饲料添加剂叶黄素的测定方法研究

■库丽扎达·木拉提

（新疆兽药饲料监察所，新疆乌鲁木齐 830063）

饲料添加剂叶黄素为黄色至暗黄色的浸膏，常温膏状。叶黄素又名“植物黄体素”，分子式C40H56O2，分子量为568.85，经溶剂萃取等工艺制得的浸膏，主要成分为叶黄素及其同分异构玉米黄质，本产品主要成分叶黄素作为饲料添加剂和着色剂添加到肉鸡、蛋鸡、鸭、鱼饲料中，可使动物皮肤脂肪变黄，蛋心变红，使商品肉蛋品质提升，营养增加。本试验利用紫外分光光度法测定饲料中的叶黄素的含量。

1 试验方法

1.1 产品性状

叶黄素为深棕色黏稠浸膏，常温下流动易溶于正己烷，不溶于水。

1.2 试验试剂和溶液

正己烷(分析纯)、甲醇(分析纯)、无水乙醇(分析纯)、丙酮(分析纯)、甲苯(分析纯)、萃取剂 HEAT(正己烷+无水乙醇+丙酮+甲苯=10∶6∶7∶7)、40%氢氧化钾-甲醇溶液(称取分析纯氢氧化钾40 g于250 ml烧杯中，加15 ml纯净水迅速用玻璃棒搅拌溶解后，加入分析纯甲醇50 ml，搅拌至澄清，移入100 ml容量瓶中，用分析纯甲醇定容，摇匀静置待用)、10%硫酸钠水溶液(称取无水硫酸钠100 g于100 ml烧杯中，加纯净水溶解后移入100 ml容量瓶中，用纯净水定容至刻度)。

1.3 仪器设备

实验室常用设备、超声波清洗器、紫外分光光度计、石英比色皿（1 cm）。

1.4 鉴别试验

取试验溶液。用分光光度计测定。以1 cm石英比色皿在420～480 nm波长范围内测定试样溶液的吸收光谱，应在（445±1）nm、（473±1）nm的波长处有最大吸收峰。

1.5 叶黄素含量测定

1.5.1 叶黄素含量计算

叶黄素在波长(445±1)nm、(473±1)nm处有最大吸收峰，可根据该波长处测定吸收度，计算其含量。

1.5.2 试样溶液的制备

称取约0.5 g试样（精确至0.000 1 g）加入50 ml容量瓶中，加入25 ml左右HEAT至超声波清洗剂中超声约2 min，至试样完全溶解；加HEAT定容，摇匀，移取5 ml稀溶液于100 ml容量瓶中，加入25 ml HEAT，轻摇溶解。移取2 ml 40%氢氧化钾-甲醇溶液至容量瓶中，加盖轻摇约1 min（误差5 s）。空气冷凝管加盖后置（56±1）℃水浴上加热皂化20 min（误差10 s）；皂化完成后，立即将容量瓶取出于冷水中冷却10 min，保证液温降至室温。向容量瓶中准确加入30 ml正己烷溶剂，轻摇1 min（误差5 s），用10%硫酸钠水溶液定容。用200次/min的强度猛烈振摇2 min（误差10 s），之后将容量瓶置于避光处1 h；移取上层液2 ml至150 ml容量瓶中，正己烷溶剂定容。

1.5.3 试样的测定

将试样分析液（1.5.2）置于1㎝石英池中，用紫外分光光度计在波长(473±1)nm处测定吸收度A，以正己烷做空白对照。

1.5.4 计算和结果

X=2.118 64×A473×K/M。

式中：X——试样中叶黄素（C40H56O2）含量的质量分数（g/kg）；

K——样品上清液稀释倍数；

M——样品质量(g)；

A473——吸光度。

1.6 叶黄素含量测定准确度试验

准确称取5份试样按1.5.2进行试样溶液制备在473 nm测定吸光度将样品吸光度按1.5.4进行计算，结果见表1。

1.7 叶黄素含量测定精密度试验

取测定准确度试验的溶液按上法连续进样6次并将样品吸光度按1.5.4进行计算，结果见表2。

表1 试样的测定结果

表2 精密度试验的测定结果

2 结论

用该方法测定饲料添加剂叶黄素含量，标示含量为150 g/kg，经测定5个样品含量平均值为152.25 g/kg，RSD=1.4%,表明该样品准确度好；同一样品平行测定6次结果为152.98 g/kg，RSD=0.3%，表明该样品精密度良好。饲料添加剂叶黄素经过准确度试验、精密度试验测定结果RSD均在规定的范围内，且有较好的准确度与精密度。该方法合理、操作便捷，适合饲料添加剂叶黄素浸膏的检测。