痰标本涂片镜检与细菌培养结果符合性的分析

汪林娇易 薇赵曙刚

1.云南省德宏州人民医院检验科，云南芒市 678400；2.云南省德宏州人民医院药剂科，云南芒市 678400

痰标本涂片镜检与细菌培养结果符合性的分析

汪林娇1易 薇1赵曙刚2

1.云南省德宏州人民医院检验科，云南芒市 678400；2.云南省德宏州人民医院药剂科，云南芒市 678400

目的比较痰标本涂片革兰染色镜检结果与细菌培养结果之间的符合性，了解痰涂片镜检的临床价值。方法选取我院2015年9月1日～11月30日住院及门诊患者的865例痰标本。将临床送检的865例痰标本进行培养前的涂片镜检，根据涂片镜检结果，将痰标本分为A、B、C三大类。同时对痰标本进行培养鉴定，分析涂片镜检结果与细菌检出率之间的关系。结果865例痰标本中，涂片合格标本695例，占80.3%；不合格标本170例，占19.7%。在涂片合格的标本中，有525例检出627株细菌，细菌检出率为75.5%。合格痰标本涂片结果与细菌培养结果的符合率为82.4%。在170例涂片不合格的标本中，43例痰标本检出60株细菌，细菌检出率为25.3%。结论痰涂片能较早作出预测性报告，作为诊治呼吸道感染的初步依据，指导临床合理用药。

痰涂片；培养；痰标本；分析

下呼吸道感染患者标本采集临床通常采取自然咳痰法采集痰标本，痰标本容易受口腔正常菌群的污染，从而导致病原菌的检出率降低，同时也会使细菌培养结果和临床症状不符合的情况出现。随着医疗水平的不断发展，痰涂片镜检在临床上得到了广泛地应用，可有效保障标本质量，提升培养结果的准确性与科学性，帮助临床医师了解患者病情变化，并指导临床用药[1]。本研究选取我院所收集的865例痰标本，在细菌培养前先进行涂片革兰染色镜检，并和细菌培养结果做对照分析。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

选取2015年9月1日～11月30日间我院住院及门诊患者的痰标本。门诊患者痰标本主要选取怀疑有下呼吸道感染疾病患者的痰标本，住院患者痰标本主要选取存在肺炎、慢性支气管炎、支气管扩张等下呼吸道感染的患者的痰标本。

1.2 仪器和试剂

VITEK2－Compact全自动微生物鉴定仪。珠海贝索公司生产的快速革兰氏染色液，由法国生物梅里埃公司生产的巧克力琼脂培养基、哥伦比亚血琼脂平板、麦康凯琼脂平板。

1.3 方法

1.3.1 痰标本的预处理 痰标本培养前的处理含有大量脓液或者血液和黏稠的痰，先用无菌生理盐水将痰洗涤3次，再将痰标本加入等量的胰酶溶液（PH=7.6），放置于35℃培养箱90min待痰标本液化后再进行接种。外观正常的标本可直接接种。

1.3.2 痰标本涂片镜检 痰标本直接涂片检查将痰标本含有脓或者带有血液的部分，涂成薄片待干，用快速革兰染液染色镜检。痰标本直接涂片镜检标准分类按《全国临床检验操作规程》第二版相关内容、《实用临床微生物诊断学》（蔡文诚相关章节）[2-3]结合本室的实际工作，将痰涂片结果分为ABC三类：A类低倍镜视野下白细胞不低于25，鳞状上皮细胞不超过10，属于较理想标本；B类低倍镜下白细胞不低25，鳞状上皮细胞大于10但不超过25，细菌种类不低于3种，属于可接受标本；C组低倍视野下鳞状上皮细胞不低于25，属于不合格痰标本。A、B属于合格痰标本，适合做细菌培养，C为不合格痰标本，不适合做细菌培养。

1.3.3 细菌培养 普通细菌培养将标本前处理好的痰标本接种于巧克力琼脂平板、哥伦比亚血平板、麦康凯琼脂平板，放置5%二氧化碳培养箱，35℃培养18～24h，直接涂片革兰染色镜检如检出真菌孢子或菌丝者应加种沙保罗琼脂培养基，观察菌落特征对主要的病原菌和致病菌或优势生长细菌，经梅里埃公司VITEK2-Compact微生物鉴定仪鉴定到种并进行体外药物敏感性实验。

1.4 统计学方法

采用SPSS16.0统计软件进行数据处理及统计学分析，计数资料以%表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 痰培养标本的合格率

根据痰标本涂片镜检三分类标准，涂片镜检合格的痰标本695例，合格率为80.3%，其中A类痰标本365例，占总数的42.2%，B类痰标本330例，占总数38.2%，涂片镜检不合格痰标本C类170例，占总数的19.7%。

2.2 痰标本涂片镜检ABC三类与细菌的检出率的关系

865例痰标本中有568例标本检出致病菌或优势生长菌，阳性检出率为65.7%，涂片镜检合格痰标本有695例，涂片镜检合格的痰标本检出细菌数为525例，检出率为75.5%（525/695），涂片不合格痰标本有170例，检出细菌43例，检出率为25.3%（43/170）。经χ2检验，A、B、C三类标本细菌检出率存在显著差异（χ2=162.460，P＜0.01），经χ2分割AB两类涂片合格标本的细菌检出率与C类涂片不合格标本的细菌检出率有显著差异（χ2=152.946，P＜0.01），A类标本细菌检出率与C类标本细菌检出率有显著差异（χ2=153.721，P＜0.01），B类标本细菌检出率与C类标本细菌检出率有显著差异（χ2=89.24，P＜0.01），见表1。

表1 痰标本涂片分类和细菌检出率

2.3 合格痰标本涂片镜检结果与细菌培养的符合率

695例合格痰标本共检出致病菌627株，涂片镜检合格痰标本涂片与细菌培养结果总符合率为82.4%。在627株阳性标本中检出革兰阴性菌395株（占63.0%)，革兰阳性菌158株（25.2%）检出的革兰阴性菌主要为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌及流感嗜血杆菌；革兰阳性菌主要为金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、肺炎链球菌、A群链球菌及粪肠球菌；真菌74株（11.8%）,包括白色念珠菌及热带念珠菌。涂片阴性而培养出致病菌的占10.5%，以链球菌属（28.5%）、肠杆菌科细菌（20.8%）、白念珠菌（18.5%）和非发酵菌(15.8%)为主，涂片检出细菌而细菌培养未培养出致病菌的为9.5%，其痰涂片镜检结果与细菌培养结果比较，见表2。

表2 695例合格痰标本涂片镜检与细菌培养的结果比较

3 讨论

痰标本的直接涂片染色镜检，可以通过镜检结果判断痰标本是否合格，可以通过镜检结果来作为细菌培养的依据。痰标本的质量是确保痰培养结果准确性的首要前提，只有在痰标本合格基础上培养的结果，才可能准确[4]。在865例临床痰标本中，痰涂片镜检695例合格，合格率为80.3%，其合格率稍高于杨小琴[5]的报道，培养阳性检出率为75.5%（525/695），不合格标本170例，培养阳性检出率为25.3%（43/170），两者比较差异有显著性（χ2=152.946，P＜0.01）。因此可见，在痰涂片镜检合格的标本，培养阳性率最高，痰标本涂片镜检对痰标本的质量进行了严格控制，提高了痰标本的培养阳性检出率。对于涂片不合格的痰标本，可以联系临床要求重新留取痰标本，提高痰培养的检出率。影响痰标本涂片的合格率主要由以下几点原因造成：临床医护人员对痰标本的采集没有引起重视，没有对患者给予说明和指导，从而导致患者没有留取清晨深部的痰液，留取的是随机的唾液。患者采集标本后没有及时送检或检验人员没有立即处理接种标本，痰液受到上呼吸道正常菌群的污染。微生物室检验人员由于工作责任心和技术差异没有挑取痰标本的脓性或带血的部分，涂片厚薄程度、涂片染色时间等因素。

695例合格痰标本中涂片与细菌培养结果的总符合率为82.4%与Pagano等[6-8]报道符合率74.2%～80.2%基本一致，但较贺靖冬等[9]报道符合率的65.6%结果偏高。证明了合格痰标本涂片与培养结果的符合率有较高的一致性，具有预先判断的辅助价值。695例合格痰标本共检出627株致病菌，检出的菌种与临床主要病原菌一致，真菌检出率为11.8%，主要为ICU、呼吸科和感染科。因酵母（样）菌生长缓慢，而临床对培养的需要又急迫，故可通过涂片检查阳性者初报临床，并有意识地将标本培养延长观察，以免漏检[10]。

痰涂片的镜检结果与痰培养结果不符的原因分析 涂片检出细菌而培养未检出致病菌主要的原因可能是患者在留取标本前已使用了抗菌药物，抑制了致病菌的生长；另一原因可能为实验室的条件有限或培养时间不足达不到苛养菌或真菌的生长条件。涂片未见细菌而培养出致病菌，其中检出的致病菌主要是革兰阴性杆菌和真菌，主要原因可能为标本含菌量少，涂片时只能选取极少一部分标本，没有取到含有细菌的部分；当痰标本黏稠时，细菌被黏液和脓细胞包裹，镜检无法清晰地看到其形态，造成漏检[11]。

综上所述，痰涂片革兰染色可以筛选出合格的痰标本，提高痰培养的细菌检出率。痰标本的细菌学检查对下呼吸道感染的诊断有重要意义，痰标本的直接涂片镜检可提高下呼吸道感染病原学诊断的特异性和敏感性[12]。可以较快的作出预测性报告，及时指导临床合理用药。

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Analysis on the compliance of sputum smears microscopy and bacterial culture results

WANG Linjiao1YI Wei1ZHAO Shugang2
1.Clinical Laboratory,Dehong People's Hospital,Mangshi 678400,China；2.Department of Pharmacy,Dehong People's Hospital,Mangshi 678400,China

ObjectiveTo compare the compliance of sputum specimens from gram staining and bacterial culture,and to evaluate the clinical value of sputum smear.Methods865 sputum specimens of inpatients and outpatients in Dehong People's Hospital from September 1st to December 30th 2015 were selected as the study objects.These 865 sputum specimens for clinical inspection were examined by gram staining and sputum smear before bacterial culture,and they were divided into three groups according to smear results.Meanwhile sputum specimens were cultured and identified.The correlation between sputum smear and bacterial culture on the bacterial detection rate was analyzed.ResultsThe qualified rate of sputum smear from 865 specimens was 80.3% (695/865),and unqualified rate was 19.7% (170/865).627 strains of bacteria were detected in 525 out of 695 qualified smears specimens.The detection rate was 75.5%.The coincidences rate of qualified sputum smear and culture was 82.4%.60 strains of bacteria were detected in 43 sputum specimens from 170 unqualified specimens.ConclusionSputum smear can provide early preliminary evidence for diagnosis of respiratory tract infections and guide rational drug use in the clinic.

Sputum smear;Culture;Sputum specimen;Analysis

R446.5

B

2095-0616（2016）19-139-03

2016-07-16）