科华核酸血液筛查系统的质量控制

赵宇，王艳

吉林市红十字中心血站，吉林吉林132001

科华核酸血液筛查系统的质量控制

赵宇，王艳

吉林市红十字中心血站，吉林吉林132001

目的保障临床用血安全，提升血液检测水平。方法对科华核酸血液筛查系统的质量控制关键点进行总结、分析。结果极大降低人为误差，节约检测成本，保证血液质量。结论推行对科华核酸血液筛查系统进行质量控制，可使血液检测的管理先进化、经济化。

血液筛查；核酸检测；质量控制

核酸检测(nucleic acid test，简称NAT)是提升血液安全的重要手段[1]，由于献血员可能携带HBV/HCV/HIV等血源性传染病病毒,为加强血站的安全保障能力,控制血源性疾病通过输血传播,目前国内开展核酸检测对血液进行筛查[2]。吉林市红十字中心血站自2012年便开展核酸血液筛查工作，选用国内规模最大的体外诊断试剂厂家-科华血筛系统，采取8样本混合检测方案，总结日常工作中对核酸检测工作产生质量影响的关键点，进一步规范检测人员对核酸扩增检测系统的操作，降低人为操作因素导致的实验误差，积极推进全国血站核酸检测工作,以提升血站实验室检测水平。

1 检测技术人员要求

1.1 资质要求

应满足《血站质量管理规范》和《血站实验室质量管理规范》关于人员的要求，同时经过核酸检测相关的专业培训。（国家卫生计生委及厂家培训）并取得培训合格证书。

1.2 培训要求

符合资质的核酸检测实验室技术人员应经过核酸检测技术培训并获得合格证书。接受实验室生物安全、知识培训考核合格以及厂家的上岗前仪器设备操作、维护等的培训，并经过科主任批准后，方可进入核酸实验室工作。每年至少进行培训1次。

1.2.1 理论培训依据《实时荧光PCR技术》《全国血站核酸扩增检测实验室技术人员培训》《血站核酸检测质量保证指南》《临床基因扩增检验实验室工作规范》《生物安全实验室建筑技术规范》《实验室生物安全通用要求（GB19489-2008）》《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》《血站质量管理培训教程》。

1.2.2 技术培训指导由富有经验的具备资质的人员以及厂家技术工程师指导新进人员的操作培训。

1.2.3 培训期不少于1个月，并经过评估表明合格，由站长授权，给予计算机相应的模块操作权限。

2 设备维护

①擦拭仪器时用水或者75%酒精打湿无纺布，但不要过湿，避免液体滴落至仪器。②STAR上样台面两块金属板操作中避免人为加压。开关前盖面板时，双手对称均匀用力，轻开轻关。当仪器开始运行后，无提示不得打开安全面板，也不可移动台面内的任何载架。③向ABI7500扩增仪放置PCR扩增板时，需双手推进PCR板基座，轻开轻关。④半年维护后，厂家工程师及实验室工作人员填写相关表单并签字，实验室工作人员存档校准证书，并更换仪器校准标签。

3 试剂制备

①裂解液在使用前应在55℃水浴箱中孵育至晶体完全融化，实验30 min前取出阴性对照（NC）、阳性对照（PC）和室内质控品（QC），平衡至室温。扩增试剂则在实验开始时由-20℃转移至4℃冰箱内融化。在配制小剂量试剂时，均应在漩涡混合仪混匀10 s后，在掌心离心机低速离心5 s。②配制磁珠和去抑制剂时，应注意观察试剂槽内试剂的剩余量，保证一定的基底量；当实验标本数量较少时，注意要多添加裂解液的量。③室内质控品、内标及裂解液不足下次实验时，需提前融化备好；移液器枪头、加样尖、深孔板、反应板等耗材也需提前准备好。④每周将试剂槽中的试剂彻底更换1次，试剂槽用超纯水清洗并晾干。⑤裂解液一定要缓慢颠倒混匀20次以上，倒入试剂槽后需除去泡沫，准确放置试剂槽的位置。⑥配制阴性对照、阳性对照及质控品时，应勤换手套，避免交叉污染，管壁应无残留或气泡，配制质控品时，应该选用澄清、足量的阴性血清。⑦在STAR放置磁珠试剂槽载架前，观察磁珠状态是否正常，手工摇匀磁珠。⑧配置反应液时，双人核对添加的试剂名称，混匀并离心反应液管。去除气泡，以免影响加样。⑨试剂及质控品使用后，及时记录出库，使用前应对试剂、耗材等规格与批号进行核对。⑩扩增试剂的试剂盒上应注明开启的日期、消耗的人份数，实验前观察试剂量，以准备待融化的扩增试剂的剂量。⑪扩增试剂的试剂盒内阳性对照品，应放置在标本制备区的冰箱内。

4 标本制备

①处理标本时，应带乳胶防滑型手套，去除试管帽，摆入载架时应注意轻拿轻放，以防载架翻倒，并注意防止迸溅及交叉污染。②在将汇集标本管插入试管载架时，仔细核实标本是否存在凝块、未离心、溶血、乳糜、试管是否破损，标本量是否足量等现象，如有以上情况发生，进行相关处理措施后再进行实验。③汇集和提取后的标本用一次性保鲜膜覆盖好，放入2～8℃冰箱中保存，24 h后进行相关医疗废物处理。

5 提取方法

①首先打开系统服务器电脑。②在进行提取前，确认单检载架，提取载架，磁力条放置在相应轨道上，与卡槽接轨。③在汇集前需观察加样尖是否足量，摆放位置是否准确。汇集后再观察是否足量并及时补充。加样尖载版无损坏、并卡牢、无断裂，300 μL和1 000 μL的加样尖数量及位置不要输错。④汇集前深孔板、污液槽和金属挡板已安装好、位置正确（污液槽未错位、未平放、忘放、深孔板未放反）。⑤实验每次开始前，核对标本数量、汇集管数量，单检的数量，实际数量与电脑中输入数量要符合。⑥在进行提取实验前，先观察是否汇集管加样足量，未有漏加并推动汇集的载架与卡槽接轨。⑦在加入单检标本、阴性对照、阳性对照，质控品后，观察是否加样足量，待加入裂解液后再次观察是否加样足量。⑧不同检测项目的反应液要按顺序摆放，PCR反应板放入时与底座对齐、位置正确，并观察深孔板中是否有磁珠。⑨封板前观察PCR反应板是否有残留的磁珠或加样量不足。⑩把PCR反应板放入扩增仪前确认放置的方向正确。⑪ABI750扩增仪在使用前需开机预热，使用后要及时关机。⑫接收编号为当年的4位数字，同一批实验中，所有文件的接收编号须一致，加做实验时，末尾顺应加“01”“02”。⑬实验过程中时刻保持防污染意识，勤换手套，至少15 min观察1次仪器运行状态，保持确保仪器没有因报错而停止运行。⑭当实验完成后，选中所有扩增曲线及标本孔，再发出报告。

6 防污染

（1）预防为主，严格分区，特定操作，专区专用。（2）每天观察3个区域的温度、湿度、压力等是否在正常范围内。（3）严格执行实验室分区，不同实验区域的可移动物品应有清晰的区域标识，以防混用。（4）每月实施暴露表面有无核酸扩增产物污染的监测。（5）实验室人员和物品的工作流向应为：试剂制备区、样本制备区、产物分析区，为单向工作流向，不得逆向流动。（6）实验过程中，如处理标本、对照品，及手套被污染时，应及时更换手套，避免和减少在已开帽的标本、试剂和耗材上空区域说话和活动。（7）废液和医疗垃圾应及时清离实验室，保持台面、地面的清洁，紫外灯照射1 h以上，实验室要及时通风，必要时进行酒精喷雾沉降。（8）处理阳性标本、阳性对照品和质控品时要小心处理，防止崩溅，及时核对好标签，勤换手套，并注意避免加样枪和掌上离心机的污染。（9）非该实验室工作人员因工作需要，经允许方可进入实验室，有该实验室人员全程陪同并做好个人防护。（10）封板前应换新的手套，避免对PCR反应板说话，整个过程尽量不要接触封板膜PCR反应板表面，保证每个孔都封闭好，避免污染。（11）定期进行环境监控，以判断实验时是否存在污染，清洁消毒效果是否良好，预防污染的发生及假阳性结果的产生。（12）核酸实验室污染时的纠正措施。①试剂污染：更换新的试剂重新检测评估。②标本污染：重新采样进行检测，评估标本前的处理环节。③设备污染：设备整体消毒清洁或维护。④产物污染：全面清洁消毒实验室，仪器设备所有与实验有关物品。

7 讨论

2016年我国施行全国性覆盖核酸检测的血液筛查模式[3]。但由于核酸检测技术对设备、实验室条环境条件、操作人员技术和实验室管理等要求较高，而我国各血站的能力水平差异较大，若在检测过程中对质量控制不当，容易出现假阳性和假阴性等情况，甚至发生实验室污染等问题。而通过该文探索，基本建立了与国内先进水平相接轨的血站核酸检测实验室质量控制体系，建设了一个规范化的核酸检测实验室供血站同仁参考和发展。

[1]李金明.实时荧光PCR技术[M].北京:人民军医出版社, 2012:135-162.

[2]李金明.我国血站核酸检测及质量管理的现状与展望[J].中国输血杂志,2012,25(10):933-934.

[3]国家卫生和计划生育委员会.全面推进血站核酸检测工作实施方案(2013—2015年)[S].2013.

Quality Control of Kehua Nucleic Acid Blood Screening System

ZHAO Yu,WANG Yan
Jilin Red Cross Blood Center,Jilin,Jilin Province,132001 China

ObjectiveTo ensure the clinical medication safety and improve the blood test level.MethodsThe key points of quality control of Kehua Nucleic acid blood screening system were summarized and analyzed.ResultsThe human errors were greatly reduced,the test cost was saved and the blood quality was ensured.ConclusionThe promotion of quality control of Kehua Nucleic acid blood screening system can make the blood test management advanced and economic.

Blood screening;Nucleic acid test;Quality control

R446

A

1672-5654（2017）01（c）-0049-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.03.049

2016-10-24）

赵宇（1982.12-），女，吉林长春人，研究生，主管检验技师，研究方向：生物化学与分子生物学，E-mail:175961919 @qq.com。