内皮祖细胞亚群与颅内外脑动脉粥样硬化症严重程度的相关性研究

杨银洁

内皮祖细胞亚群与颅内外脑动脉粥样硬化症严重程度的相关性研究

杨银洁

目的：探讨内皮祖细胞（EPCs）亚群与脑动脉粥样硬化症严重程度的相关性。方法：全脑血管造影受试者64例，无脑动脉狭窄26例为对照组，存在脑动脉狭窄38例为观察组，其中颅外动脉狭窄（EAS）18例，颅内动脉狭窄（IAS）15例，混合狭窄（Mixed-type）5例。运用流式细胞仪行血管EPCs定量分析，观察CD45-/dimCD34+CD309+、CD45-/dimCD133+CD309+与CD45-/dimCD34+CD133+CD309+水平，分析其与脑动脉粥样硬化严重程度的关系。结果：对照组CD34+CD309+，CD133+CD309+与CD34+CD133+CD309+均显著高于观察组的EAS、IAS、Mixed-type（P＜0.05）；IAS患者CD45-/dimCD133+CD309+明显高于EAS、Mixed-type患者（P＜0.05）；EPCs水平与脑动脉粥样硬化严重程度存在相关性（P＜0.05）；EPCs水平与EAS、Mixed-type有相关性（P＜0.05）。结论：EPCs亚群与EAS、Mixed-type严重程度可能相关，但与IAS无相关性。

内皮祖细胞亚群；脑动脉粥样硬化；相关性

目前认为在动脉粥样硬化病变进程中，内皮功能障碍致使内皮细胞缺失是早期表现，血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）在维护血管内皮功能及帮助血管内皮损伤修复中发挥了重要作用[1]。内皮祖细胞能够归巢到受损的内皮细胞，并可分化、替换受损及成熟的内皮细胞，对抗动脉粥样硬化[2]。本研究通过对EPCs水平与脑动脉粥样硬化严重程度的相关性的探讨，了解EPCs水平是否能够作为脑动脉粥样硬化严重程度的判断指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2014年1月至2014年12月我院神经内科接诊的全脑血管造影者64例。其中无脑动脉狭窄26例纳入对照组，男16例，女10例，平均年龄（59.1±8.1）岁，弗雷明汉总体风险评分（Framingham，FRS）为（7.1±7.5）分；存在脑动脉狭窄38例纳入观察组，男27例，女11例，平均年龄（61.6±10.8）岁，FRS为（12.7±4.1）分；其中颅外动脉狭窄（extracranial artery stenosis，EAS）18例，颅内动脉狭窄（intracranial atherosclerotic stenosis，IAS）15例，混合狭窄（Mixed-type）5例。2组年龄、性别、FRS评分差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经本院伦理委员会审批同意，受试者均自愿签订知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 EPCs定量分析 行DSA造影前，取受试者外周血5 mL，置于含有EDTA的试管内，送至到我院流式细胞实验室检测。取200 μL血液样品，加入抗体室温孵育30 min；取2.5 ml 1×裂解缓冲液加入样品，裂解10 min，FACS缓冲液连续清洗2次。取样品置于流式细胞仪（贝克曼库尔特，CytoFLEX）检测，上样量为107个细胞，采用配套软件完成分析。

EPCs为低表达CD45，并经由VEGFR2（CD309）与CD34或CD133的共表达对其进行鉴定。为此，在CD45弱表达的门选择细胞群体进行了CD133（CD45-/dimCD133+CD309+）或CD34与CD309（CD45-/dimCD34+CD309+）共表达细胞数进行测定。EPCs亚群的水平均表示每107事件细胞百分比。所有测量均在不了解临床数据的情况下，由操作者独立完成。

1.2.2 脑动脉粥样硬化负荷评估 所有患者行DSA造影检查，动脉病变的位置主要分为颅外病变、颅内病变或混合病变。根据北美症状性颈动脉内膜切除术试验（NASCET）计算颅外动脉狭窄；根据WASID方法来衡量颅内动脉狭窄。根据脑动脉狭窄程度及病变数量对脑动脉粥样硬化狭窄负荷进行评估。评分标准[3]：2分（狭窄100%），1分（狭窄50%～99%），0分（狭窄＜50%）。若出现1个动脉段存在多个病灶的情况，则以狭窄程度最严重的病灶评分结果为准。同时对狭窄≥50%的动脉段数量进行计算。在脑动脉粥样硬化负荷评估中由2名医师同时进行，评估结果一致的情况，经讨论后确定。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 脑动脉粥样硬化不同部位EPCs水平比较

对照组与观察组中EAS、IAS、Mixed-type不同部位 EPCs水平比较，其 CD45-/dimCD34+CD309+、CD45-/dimCD133+CD309+与 CD45-/dimCD34+CD133+CD309+均更高（P＜0.05）；IAS与EAS、Mixed-type EPCs水平比较，其CD45-/dimCD133+CD309+明显更高（P＜0.05）；但CD45-/dimCD34+CD309+、CD45-/dimCD34+CD133+CD309+差异无统计学意义（P＞0.05）；EAS与Mixedtype EPCs水平差异均无统计学意义（P＞0.05），见图1。

2.2 脑动脉粥样硬化与EPCs的关系

校正混杂因素，行二元逻辑回归分析，根据结果显示，EPCs水平与脑动脉粥样硬化严重程度存在相关性（P＜0.05），见表1。

表1 脑动脉粥样硬化与EPCs的关系

2.3 EPCs水平与不同血管部位动脉硬化负荷的关系

通过多因素Logistic回归模型结果显示，EPCs与IAS无相关性（P＞0.05）；EPCs水平与EAS、Mixed-type有相关性（P＜0.05），见表2。

3 讨论

本研究结果显示，脑动脉粥样硬化负荷与EPCs水平之间密切相关。EPCs是Mixed-type和EAS的危险因素之一，与IAS之间无相关性。此外，本研究还发现，38例患者中，EAS占47.37%，IAS占39.47%，Mixed-type占13.16%。EAS比例较多，可能的因素：动脉硬化危险因素可能会对分布造成较大的影响；生活方式的转变也使得各种风险因素发生变化[4]；不同的研究所选取的病例特征有所差异[5]。

大量研究报道证实[6]，在对各种传统心脏危险因素进行有效控制后，EPCs水平仍然是预测脑动脉粥样硬化的独立指标。最近有报道证实[7]，在人体中存在着由EPCs介导的新的内源性血管修复机制。而EPCs的骨髓主要来自多能成体干细胞，主要为3个不同的亚群，分别为：CD34+133+、CD34+133+CD309+与CD34+CD309+细胞。笔者推测EPCs与脑动脉硬化之间存在相关性，可能是因EPCs减少或内皮功能发生紊乱致使硬化出现及发展，但尚未找到直接的证据，可以肯定的是当EPCs水平下降时，脑动脉粥样硬化程度逐渐加重。已有观点证实EPCs水平上升可有效提高血管受损后内皮修复能力[8]。以往研究认为致使血管内皮受损后的主要因素是动脉硬化。但近期观点认为[9]，内膜修复失衡和受损是引起动脉硬化的主要原因，EPCs是机体内膜修复能力中的代表。根据本研究结果来看，相较于对照组，EAS、IAS、Mixed-type患者其CD34+133+、CD34+133+CD309+与CD34+CD309+水平均明显更低（P＜0.05）。但多因素Logistic回归模型分析结果显示，EPCs与IAS无相关性（P＞0.05，与EAS、Mixed-type有相关性（P＜0.05）。因此，在脑动脉粥样硬化严重程度的衡量中，EPCs水平可能可作为重要的指标，但是否可用于IAS的衡量，还需做进一步的探讨[10]。

Association of Subtypes of Endothelial Progenitor Cells with the Severity of Cerebral Athero⁃sclerosis

YANG Yin-jie.Department of Neurology,The No.425 Hospital of Sanya,Hainan 572012,China

Objective：To investigate the correlation between subtypes of endothelial progenitor cells(EPCs) and the severity of cerebral atherosclerosis.Methods：A total of 64 patients who had cerebral angiography were enrolled.Out of them,26 patients without cerebral arterial stenosis were treated as controls and compared with 38 cases with cerebral arterial stenosis(the study group).In the study group,there were 18 cases with extracranial arteriostenosis(EAS),15 with intracranial arteriostenosis(IAS)and 5 with mixed-type arteriostenosis(Mixedtype).Quantitative analysis of EPCs was performed by flow cytometry,and the correlation between the levels of CD45-/dimCD34+CD309+,CD45-/dimCD133+CD309+and CD45-/dimCD34+CD133+CD309+and the severity of cerebral atherosclerosis was evaluated.Results：The levels of CD34+CD309+,CD133+CD309+and CD34+CD133+CD309+in the control group were significantly higher than those in the EAS,IAS and Mixed-type groups(P＜0.05).The level of CD45-/dimCD133+CD309+was significantly higher in patients with IAS than those in the EAS and Mixedtype groups(P＜0.05).Binary Logistic regression analysis showed a correlation between the level of EPCs and the severity of cerebral atherosclerosis(P＜0.05).Multi-factorial logistic regression analysis showed a correlation between the level of EPCs and Mixed-type and EAS(P＜0.05).Conclusion：The subtypes of EPCs may be closely associated with the severity of Mixed-type and EAS,but not IAS.

endothelial progenitor cell subtypes；cerebral atherosclerosis；correlation

R741；R741.1

ADOI10.16780/j.cnki.sjssgncj.2016.05.004

三亚市第425医院神经内科海南 三亚 572012

2015-12-03

杨银洁1650460042@qq. com