分离，离心成为实验过程中最耗时的环节，且受限于离心设备。本文提出以密度小于水的轻质溶剂为萃取剂，建立了无需离心步骤的溶剂去乳化分散液-液微萃取-气相色谱（SD-DLLME-GC）测定水样中多环芳烃的新方法。方法：基于轻质溶剂的溶剂去乳化分散液-液微萃取（SDDLLME）技术，将轻质萃取剂和分散剂的混合液快速注入水相，形成雾化体系，加入一定量去乳化剂，破坏雾化体系，实现有机相与水相的分离。比较了分散剂、去乳化剂的种类及体积；溶剂辅助分散和超声波辅助分散两种制备雾化体系方式的影响，将基于轻质溶剂的SD-DLLME-气相色谱（GC）用于环境水样中多环芳烃的测定。结果：（1）比较了超声波辅助与溶剂辅助分散两种模式的萃取效果，结果表明溶剂辅助分散对分析物有更高的萃取率，超声波可能增加了有机物的挥发性损失，且在水相中注入甲苯时雾化效果不好。（2）萃取剂选择40 μL的甲苯时，萃取效果最好。甲苯与多环芳烃有相似的结构有利于萃取。（3）分散剂选择500 μL的丙酮时，萃取效率最高。（4）去乳化剂选择800 μL的乙腈时，萃取率最高。20℃时，乙腈的表面张力大于丙酮、甲醇，破坏乳化体系的能力较强。（5）萃取时间在0～5 min范围内对萃取率没有明显影响。由于溶剂辅助分散的效果较好，萃取剂与水相的接触面积非常大，分析物从水相到萃取相的萃取平衡在数秒内即已完成。（6）盐的加入水平在0～250 g/L范围内对萃取率没有明显影响。可能是由于多环芳烃分析物在甲苯中的溶解度较大，其萃取过程受水相中离子强度的影响较小。（7）以40 μL甲苯为萃取剂，500 μL丙酮为分散剂，800 μL乙腈为去乳化剂，方法在20～500 μg/L范围内呈现出良好的线性（r2＝0.9942～0.9999），多环芳烃的检出限（S/N＝3）为0.52～5.11 μg/L。用所建立的方法平行测定5份质量浓度为40 μg/L的多环芳烃标准水样，其含量的相对标准偏差为2.2%～13.6%。本法已成功用于实际水样中多环芳烃的分析，并测得其加标回收率为80.2%～115.1%。结论：建立了基于轻质溶剂的溶剂去乳化分散液-液微萃取-气相色谱测定水样中多环芳烃的新方法。与传统DLLME相比，SD-DLLME可采用轻质有机溶剂为萃取剂，有效拓宽了可用于DLLME技术的萃取剂范围，有利于扩大其应用；并且，通过溶剂去乳化作用实现分相，避免离心步骤，使其操作更为简单、快速。利用这一特点，有可能采取SD-DLLME对野外环境水样进行原地样品前处理，提高分析效率。

来源出版物：色谱, 2012, 30(2)： 201-206

入选年份：2015