咳速停胶囊中5味药材成分的薄层色谱鉴别

罗奕，黄红梅，姚文丽，吴琳琳，杨娟艳，茅向军

(1.贵州医科大学药学院，贵州 贵阳 550004；2.贵州省食品药品检验所食品室，贵州 贵阳 550005；3.贵阳中医学院药学院，贵州 贵阳 550002)



咳速停胶囊中5味药材成分的薄层色谱鉴别

罗奕1，2，黄红梅3，姚文丽1，吴琳琳1，杨娟艳3，茅向军2

(1.贵州医科大学药学院，贵州 贵阳 550004；2.贵州省食品药品检验所食品室，贵州 贵阳 550005；3.贵阳中医学院药学院，贵州 贵阳 550002)

目的 为完善咳速停胶囊现有质量标准项下的薄层鉴别，对咳速停胶囊中枇杷叶、麻黄、罂粟壳、百尾参、虎耳草5味药材进行薄层色谱鉴别(TLC)研究。方法 采用TLC法分别对5味药材进行鉴别。结果 所建立的方法专属性较强，各色谱斑点清晰且分离度良好，阴性均无干扰。结论 TLC可适用于咳速停胶囊中5味药材的薄层鉴别。

咳速停胶囊；枇杷叶；麻黄；罂粟壳；百尾参；虎耳草；薄层鉴别

咳速停胶囊为贵州特色苗药品种之一，其处方用药包括吉祥草、百尾参、虎耳草等9味药材，具有补气养阴、润肺止咳、益胃生津功效，临床常用于感冒及慢性支气管炎引起的咳嗽、咽干、咯痰、气喘。其现行质量标准已收载入国家食品药品监督管理局，在该标准中薄层鉴别项下主要集中于对吉祥草、桔梗、桑白皮3味药材的研究[1]，而对处方中其余6味药材(黄精、枇杷叶、麻黄、罂粟壳、虎耳草、百尾参)尚未进行系统的薄层鉴别研究。因中药的真伪、优劣与其制剂的临床用药安全息息相关[2]，为完善其标准、提高咳速停胶囊的质量控制水平，保证临床用药的安全性及有效性，本实验通过参考国内外文献报道现状以及相应资料和标准项下的薄层鉴别项，同时增补、完善了咳速停胶囊中枇杷叶、麻黄、罂粟壳、虎耳草、百尾参5味药材的薄层鉴别，并初次对百尾参药材进行薄层色谱(TLC)鉴别研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 XS205型电子分析天平为梅特勒-托利多仪器上海有限公司生产；ZF7三用紫外分析为巩义市予华仪器有限责任公司生产；KQ-300DE型数控超声波清洗器为昆山市超声仪器有限公司生产；DK-98-IIA电热恒温水浴锅、101-OA型电热鼓风干燥箱均为天津市泰斯特仪器有限公司生产。

1.2 试药及试剂 熊果酸对照品(批号110742-200202)、盐酸麻黄碱对照品(批号171241-201508)、吗啡对照品(批号171201-201123)均购买自中国药品生物制品检定所；枇杷叶对照药材(批号121261-201303)、麻黄对照药材(批号121051-201005)、罂粟壳对照药材(批号120957-201507)，均购买自中国食品药品检定研究院；9味药材(吉祥草、桔梗、桑白皮、黄精、枇杷叶、麻黄、罂粟壳、虎耳草、百尾参)均由贵州百灵有限公司提供及贵州省食品药品检验所中药标本馆李杨老师鉴别；所用试剂均为分析纯。

1.3 薄层板及样品 所用硅胶G薄层板均由青岛海洋化工厂分厂生产、咳速停胶囊(批号为分别20150613、20150701、20150702)均由贵州百灵有限公司提供，自制不同阴性对照样品。

2 方法与结果

2.1 枇杷叶的薄层鉴别[3-4]称取咳速停胶囊内容物1.0 g，加95%乙醇溶液20 mL，超声30 min，趁热滤过及蒸干，残渣加甲醇2 mL使其完全溶解，制成供试品溶液。精密称取适量熊果酸对照品，加甲醇制成浓度为0.1 g·L-1的对照品溶液。称取枇杷叶对照药材1.0 g，同法制成对照药材溶液。称取缺枇杷叶药材阴性样品1.0 g，同法制成阴性对照溶液。按照《中国药典》2015版薄层色谱法(通则0502)试验，以丙酮-甲苯-甲酸(1∶5∶0.2)为展开剂，以硅胶G板为薄层板，供试品溶液、阴性样品溶液、对照药材和对照品溶液点样量分别为10、10、5、5 μL，将4种溶液依次点于同一薄层板，以含10%硫酸的乙醇溶液为显色剂，于紫外光灯(365 nm)下检视。结果在薄层色谱图上，各色谱斑点分离良好且清晰，在供试品色谱中，在与对照药材色及对照品色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点，且枇杷叶阴性对照无干扰，如图1所示。

注：1～3.供试品溶液；4.枇杷叶对照药材溶液；5.熊果酸对照品溶液；6.缺枇杷叶阴性对照品溶液。

图1 枇杷叶TLC色谱图

2.2 麻黄的薄层鉴别[5-7]称取咳速停胶囊内容物1.0 g，加甲醇20 mL，超声15 min，趁热滤过及蒸干，残渣加甲醇4 mL使其完全溶解，制成供试品溶液。精密称取适量盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成浓度为0.1 g·L-1的对照品溶液。称取麻黄对照药材1.0 g，同法制成对照药材溶液。称取缺麻黄药材阴性样品1.0 g，同法制成阴性对照溶液。按照《中国药典》2015版薄层色谱法(通则0502)试验，以正丁醇-甲醇-三氯甲烷-氨水(8∶1∶3∶1)为展开剂，以硅胶G板为薄层板，点样量5 μL，将4种溶液依次点于同一薄层板，以喷茚三酮溶液为显色剂，105 ℃下加热1 min，直接观察。结果在薄层色谱图上，各色谱斑点分离良好且清晰，在供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点，且麻黄阴性对照无干扰，如图2所示。

注：1～3.供试品溶液；4.枇杷叶对照药材溶液；5.熊果酸对照品溶液；6.缺枇杷叶阴性对照品溶液。

图2 麻黄TLC色谱图

2.3 罂粟壳的薄层鉴别[8-10]称取咳速停胶囊内容物10.0 g，加浓氨水10 mL，加乙酸乙酯25 mL，超声30 min，趁热滤过及蒸干，残渣加甲醇2 mL使其完全溶解，制成供试品溶液。精密称取适量吗啡对照品，加甲醇制成浓度为0.1 g·L-1的对照品溶液。称取罂粟壳对照药材1.0 g，同法制成对照药材溶液。称取缺罂粟壳药材阴性样品10.0 g，同法制成阴性对照溶液。按照《中国药典》2015版薄层色谱法(通则0502)试验，以丙酮-95%乙醇-甲苯-氨水(10∶3∶15∶1)为展开剂，以硅胶G板为薄层板，点样量10 μL，将4种溶液依次点于同一薄层板，以喷稀碘化铋钾溶液为显色剂，直接观察。结果在薄层色谱图上，各色谱斑点分离良好且清晰，在供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点，且罂粟壳阴性对照无干扰，如图3所示。

2.4 百尾参的薄层鉴别[11]称取咳速停胶囊内容物10.0 g，百尾参药材1.0 g以及缺百尾参药材样品10.0 g，按“罂粟壳薄层鉴别”项下供试品溶液制备方法，同法分别制成供试品溶液、对照药材溶液以及阴性对照溶液。按照《中国药典》2015版薄层色谱法(通则0502)试验，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(12∶2∶2)为展开剂，以硅胶G板为薄层板，点样量5 μL，将3种溶液依次点于同一薄层板，以三氯化铝溶液为显色剂，于紫外光灯(365 nm)下检视。结果在薄层色谱图上，各色谱斑点分离良好且清晰，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点，且百尾参阴性对照无干扰，如图4所示。

注：1～3.供试品溶液;4.罂粟壳对照药材溶液;5.吗啡对照品溶液;6.缺罂粟壳阴性对照品溶液。

图3 罂粟壳TLC色谱图

注：1～3.供试品溶液;4.罂粟壳对照药材溶液;5.吗啡对照品溶液。

图4 百尾参TLC色谱图

注：1～3.供试品溶液;4.罂粟壳对照药材溶液;5.吗啡对照品溶液。

图5 虎耳草TLC色谱图

2.5 虎耳草的薄层鉴别[12-14]称取咳速停胶囊内容物10.0 g，加80%甲醇溶液50 mL，水浴回流60 min，趁热滤过及蒸干，上述残渣加水20 mL溶解，加乙醚萃取3次，每次20 mL，静置分层，取下层溶液，合并，加盐酸溶液5 mL，水浴回流60 min，迅速放冷置室温，加乙酸乙酯萃取2次，每次25 mL，静置分层，取上层溶液合并蒸干，残渣加甲醇2 mL使其完全溶解，制成供试品溶液。称取虎耳草药材4.0 g，制成对照药材溶液。称取缺虎耳草药材阴性样品10.0 g，制成阴性对照溶液。按照《中国药典》2015版薄层色谱法(通则0502)试验，以甲苯-甲酸-乙酸乙酯(10∶1∶2)为展开剂，以硅胶G板为薄层板，点样量10 μL，将3种溶液依次点于同一薄层板，于紫外光灯(365 nm)下检视。结果在薄层色谱图上，各色谱斑点分离良好且清晰，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点，且虎耳草阴性对照无干扰，如图5所示。

3 讨论

本实验在建立黄精药材薄层鉴别方法时发现2味药材(黄精、桔梗)同时含有的有效成分均为多糖类，相互之间干扰较大，未能建立黄精药材的专属性薄层鉴别法。本实验在寻找百尾参药材合适的展开体系时，发现使用虎耳草的展开体系时有专属性的色谱斑点，通过阴性样品的排查、提取方法的优化以及展开体系比例的调节，最终确定百尾参的展开体系为甲苯-乙酸乙酯-甲酸(12∶2∶2)，同时对显色剂磷钼酸、硫酸乙醇、三氯化铝进行比较考察，结果显示喷以三氯化铝溶液可找到百尾参药材的专属性斑点。

目前黄精、麻黄、枇杷叶、罂粟壳均已被收载于《中国药典》2015版一部，而虎耳草及百尾参均被收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》[13]2003版。本实验通过参考标准及文献资料，同时优化各提取溶剂、提取方法、提取时间以及展开体系、显色剂，从而找到适合各药材的专属性薄层鉴别法，并对各建立的方法分别进行方法学耐用性考察(薄层板、温度、湿度)，结果表明不同的薄层板、温度、湿度对所建立的方法均无影响，且所建立的方法分别在不同薄层板下以及5～40 ℃、20%～80%温湿度范围内，各色谱斑点均清晰，分离度良好且阴性均无干扰。因此本实验所建方法可适用于咳速停胶囊中5味药材的专属性鉴别，同时为其提升质量控制基础提供参考依据。此外，本文同时弥补了百尾参薄层鉴别项空白。

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TLC identification of five Chinese medicinal herbs of kesuting capsules

LUO Yi1,2,HUANG Hongmei3,YAO Wenli1,et al

(1.PharmaceuticalCollege,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang,Guizhou550004,China;2.FoodSection,GuizhouProvincialFoodandDrugInspectionInstitute,Guiyang,Guizhou550004,China;3.PharmaceuticalCollege,GuiyangCollegeofTraditionalChineseMedicine,Guiyang,Guizhou550002,China)

Objective To perfect the TLC identification of the existing quality standard of keshuting capsules,to identify the five Chinese medicinal herbs(loquat leaf,herba ephedrae,pericarpium papavers,cynanchum atratum ,saxifraga stolonifera) by TLC.Methods TLC was adopted for the respective identifications of the five Chinese medicinal herbs.Results The method had a strong specificity.The TLC spots were clear with good separation.The blank test showed no interference.Conclusion The method built can be used for the TLC identification of the five Chinese medicinal herbs of kesuting capsules.

Kesuting capsules;Platycodon root;Herba ephedrae;Pericarpium papavers;Disporum cantoniense;Saxifraga stolonifera;TLC identification

国家药典委员会2015年度药品标准提高工作(项目编号87)

茅向军，男，主任药师，硕士生导师，研究方向：药物质量控制技术，E-mail:1074459931@qq.com

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.11.012

2016-06-30，

2016-08-21)