子痫前期患者血清和胎盘组织中Apelin表达水平的研究

刘红 张丽丽 李玲 王玉艳 温立波

子痫前期患者血清和胎盘组织中Apelin表达水平的研究

刘红 张丽丽 李玲 王玉艳 温立波

目的 探讨Apelin与子痫前期(PE)发病的相关性。方法 40例重度PE患者, 按发病孕周分为早发型PE组(<34周)与晚发型PE组(≥34周), 各20例。同时选择同期40例正常孕妇作为对照组, 包括早期对照组(<34周)与晚期对照组(≥34周), 各20例。收集各组的血清和胎盘组织标本,分别采用酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫组化法检测血清、胎盘组织中Apelin的表达。结果 早发型PE组与晚发型PE组患者的血压明显高于同期对照组孕妇(P<0.05), 但早发型PE组与晚发型PE组患者的血压比较差异无统计学意义(P>0.05)。早发型PE组与晚发型PE组患者的血清Apelin明显高于同期对照组(P<0.05), 但早发型PE组与晚发型PE组患者的血清Apelin比较差异无统计学意义(P>0.05)。早发型PE组患者胎盘组织Apelin表达阳性面积占比为(6.1±1.7)%, 晚发型PE组患者为(5.8±1.4)%。早期对照组孕妇无胎盘标本, 晚期对照组孕妇为(4.2±1.5)%。晚发型PE组患者胎盘组织Apelin表达阳性面积占比明显高于同期对照组(P<0.05), 与早发型PE组患者胎盘组织Apelin表达阳性面积占比比较差异无统计学意义(P>0.05)。PE患者血清Apelin水平与胎盘组织Apelin表达呈正相关(r=0.614, P<0.05)。结论 Apelin可能参与PE的发病, 且Apelin在血中与胎盘组织中的表达有着一致性。

Apelin；子痫前期；血清；胎盘组织

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年3月～2017年1月在阜新市第二人民医院(妇产医院)住院分娩的40例PE患者, 纳入标准：①符合乐杰主编的第8版《妇产科学》中有关PE及分类的诊断标准［4］；②单胎妊娠；③无抽烟、饮酒, 饮食与生活习惯无特殊；④符合伦理道德。排除原发性高血压、糖尿病及其他妊娠并发症和内外科合并症, 排除胎膜早破。按发病孕周将患者分为早发型PE组(<34周)与晚发型PE组(≥34周), 各 20例。早发型PE组平均年龄(25.9±4.0)岁,平均孕周(32.2±1.5)周, 平均体质量指数(BMI)(25.3±1.2)kg/m2；晚发型PE组平均年龄(26.6±3.3)岁, 平均孕周(26.6±2.1)周,平均BMI(25.6±1.7)kg/m2。同时选择同期40例正常孕妇作为对照组, 包括早期对照组与晚期对照组, 各20例。早期对照组平均年龄(26.5±3.5)岁, 平均孕周(32.1±1.5)周, 平均BMI(25.1±1.3)kg/m2；晚期对照组平均年龄(25.9±4.0)岁,平均孕周(36.6±1.5)周, 平均BMI(25.7±1.8)kg/m2。各组年龄、孕周、BMI等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05), 具有可比性。所有孕妇及家属均对本研究知情同意。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 所有孕妇均抽取清晨空腹肘静脉血4 ml,离心处理获得血清, 冻存待测。剖宫产及顺产时, 胎盘娩出后,从胎盘中央距脐带约2～3 cm处, 自母体面剪取2 cm×1 cm×1 cm, 避开钙化及机化部分。经生理盐水冲洗去除多余血液后, 用2%甲醛溶液固定24 h, 常规石蜡包埋。

1.2.2 检测方法 血清Apelin应用ELISA检测, 按试剂盒(美国PhoenixPharm)说明书操作。胎盘组织Apelin应用免疫组化法检测, 将胎盘石蜡切片脱蜡至水, 蒸馏水冲洗, 置于抗原修复液浸泡, 煮沸15 min, 然后用磷酸缓冲液 (PBS)浸泡5 min, 加入羊血清孵育20 min(37℃), 然后加入1∶100兔抗人AT1抗体在湿盒4℃过夜。PBS冲洗3次, 加入二抗孵育30 min, 再次PBS冲洗, 再次加入辣根酶标记联霉卵白素工作液孵育, 最后再用PBS冲洗即进行二氨基联苯胺(DAB)显色、苏木素复染、脱水、封片等处理。

1.2.3 观察指标及判定标准［5］显微镜下观察免疫组化反应的定位、分布面积。Apelin主要表达于胎盘滋养细胞及血管内皮细胞, 绒毛间质中有散在细胞呈阳性反应。镜下观察到在清晰的阳性细胞中, 细胞浆内有棕色颗粒沉着, 且染色明显高于背景即为阳性结果。对所有胎盘切片的阳性表达情况进行形态学量化分析, 低倍镜下观察切片阳性表达的大体情况；高倍镜下, 每个切片随机取10个视野, 记录每个视野阳性面积所占的百分比, 计算平均值。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验；相关性分析采用直线相关分析(Pearson相关)。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组孕妇血压比较 早发型PE组患者血压为(171.3±11.3)、(118.3±4.2)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)；晚发型 PE 组患者为(176.6±9.2)、(106.6±6.1)mm Hg；早期对照组孕妇为(109.8±6.7)、(77.3±7.7)mm Hg；晚期对照组孕妇为(112.3±5.2)、(75.6±8.2)mm Hg。早发型PE组与晚发型PE组患者的血压明显高于同期对照组孕妇(P<0.05), 但早发型PE组与晚发型PE组患者的血压比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 各组血清Apelin水平比较 早发型PE组患者的血清Apelin为(87.1±5.2)ng/L, 晚发型PE组患者为(90.2±7.7)ng/L。早期对照组孕妇为(48.5±5.6)ng/L, 晚期对照组孕妇为(51.1±3.9)ng/L, 早发型PE组与晚发型PE组患者的血清Apelin明显高于同期对照组(P<0.05), 但早发型PE组与晚发型PE组患者的血清Apelin比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 各组胎盘组织Apelin表达比较 早发型PE组患者胎盘组织Apelin表达阳性面积占比为(6.1±1.7)%, 晚发型PE组患者为(5.8±1.4)%。早期对照组孕妇无胎盘标本, 晚期对照组孕妇为(4.2±1.5)%。晚发型PE组患者胎盘组织Apelin表达阳性面积占比明显高于同期对照组(P<0.05), 与早发型PE组患者胎盘组织Apelin表达阳性面积占比比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.4 相关性分析 PE患者血清Apelin水平与胎盘组织Apelin表达呈正相关(r=0.614, P=0.034<0.05)。

3 讨论

Apelin是血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白(associatedprotein,APJ)的天然配体, 也是一种血管活性多肽［6］, 它广泛分布于机体各种组织, 参与多种生理、病理过程的调节。利用荧光定量PCR技术可检测出Apelin及其受体APJ在人类胎盘的绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞及血管内皮细胞中均有较高的表达, 提示其对人类胎盘血管系统稳态的调节及维持具有一定作用［7］。

Apelin与PE的关系目前并不明确, 可能为：①Apelin可通过结合APJ受体激活内皮型一氧化氮合酶(NOS), 使大量NO释放, 从而有效地扩张血管、降低血压。而NO作为一种舒血管因子, 与PE的发病密切相关, 动物实验发现抑制NO生成将引发PE样改变, 因而推测Apelin可能是通过调节血管收舒功能及心血管系统稳态来维持正常妊娠过程, 一旦表达异常, 将引起PE的病理生理改变;②血管内皮细胞可分泌Apelin, 而血管内皮细胞损伤学说是PE的发病机制之一,PE患者存在不同程度的血管内皮损伤, 所以会影响Apelin的分泌;③脂肪细胞同样可分泌Apelin, 研究表明, Apelin与肥胖症和糖尿病有关, 而肥胖、胰岛素抵抗参与PE的发病,故提示Apelin作为一种脂肪细胞因子, 在PE的发病中起到一定作用。

吕敬媛等［8］研究显示, PE患者血清中Apelin水平明显高于对照组, 且重度PE患者高于轻度PE患者。本研究与上述研究结果接近, 重度PE患者的血清与胎盘组织中Apelin的表达明显高于正常孕妇, 且Apelin的表达与发病孕周无关。相关性分析显示PE患者血清Apelin水平与胎盘组织Apelin表达呈正相关, 考虑为PE患者存在管内皮损伤, Apelin 通过激活 PKC 使肌球蛋白轻链激酶磷酸化, 进而导致血管平滑肌收缩。Apelin 通过 PI3K/Akt信号途径而使 ERK1/2 磷酸化, 刺激细胞周期蛋白 cyclin D1 等的表达使血管平滑肌细胞从 G0/G1 期向 S 期转变, 从而促进血管平滑肌细胞增殖和迁移［9］。血管内皮损伤情况下, 血管通透性改变, 从而使Apelin进入血中, 最终表现为血清Apelin水平升高。此外在血管组织表达的 Apelin 还介导氧化应激损伤, 由于胚胎被认为是半同种异体移植物, 一旦使母体-胎儿间免疫失衡, 则可能引起一系列反应, 导致子痫前期发生［10］。

以上提示Apelin的异常表达与PE发病有关, 但究竟呈何种表达水平仍值得进一步研究。此外, 本研究对象仅为重度PE患者, 虽然证明了Apelin在PE的发病中有一定作用, 并与发病孕周无关, 但缺少轻度PE患者作为对照, 所以Apelin 能否作为子痫前期预防, 以及作为子痫前期治疗的靶点还需要扩大样本进一步研究。

［1］刘伟慧, 莫国香, 严秀文.Apelin的生理与病理功能.中国生物化学与分子生物学报, 2015(7):684-688.

［2］黄峰, 朱鹏立, 黄秋霞, 等.apelin及其受体APJ基因多态性与高血压的关系.中华高血压杂志, 2015(4):359-364.

［3］路艳辉, 韩连菊, 张蕾, 等.子痫前期患者血清和胎盘组织中IL-10和TSP-1的表达及意义.河北医药, 2016, 38(13):2022-2024.

［4］ Rath G, Aggarwal R, Jawanjal P, et al.HIF-1 Alpha and Placental Growth Factor in Pregnancies Complicated With Preeclampsia: A Qualitative and Quantitative Analysis.Journal of Clinical Laboratory Analysis, 2016, 30(1):75-83.

［5］米春梅, 王丹, 高舟.氧化低密度脂蛋白 (ox-LDL)、白细胞介素(IL)-22在子痫前期患者血清及胎盘中的表达.生殖与避孕,2016, 36(7):602-607.

［6］戴薇, 许吟, 马星卫, 等.小剂量低分子肝素联合硫酸镁治疗重度子痫前期对血清和胎盘中病情相关分子的调节作用.中国现代医学杂志, 2016, 26(18):30-33.

［7］李萍, 柴静波, 姬白嫣.子痫前期患者HLA-G水平在胎盘组织、血清中表达的临床价值分析.陕西医学杂志, 2015(12):1641-1642.

［8］ 吕敬媛, 张园彤.Apelin与ADMA在子痫前期患者血清中的表达.黑龙江医药科学, 2016, 39(1):104-106..

［9］ 于兴隆, 葛志明.Apelin-Apelin受体信号系统在心血管系统中的作用研究进展.中华老年心脑血管病杂志, 2010, 12(7):661-662.

［10］ 江燕萍, 孟锦绣, 游可理, 等.子痫前期胎盘组织中Apelin/APJ的表达及其临床意义.实用妇产科杂志, 2013, 29(1):36-38.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.21.033

123000 阜新市第二人民医院(妇产医院)

子痫前期(preeclampsia, PE)是妊娠期常见的特发性疾病,目前其发病机理尚不完全明确, 可能与胎盘缺血缺氧、氧化应激、血管内皮损伤、代谢综合征、免疫调节紊乱及遗传因素有关［1］。Apelin是从牛胃提取物中分离出的一种生物活性肽, 研究发现, 它对心血管、神经、肺、肾等多个系统及体液、肥胖的调节有重要影响［2］。既往有研究提示［3］, Apelin可能参与妊娠期高血压病和PE的发病过程, 但相关研究较少。本研究分析了PE孕妇血清和胎盘组织中Apelin的表达,探讨Apelin在PE发病机制中的作用, 以期为PE的诊治提供参考。

2017-09-22］