酱油中环己基氨基磺酸钠的测定

酱油中环己基氨基磺酸钠的测定

仁绍坤 西双版纳州食品药品检验所

环己基氨基磺酸钠，又称为甜蜜素，是食品生产中常用的添加剂。甜蜜素是一种常用甜味剂，其甜度是蔗糖的30～40倍。但消费者如果经常食用甜蜜素含量超标的饮料或其他食品，会因摄入过量对人体的肝脏和神经系统造成危害，特别是对代谢排毒的能力较弱的老人、孕妇、小孩，其危害更明显。

国家标准《食品中环己基氨基磺酸钠测定方法》（GB/T 5009.97-2003）中规定，环己基氨基磺酸钠检测的第一法为气相色谱法，其液体试样处理方法为，称取20.0 g试样于100 mL带塞比色管，置冰浴中。加入5 mL 50 g/L亚硝酸钠溶液，5 mL 100 g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30 min，并经常摇动，然后准确加入10 mL正己烷，5 g氯化钠，摇匀后置旋涡混合器上振动1 min或振摇80次，待静止分层后吸出己烷层于10 mL带塞离心管中进行离心分离，将标准提取液进样1～5 μL于气相色谱仪中。测得响应值，从标准曲线图中查出相应含量。

酱油样品按国家标准方法处理，在冰浴、加入正己烷提取过程、振摇时，会产生大量的泡沫，导致环己基氨基磺酸钠转换和提取不彻底，严重影响最终结果。基于此，本文研究几种方法，通过比较后，选取一种较好的方法处理样品，消除泡沫的影响，确保检验结果的准确。

试剂

正己烷，氯化钠，50 g/L亚硝酸钠溶液，100 g/L硫酸溶液，亚铁氰化钾，乙酸锌，43 g/L氢氧化钠溶液。本标准中所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯（AR），水为一级水。

环己基氨基磺酸钠标准溶液（含环己基氨基磺酸钠＞98%）：精确称取1.000 0 g环己基氨基磺酸钠，加水溶解并定容至100 mL，环己基氨基磺酸钠浓度为10 mg/mL。

仪器

Agilent7890A气相色谱仪附氢火焰离子化检测器，旋涡混合器，离心机。

色谱条件

色谱柱

Agilent HP-5，30 m×0.32 m× 0.5 μm。

测定条件

柱温：70 ℃保持1 min，以5 ℃/min的速率升到100 ℃，以40 ℃ /min的速率升到220 ℃；汽化温度：180 ℃；检测温度：230 ℃；流速：柱恒流1 mL/min；氢 气30 mL/min； 空 气300 mL/min；分流比：15∶1。

测定方法

标准曲线的制备

准确吸取1.00 mL环己基氨基磺酸钠标准溶液于100 mL带塞比色管中，加水20 mL，置冰浴中，加入5 mL 50g/L亚硝酸钠溶液，5 mL 100 g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30 min，并经常摇动，然后准确加入10 mL正己烷，5 g氯化钠，摇匀后置旋涡混合器上振动1 min或振摇80次，待静止分层后吸出己烷层，加入43 g/L NaOH调节pH至9～10，于10 mL带塞离心管中进行离心分离，每mL正已烷提取液相当1 mg环己基氨基磺酸钠，将标准提取液进样1～5 μL于气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线。

加标方式

同时称取4份酱油样品，2份不加标直接处理，另外2份分别加入1 mL浓度为10.003 mg/mL的甜蜜素标准溶液后再处理，同时取标准溶液1 mL按方法步骤处理后测定相应的浓度。

处理方法

离心法去除泡沫

称取20.0 g试样于100 mL带塞比色管，置冰浴中。加入5 mL 50g/L亚硝酸钠溶液，5 Ml 100 g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30 min，并经常摇动，每振动1次就离心去除泡沫，然后准确加入10 mL正己烷，5 g氯化钠，摇匀后置旋涡混合器上振动1 min或振摇80次，每振摇10次就离心去除泡沫，待静止分层后吸出己烷层于10 mL带塞离心管中进行离心分离，将标准提取液进样1～5 μL于气相色谱仪中。测得响应值，从标准曲线图中查出相应含量，测定数据见表1。由表1可看出，离心虽可消除泡沫影响，达到一定的效果，但处理样品过程中产生的泡沫仍对转换和提取有很大的影响，导致回收率偏低，只达到60.59%。

增大接触面积，加入沉淀剂消除泡沫的影响

称取20.0 g试样于100 mL带塞锥形瓶中，加入蛋白沉淀剂亚铁氰化钾和乙酸锌后产生黄褐色沉淀，呈糊状，置冰浴中。加入5 mL 50 g/L亚硝酸钠溶液，5 mL100 g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30 min，并经常摇动，然后准确加入10 mL正己烷，5 g氯化钠，摇匀后置旋涡混合器上振动1 min或振摇80次，待静止分层后吸出己烷层于10 mL带塞离心管中进行离心分离，将标准提取液进样1～5 μL于气相色谱仪中。测得响应值，从标准曲线图中查出相应含量，测定的数据见表2。由表2可看出，加入沉淀剂后，虽消除泡沫的影响，得到透亮溶液，但回收率仅为43.5%，仍未达到要求，说明加入的沉淀剂对结果影响很大。

表1 离心法对实验结果的影响

表2 加入沉淀剂对实验结果的影响

表3 调节pH对实验结果的影响

减少取样量，调节pH为碱性

称取5.0～10 g（5～10 mL）样品于容量瓶中，加水定容至25 mL，摇匀，从容量瓶中准确吸取20 mL溶液（或全部转移）于250 mL带塞锥形瓶中，置冰浴中。依次分别加入5 Ml 50 g/L亚硝酸钠溶液和100 g/L硫酸溶液，调节pH为1～2，摇匀后在冰浴中放置30 min，并经常摇动。分别准确加入10 mL正己烷，5 g氯化钠，摇匀后置于涡漩混合器上振动1 min，用吸管取出上层正己烷于离心管中，加入43 g/L NaOH调节pH为9～10，以4 000 r/min离心10 min，供气相色谱分析。用此方法处理，再振摇的过程中几乎没有泡沫的产生，可消除泡沫对结果的影响。测定数据见表3。由表3可看出，按5.3方法对酱油样品进行处理，处理过程中基本消除泡沫，使转换和提取比较完全，加入碱后使转换的物质更加稳定，且回收率达到97.3%，此方法可运用于酱油环己基氨基磺酸钠的检测。

结论

用离心的方法可去除大部分的泡沫，但处理过程中产生大量的泡沫减少样品和液体的接触面，即使是离心也未能达到良好的效果，样品转换不充分，提取不完全，导致测定结果不准确。采用第二种方法，把比色管换为带赛的锥形瓶中增大接触面积法，虽有效增大了样品的接触面积，可使样品在处理中转换和提取比较好，可回收率仍然低于50%，说明加入的蛋白沉淀剂亚铁氰化钾和乙酸锌虽然能消除泡沫，但影响环己基氨基磺酸钠的转换和提取，使测定结果严重偏低。采用第三种方法，减少取样量，调节pH为碱性方法测定酱油中环己基氨基磺酸钠，回收率达到97.3%，可见此法在处理过程中可有效消除泡沫的干扰，使测定结果达到要求。