乙酰甲喹纳米乳的制备及性状考察

朱术会 宿志民 孙新堂 王加才 （山东畜牧兽医职业学院 山东 潍坊 261061）

试验研究

乙酰甲喹纳米乳的制备及性状考察

朱术会 宿志民 孙新堂 王加才 （山东畜牧兽医职业学院 山东 潍坊 261061）

为方便乙酰甲喹的临床使用，提高乙酰甲喹的生物利用度，本实验使用油相、表面活性剂、助表面活性剂和水制备了乙酰甲喹纳米乳。结果显示，乙酰甲喹纳米乳为黄色澄明液体，粒径区间在30～50nm，在稀释试验和高速离心试验及长期放置条件下，未见乳液分层、破乳和药物析出现象，稳定性较好。

乙酰甲喹 表面活性剂 纳米乳 生物利用度

乙酰甲喹(Mequindox)又名痢菌净[1]，为广谱抗菌药，对革兰氏阴性菌作用强于阳性菌，对密螺旋体作用较强，对仔猪黄痢、白痢、犊牛腹泻，副伤寒、禽巴氏杆菌、雏鸡白痢、鸡大肠杆菌均有效，主用于密螺旋体所致猪痢疾及细菌性肠炎[2]。在临床使用过程中发现禽类对该药物较为敏感，尤其是雏鸡如果不按要求使用，随意加大剂量或长期使用则会引起急性和蓄积中毒[3]。水溶性差是影响乙酰甲喹制剂发展和临床应用的一个关键因素[4,5]。目前，临床中常用的乙酰甲喹型主要有注射剂、粉剂和溶液剂等。由于水溶性低，使其粉剂和溶液剂在动物口服给药中的应 用和疗效受到了很大限制，而其注射剂在使用时需多次重复给药，对动物应激大，且注射给药也增加了集约化养殖场的劳动量，增加了饲养管理成本等。因此，研制新剂型对其临床用药具有重要的生产意义。

纳米乳液(nanoemulsion)又称微乳液(microemulsion)，是由水相、油相、表面活性剂和助表面活性剂组成的透明或半透明的均相分散体系，粒径一般为1～100nm，具有热力学稳定性，可分为水包油(O/W)、油包水(W/O)以及双连续(B.C)三种纳米乳类型[6]。目前，纳米乳化技术已渗透到医药、石油化工、食品及生物技术等领域。纳米乳作为一种药物载体具有缓释和靶向作用，提高药物载样量，减少药物体内的酶解，同时降低药液的黏度低，减少注射时的疼痛，还可以提高药物的生物利用度[7]。纳米乳制备大致可分为机械法和物理化学法两大类。由于纳米乳剂是非平衡体系，因此其形成过程中就需要外加能量，能量一般来自化学制剂的结构潜能或者是来自机械设备的能力[8,9]。其中利用机械设备的能量，例如采用高压均质机、高速搅拌器和超声波发生器等这类方法被称作为高能乳化法；而利用结构中的化学潜能的方法则通常被认为是低能乳化法或浓缩法，通常这种方法需要添加表面活性剂或助表面活性剂[10,11]。

本研究从提高乙酰甲喹的生物利用度，减少其毒副作用，方便临床使用为目的，采用低能乳化法，使用油相、表面活性剂、助表面活性剂和水制备乙酰甲喹纳米乳，并对其性状进行考察。

1 材料与方法

1.1 材料 乙酰甲喹原料药(潍坊亚康药业有限公司)、电子天平(上海永琪仪器设备有限公司)、MYP11-2数显恒温磁力搅拌器(上海梅颖仪器有限公司)、透射电镜粒径分析仪(中国药科大学分析测试中心)、万用电烤炉(上海永琪仪器设备有限公司)、酸度计(PHS-3C，上海越磁电子科技有限公司)、紫外可见分光光度计(Gold$53，上海华岩仪器设备有限公司)。

1.2 主要试剂 肉豆寇酸异丙酯(化学纯，国药集团化学试剂有限公司)、吐温-80(tween-80，AR，天津大茂化学试剂厂)、聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油(RH240，AR，国药集团化学试剂有限公司)、无水乙醇(AR，国药集团化学试剂有限公司)、PVP—K30(博爱新开源制药股份有限公司)、PBS(PH=7．0)、痢菌净(注射级，山东天宇生物科技有限公司)、甲醇、二甲基甲酰胺(AR，天津大茂化学试剂有限公司)、盐酸(AR，深圳市腾龙源实业有限公司)。

2 制备方法及工艺优化

2.1 乙酰甲喹纳米乳制备 分别以吐温-80、RH240为表面活性剂，无水乙醇、丙二醇为助表面活性剂，乙酸乙酯，肉豆寇酸异丙酯为油相。称取乙酰甲喹用一定量的油相搅拌溶解完全，依次加入表面活性剂、助表面活性剂各组分，混合搅拌均匀，然后慢慢滴加蒸馏水并不断搅拌，观察体系由浑浊变为澄清时停止加水，此时体系即为纳米乳溶液。

2.2 工艺优化 采用单因素考察法，依次分别对油相、表面活性剂和助表面活性剂进行考察，分别固定其中一项来考察体系中的其他成分对纳米乳体系形成的影响，选择最优的制备工艺路线。

3 纳米乳性质考察

3.1 纳米乳鉴别 取制备好的透明的纳米乳，以6000r/min离心40min，观察乳液是否分层或是否变浑浊。如果离心之后乳液仍保持透明则可以判定为纳米乳。如若出现沉淀或混浊现象则说明为非纳米乳。

3.2 纳米乳粒径分析 用透射电镜检测纳米乳的形态，取乙酰甲喹纳米乳适量，用蒸馏水稀释后滴在覆有支持膜的铜网上，静置后用滤纸片吸干，滴加磷钨酸溶液于铜网上负染，自然挥干，在电镜下观察纳米乳液滴的形态及测定其粒径大小。

3.3 纳米乳稀释考察 取本试验制备的纳米乳分别进行10倍、100倍、1000倍和10000倍稀释，观察有无沉淀和破乳现象产生。

3.4 纳米乳稳定性考察 取本研究制取的纳米乳放置室温条件下，分别于0、1、2、3、4、5、6个月时抽取一定量进行外观检查有无沉淀混浊现象。

4 试验结果

4.1 制备乙酰甲喹纳米乳油相、表面活性剂和助表面活性剂的优化结果 本试验采用的低能乳化法制备了乙酰甲喹纳米乳，该纳米乳为黄色澄明溶液(见图1)，在制备过程中油相具有溶解药物的作用，表面活性剂和助表面活性剂能够大幅度降低水的表面张力，有助于纳米乳的形成。为了确保制备工艺稳定，本试验分别对油相、表面活性剂和助表面活性剂的使用进行了优化，工艺优化详细见表1，从优化结果来看本试验制备的纳米乳的最佳油相、表面活性剂和助表面活性剂搭配分别为乙酸乙酯、吐温-80和丙二醇；肉豆寇酸异丙酯、吐温-80和丙二醇。

图1 a空白微乳，b乙酰甲喹纳米乳

表1 乙酰甲喹纳米乳油相、表面活性剂和助表面活性剂优化

4.2 纳米乳性质考察结果 （1）分别取以油相、表面活性剂和助表面活性剂搭配分别为乙酸乙酯、吐温-80、丙二醇和肉豆寇酸异丙酯、吐温-80、丙二醇制备的纳米乳，以6000r/min离心40min后观察，结果显示纳米乳无沉淀产生，颜色无变化，整个体系仍然为黄色澄清溶液，这说明本实验形成的纳米乳为均一稳定的分散体，符合纳米乳制剂。（2）将乙酰甲喹纳米乳用蒸馏水稀释后滴在覆有支持膜的铜网上，静置后用滤纸片吸干，滴加磷钨酸溶液于铜网上负染，自然挥干，在电镜下观察纳米乳并测定纳米乳的粒径，结果显示本实验制备的纳米乳粒径分布均一，粒径分布在30～50nm，平均为40nm，电镜观察如图2所示。

图2 痢菌净纳米乳透射电镜观察

取本试验制备的纳米乳用水进行10倍、100倍、1000倍和10000倍稀释，结果显示纳米乳无沉淀产生，能够与水互溶无破乳药物析出现象。在纳米乳放置室温条件下(25℃)，分别于0、1、2、3、4、5、6个月时抽取一定量进行外观检查发现本试验制备的纳米乳无沉淀，无混浊现象，外观无明显差异。这说明本试验制备的纳米乳具有较好的稳定性，可以再常温下长时间放置。

5 结论

本试验采用的低能乳化法制备了乙酰甲喹纳米乳并对油相、表面活性剂和助表面活性剂搭配进行了优化。纳米乳经过电镜粒径分析显示，纳米乳粒径分布30～50nm，平均粒径在40nm，经过稀释和稳定性考察显示本研究制备的纳米乳能够用水稀释，长时间放置无破乳、沉淀和药物析出现象，这说明本试验制备的乙酰甲喹纳米乳性质稳定，符合纳米乳的范畴，这为拓展乙酰甲喹临床使用提供了新的剂型。

[1] 刘迎春, 高怀涛. 乙酰甲喹的合理应用[J]. 养禽与禽病防治. 2009(3).

[2] Carbonyl Reduction of Mequindox by Chicken and Porcine Cytosol and Cloned Carbonyl Reductase 1; Xianqing Tang, Peiqiang Mu, Jun Wu, Jun Jiang, Caihui Zhang, Ming Zheng, and Yiqun Deng . Drug Metab. Dispos., Apr 2012; 40: 788 - 795.

[3] 宋冶萍, 朱术会, 孙新堂等. 痢菌净对雏鸡的安全性试验[J]. 养禽与禽病防治. 2013(10).

[4] 刘迎春, 丁焕中, 刘义明等. 乙酰甲喹主要代谢物在鸡粪的排泄量研究[J]. 畜牧兽医学报. 2011(1).

[5] 刘桂兰, 夏雪林, 仝玉慧等. 乙酰甲喹性质、毒性与替代药物[J].中国兽药杂志. 2011(8).

[6] 陆彬. 纳米乳与亚微乳给药系统[J]. 中国药师. 2004(10).

[7] 蔡霞, 吕竹芬, 陈燕忠. 纳米乳在透皮给药系统中的应用概况[J].广东药学院学报. 2009(4).

[8] A Novel Surfactant Nanoemulsion with Broad-Spectrum Sporicidal Activity against Bacillus Species, Tarek Hamouda, Michael M. Hayes, Zhengyi Cao, Richard Tonda, Kent Johnson, D. Craig Wright. The Journal of Infectious Disease, Dec 1999; 180: 1939 - 1949.

[9] 崔晶, 翟光喜, 邹满. 微乳给药系统的研究与应用[J]. 食品与药品. 2005(1).

[10] 公雯, 朱家壁. 纳米乳的优化方法与不稳定机制的研究进展[J].中国新药杂志. 2010(12).

[11] Formulation and Characterization of Nanoemulsion of Olanzapine for Intranasal Delivery, Mukesh Kumar, Ambikanandan Misra, and Kamla Pathak, PDA J. Pharm. Sci. Technol., Nov 2009; 63: 501-511.

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