慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉内镜手术前后组织中血管内皮生长因子和黏蛋白MUC5AC的表达情况

许航宇，舒海荣，宋建新

（浙江省台州市中心医院 耳鼻喉科，浙江 台州 318000）

慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉内镜手术前后组织中血管内皮生长因子和黏蛋白MUC5AC的表达情况

许航宇，舒海荣，宋建新

（浙江省台州市中心医院 耳鼻喉科，浙江 台州 318000）

目的 探讨慢性鼻-鼻窦炎（CRS）鼻息肉内镜手术前后鼻黏膜组织中血管内皮生长因子 （VEGF）和黏蛋白MUC5AC的表达情况。方法选择2012年1月-2015年1月台州市中心医院CRS鼻息肉内镜手术患者75例作为鼻息肉组和鼻骨骨折或鼻出血患者75例作为对照组，鼻息肉患者取术前鼻息肉标本、术后6周上颌窦口黏膜标本、对照组取下鼻甲上缘黏膜标本进行HE染色观察嗜酸性粒细胞计数、免疫组化染色测定VEGF和黏蛋白MUC5AC的表达情况。结果鼻息肉术前组和鼻息肉术后组标本中嗜酸性粒细胞均高于对照组（P＜0.05），鼻息肉术后组鼻黏膜嗜酸性粒细胞低于鼻息肉术前组（P＜0.05）。鼻息肉术前组和鼻息肉术后组标本中VEGF和黏蛋白MUC5AC阳性表达面积百分率均高于对照组（P＜0.05），鼻息肉术后组鼻黏膜VEGF和黏蛋白MUC5AC阳性表达面积百分率低于鼻息肉术前组（P＜0.05）。结论嗜酸性粒细胞计数和VEGF、黏蛋白MUC5AC表达水平在CRS鼻息肉内镜术前鼻黏膜组织中较高，术后6周时明显降低，VEGF和黏蛋白MUC5AC可能参与术后鼻黏膜的修复。

慢性鼻-鼻窦炎；鼻内镜；鼻息肉；血管内皮生长因子；黏蛋白MUC5AC

慢性鼻-鼻窦炎（chronic rhinitis sinusitis，CRS）鼻息肉复发率比较高，发病原因尚不十分清楚，鼻内镜手术治疗为近年来鼻息肉的治疗方法之一，随着功能性内镜鼻窦手术治疗技术的不断成熟，鼻息肉的治愈率显着提高，但术后仍有部分患者发生复发[1]。鼻内镜术后的转归过程比较漫长，多种细胞因子和生长因子影响术后黏膜上皮的修复过程[2]。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）为促血管因子，是最强的血管通透因子，在血管再生和组织修复过程中发挥重要作用[3-4]；CRS的特征性病变为黏液过度分泌，MUC5AC为呼吸道黏蛋白，主要由腺体细胞产生[5-6]，为鼻窦黏液的主要成分，在CRS鼻窦黏膜中表达增加，在CRS鼻息肉中，这种情况更加显着。本文对CRS鼻息肉内镜手术前后鼻黏膜组织中VEGF和黏蛋白MUC5AC进行研究，探讨CRS鼻息肉内镜手术前后鼻黏膜组织中VEGF和黏蛋白MUC5AC的变化情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2012年1月-2015年1月浙江省台州市中心医院耳鼻喉科CRS鼻息肉内镜手术患者75例作为鼻息肉组和鼻骨骨折或鼻出血患者75例作为对照组，鼻息肉组患者年龄（44.23±12.21）岁，男39例，女36例；对照组年龄（42.12±10.35）岁，男37例，女38例。本研究通过医院伦理委员会讨论认可。

1.1.1 纳入标准鼻息肉组患者均为首次手术患者，术前1个月内未接受抗生素和激素治疗，无急性呼吸道感染，无哮喘、支气管扩张、变应性鼻炎和自身免疫性疾病，术后随访期间未应用激素药物；对照组患者无哮喘、变应性鼻炎、自身免疫性疾病等病史，术后1个月内无急性呼吸道感染和激素药物应用史。

1.1.2 标本收集与保存鼻息肉组患者术中行鼻息肉切除术，取鼻息肉组织标本，生理盐水冲洗，干纱布吸干水分，放入多聚甲醛中固定，24 h后转入磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline，PBS）中作为鼻息肉术前组；术后门诊随访，生理盐水冲洗鼻腔，清理粘连、囊泡和肉芽组织，术后6周复查时冲洗鼻腔鼻窦后，鼻内镜下钳夹肉芽组织、囊泡和（或）息肉样黏膜组织作为鼻息肉术后组；对照组取下鼻甲上缘黏膜标本。鼻息肉组术后标本和对照组标本的保存方法同鼻息肉组术前标本的保存方法。

1.2 主要试剂

VEGF兔抗人单克隆抗体（美国sigma公司），MUC5AC鼠抗人单克隆抗体（美国sigma公司），SABC免疫组化试剂盒（美国Santa cuze公司）等。

1.3 实验方法

1.3.1 HEE 染色 将3组标本进行石蜡包埋，切片机上切成5μm厚切片，脱腊脱水后常规进行HE染色，观察嗜酸性粒细胞情况，嗜酸性粒细胞的细胞浆出现粉红色颗粒，细胞质比较丰富，细胞核为双核或者分叶核，高倍显微镜下计数嗜酸性粒细胞数量，取8个高倍视野进行计数，取平均值。

1.3.2 免疫组化染色 采用免疫组化染色（SP染色）观察3组标本VEGF和黏蛋白MUC5AC的表达情况，VEGF测定以VEGF兔抗人单克隆抗体为一抗，黏蛋白MUC5AC测定以MUC5AC鼠抗人单克隆抗体为一抗，按照免疫组化染色试剂盒说明书进行测定。细胞浆或者细胞膜出现棕黄色染色为VEGF阳性细胞或黏蛋白MUC5AC阳性细胞，高倍显微镜下计算阳性细胞面积占总细胞面积的百分率，取8个区域进行观察，取平均值。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0软件进行分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，3组均数比较采用方差分析，组内两两比较采用LSD检验，取P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HE染色结果

鼻息肉术前组鼻息肉标本上皮基底膜增厚形成透明膜层，上皮下组织水肿，杯状细胞和腺体增生，腺体周围和黏膜上皮下见大量嗜酸性细胞浸润；鼻息肉术后组鼻黏膜组织轻度水肿，杯状细胞和腺体增生减轻，嗜酸性细胞减少；对照组鼻黏膜无水肿，细胞排列整齐，见少量炎症细胞。见图1。

图1 3组标本HE染色 （×200）

2.2 3组嗜酸性粒细胞浸润情况

鼻息肉术前组和鼻息肉术后组鼻黏膜嗜酸性粒细胞均高于对照组（P＜0.05），鼻息肉术后组鼻黏膜嗜酸性粒细胞低于鼻息肉术前组（P＜0.05）。见表1。

2.3 3组标本组织中VEGF的表达情况

细胞浆和细胞膜中出现棕黄色颗粒的细胞为VEGF阳性细胞（图2）。鼻息肉术前组和鼻息肉术后组标本VEGF阳性表达面积百分率均高于对照组（P＜0.05），鼻息肉术后组鼻黏膜VEGF阳性表达面积百分率低于鼻息肉术前组（P＜0.05）。见表2。

图2 3组标本组织中VEGF的表达情况 （SP×400）

2.4 3组标本组织中黏蛋白MUC5AC的表达情况

棕黄色细胞为黏蛋白MUC5AC阳性细胞，黏蛋白MUC5AC阳性主要表达于上皮细胞的细胞膜和细胞浆中，在腺体细胞中无表达（图3）。鼻息肉术前组和鼻息肉术后组标本中黏蛋白MUC5AC阳性表达面积百分率均高于对照组（P＜0.05），鼻息肉术后组鼻黏膜黏蛋白MUC5AC阳性表达面积百分率低于鼻息肉术前组（P＜0.05）。见表3。

图3 3组标本组织中黏蛋白MUC5AC的表达情况 （SP×200）

表1 3组嗜酸性粒细胞浸润情况 （±s）

表1 3组嗜酸性粒细胞浸润情况 （±s）

注：1）与鼻息肉术后组比较，P＜0.05；2）与对照组比较，P＜0.05

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表2 3组标本组织中VEGF的表达情况 （%，±s）

表2 3组标本组织中VEGF的表达情况 （%，±s）

注：1）与鼻息肉术后组比较，P＜0.05；2）与对照组比较P＜0.05

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表3 3组标本组织中黏蛋白MUC5AC的表达情况 （%，±s）

表3 3组标本组织中黏蛋白MUC5AC的表达情况 （%，±s）

注：1）与鼻息肉术后组比较，P＜0.05；2）与对照组比较，P＜0.05

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3 讨论

CRS鼻息肉功能性内镜鼻窦手术的目的主要为恢复CRS鼻窦黏膜的功能和形态，手术治疗为CRS鼻息肉治疗的开始，术后为漫长的上皮再生恢复阶段，术后黏膜的新生病变为比较常见且处理起来比较困难的问题，黏膜新生病变主要包括息肉再生、囊泡、肉芽和息肉样黏膜水肿等，这些新生病变阻碍术后黏膜的上皮化，引起术腔闭塞或者引流道阻塞，鼻息肉复发，复发的鼻息肉较原发鼻息肉处理更加困难[7-8]。白细胞的炎症区域的聚集为炎症性疾病的重要特征，鼻息肉的形成是一种复杂的炎症反应过程，主要病理特征为嗜酸性粒细胞的浸润[9]。本研究对CRS鼻息肉内镜手术前后鼻黏膜进行HE染色，结果发现CRS鼻息肉术前组鼻息肉标本上皮基底膜增厚形成透明膜层，上皮下组织水肿，杯状细胞和腺体增生，腺体周围和黏膜上皮下见大量嗜酸性细胞浸润；术后鼻黏膜组织轻度水肿，杯状细胞和腺体增生减轻，嗜酸性细胞减少；对照组鼻黏膜无水肿，细胞排列整齐，见少量炎症细胞；CRS患者术前和术后鼻黏膜嗜酸性粒细胞均高于对照组，术后鼻黏膜嗜酸性粒细胞低于术前。表明鼻内镜手术能够减轻CRS鼻息肉患者鼻腔炎症反应，但术后6周时鼻腔炎症反应仍然存在，嗜酸性粒细胞计数仍明显高于对照组。

VEGF为同型二聚体糖蛋白，和受体结合发挥作用，在正常成人组织中水平比较低，在鼻息肉组织中呈高表达，考虑VEGF在鼻息肉的发生发展中对鼻黏膜水肿的产生发挥重要作用。VEGF和受体结合后引起钙内流，刺激嗜酸性粒细胞迁移和增殖，引起三磷酸肌醇聚集，间质胶原酶表达增加，形成新生血管[10]。鼻息肉中血管较少，但小血管和毛细血管的通透性高，且大部分毛细血管壁为有孔的，容易导致水肿的发生。VEGF在息肉的瘢痕形成和上皮损伤过程中均有较高的表达[11]。刘楠等[12]收集鼻内镜下CRS伴鼻息肉患者的鼻息肉进行研究，发现CRS鼻息肉组织中VEGF的表达水平明显升高，认为VEGF可能参与鼻息肉的发生发展。本研究结果发现CRS鼻息肉患者术前和术后鼻黏膜VEGF阳性表达面积百分率均高于对照组，术后鼻黏膜VEGF阳性表达面积百分率低于术前。本研究结果和刘楠等[12]研究结果一致，发现CRS鼻息肉患者鼻黏膜中VEGF表达明显升高，鼻内镜术后VEGF表达水平显着下降，但仍高于对照组。

CRS的基本病理变化为黏膜下腺体和杯状细胞增生，引起鼻腔分泌黏液脓性鼻涕，鼻腔黏液的过度分泌机制比较复杂，呼吸道黏蛋白的主要成分为MUC5AC、MUC2以及MUC5B，主要由黏膜下腺体细胞产生，MUC5AC在CRS以及正常鼻腔黏膜中均有表达，MUC5AC为鼻窦黏液的主要成分之一，鼻息肉发生时出现MUC5AC表达上调[13-14]。罗庆等[15]发现CRS患者鼻黏膜中MUC5AC表达升高，表明CRS为高黏液性疾病。本研究结果发现CRS鼻息肉患者术前和术后鼻黏膜黏蛋白MUC5AC阳性表达面积百分率均高于对照组，术后鼻黏膜黏蛋白MUC5AC阳性表达面积百分率低于术前。本研究证实了CRS鼻息肉患者鼻黏膜中MUC5AC表达增加，术后6周时虽较术前降低，但仍高于对照组。

综上所述，鼻内镜术后6周是术腔黏膜上皮化的重要阶段，黏膜上皮化仍没有完成，VEGF和黏蛋白MUC5AC可能在CRS鼻息肉的发生发展以及病情变化中发挥重要作用，在术后随访过程中对出现的炎性肉芽、囊泡等阻碍术腔修复的情况进行及时处理，促进术后创面的愈合。

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（吴静 编辑）

Expression of the VEGF and mucin MUC5AC in nasal mucosa before and after chronic rhinitis - sinusitis and nasal polyps -endoscopic sinus surgery

Hang-yu Xu, Hai-rong Shu, Jian-xin Song
(Department of Otolaryngology, Taizhou Central Hospital, Taizhou, Zhejiang 318000, China)

ObjectiveTo investigate the expression of the vascular endothelial growth factor (VEGF) and mucin MUC5AC in nasal mucosa before and after chronic rhinitis - sinusitis and nasal polyps - endoscopic sinus surgery.Methods75 cases chronic rhinitis - sinusitis and nasal polyps - endoscopic sinus surgery patients were selected as nasal polyps group and 75 cases of nasal bone fracture or epistaxis patients as the control group from January 2012 to January 2015. Took the samples of nasal polyps before surgery and the maxillary sinus mucosa specimens after surgery six weeks of nasal polyps’ patients and on the edge of the inferior turbinate mucosa specimens of the control group to detect eosinophil count by HE staining, and detect the expression of VEGF and mucin MUC5AC by immunohistochemical staining.ResultsThe specimens eosinophils of preoperative nasal polyp group and postoperative nasal polyp group were higher than that of control group (P＜ 0.05), the nasal eosinophils of postoperative nasal polyp group was lower than that of preoperative nasal polyp group (P＜ 0.05). The expression of specimens VEGF and mucin MUC5AC area percentages in preoperative nasal polyp group and postoperative nasal polyp group were higher than that in control group (P＜ 0.05), the expression of nasal VEGF and mucin MUC5ACarea percentages in the postoperative nasal polyp group was lower than that of preoperative nasal polyp group (P＜0.05). Conclusion Eosinophil count and the expression levels of VEGF and mucin MUC5AC of nasal mucosa in chronic rhinitis - sinusitis and nasal polyps - endoscopic sinus surgery preoperative are higher, and reduce at postoperative six weeks, VEGF and mucin MUC5AC may be involved nasal repair.

chronic rhinitis - sinusitis; nasal endoscopy; nasal polyps; vascular endothelial growth factor; mucin MUC5AC

R765.41

A

10.3969/j.issn.1007-1989.2016.12.014

1007-1989（2016）12-0070-05

2016-08-29