正交设计优选风芍六君子汤的提取工艺

李柏群，刘 骏，陈绍成，彭 腾，黄道秋，薛 梅

（1．重庆三峡中心医院，重庆 404000； 2．重庆市北碚区中医院，重庆 400711；3．重庆第二师范学院，重庆 400067； 4．成都中医药大学，四川 成都 611137）

正交设计优选风芍六君子汤的提取工艺

李柏群1，刘 骏2，陈绍成3，彭 腾4，黄道秋1，薛 梅2

（1．重庆三峡中心医院，重庆 404000； 2．重庆市北碚区中医院，重庆 400711；3．重庆第二师范学院，重庆 400067； 4．成都中医药大学，四川 成都 611137）

目的 优化风芍六君子汤的提取工艺。方法 采用正交设计试验法，考察不同提取工艺制备的风芍六君子汤中芍药苷和橙皮苷的含量及出膏率，并依据试验数据设计最佳提取工艺。结果 最佳提取工艺为加10倍量水，提取2次，每次1 h。结论 优选出的提取工艺简便、经济、提取效率高。

正交设计；风芍六君子汤；芍药苷；橙皮苷；提取工艺

肠易激综合征属中医泄泻、便秘、腹痛、郁证等范畴，为常见的功能性肠道疾病[1]，中医辨证论治具有一定优势。风芍六君子汤是医院临床运用多年的经验方剂，由白芍、白术、陈皮、茯苓、甘草、红参、地锦草、半夏、防风等药组方，对腹泻型肠易激综合征有显著效果。现采用水煎提，以芍药苷、橙皮苷、出膏率为指标对加水量、煎煮时间、煎煮次数3个因素进行考察，用 L9（34）正交表进行工艺优选[2]，以确定最佳提取工艺。

1 仪器与试药

仪器：LC－20AT型高效液相色谱仪（日本岛津公司），DAD检测器；BP121S型电子天平（德国 Sartorius公司）；BUG25－12型超声清洗器（必能信超声有限公司）；Diamonsil钻石C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm）；优普UPT系列超纯水器（成都优普电子产品有限公司）。

试药：芍药苷对照品（批号为110736－200526）、橙皮苷对照品（批号为0721－9909）均购自中国药品生物制品检定所；甲醇（Fisher Scientific）、乙腈、超纯水、磷酸均为分析纯，由成都科龙化工试剂厂提供；白芍（批号为1002055）、白术（批号为 0907034）、红参（批号为0910138）、茯苓（批号为 1003209）、甘草（批号为0905126）、陈皮（批号为 0910010）、半夏（批号为0902003）、地锦草（批号为 0803008）、防风（批号为1006118）9味中药饮片均购于四川新荷花中药饮片股份有限公司，由成都中医药大学中药鉴定教研室龙飞副教授鉴定，均符合2010年版《中国药典（一部）》的要求。

2 方法与结果

2．1 芍药苷、橙皮苷含量测定[3－7]

2．1．1 色谱条件

岛津LC－20AT型高效液相色谱仪，DAD检测器；色谱柱：Diamonsil钻石C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相：乙腈－0．1%磷酸水（20∶80）；流速：1．0m L／min；柱温：35℃；检测波长：230 nm；进样量：10μL。

2．1．2 溶液制备

分别称取芍药苷、橙皮苷适量，精密称定，用甲醇配制成质量浓度分别为0．103 7 g／L和0．019 0 g／L的对照品溶液。称取处方1／10量的药材，按正交设计要求提取9个样品，过滤，取续滤液100mL，于80℃水浴下挥干，减压干燥24 h，取干浸膏约0．5 g，精密称定，加25mL甲醇，称重，超声1 h，取出放干后补重，过滤，精密量取续滤液0．2 mL，用甲醇定容至1 mL容量瓶中，过0．45μm微孔滤膜，作为供试品溶液。按处方分别制备不含白芍和不含陈皮药材的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备成相应的阴性对照品溶液。

2．1．3 方法学考察

专属性试验：取对照品溶液、缺白芍和缺陈皮的阴性对照品溶液及供试品溶液，按拟订色谱条件各进样10μL测定，其色谱图见图 1。结果，阴性对照品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应保留时间处无峰出现，表明该方法专属性较强。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取2．1．2项下芍药苷对照品溶液1，2，6，8，10μL，按拟订色谱条件进样测定。以芍药苷对照品溶液进样量（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得芍药苷回归方程 Y＝1×106X－11 718，r＝0．999 9(n＝5)。同样的方法，橙皮苷对照品溶液进样量为8，12，16，18，20μL，得橙皮苷回归方程Y＝2×106X－24 042，r＝0．999 9(n＝5)。结果表明，芍药苷、橙皮苷进样量分别在 0．103 7～1．037 0μg和 0．152 0～0．380 0μg范围内与各自峰面积线性关系良好。

精密度试验：分别精密吸取2．1．2项下同一对照品溶液10μL，连续进样6次，记录峰面积。结果芍药苷、橙皮苷峰面积的 RSD分别为0．20%和0．22%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一提取方式（加10倍量水，煎煮2次，每次30min）制备的供试品6份，分别按2．1．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样10μL。结果芍药苷平均质量浓度为53．010 8 mg／g，RSD为0．58%（n＝6），橙皮苷平均质量浓度为26．003 5mg／g，RSD为0．58%（n＝6），表明该方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，按拟订色谱条件分别于0，2，4，6，8，10 h时进样10μL测定，记录峰面积。结果芍药苷、橙皮苷峰面积的 RSD分别为0．58%和1．20%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验：取同一提取方式（加10倍量水，煎煮2次，每次30 min，芍药苷、橙皮苷质量浓度分别为53．008 1，25．968 0 mg／g）制备的已测知含量的供试品适量，精密称定，共6份，分别精密加入对照品溶液5 mL及甲醇25 mL，按2．1．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样10μL，测定芍药苷、橙皮苷的含量，计算回收率。结果见表1。

2．1．4 样品含量测定

按2．1．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定。

2．2 浸膏得率测定

精密量取以上续滤液各10mL，置干燥至恒重的蒸发皿中，80℃水浴挥干后，于烘箱105℃干燥3 h，放置干燥器中冷却至室温，立即精密称定，计算出膏率。

2．3 正交试验设计

2．3．1 因素水平确定

该方剂采用水煎提，以芍药苷、橙皮苷、出膏率为指标对加水量（因素A）、煎煮时间（因素B）、煎煮次数（因素C）3个因素进行考察，用 L9（34）正交表进行工艺优选，见表2。

2．3．2 评价标准

该复方制剂中白芍为君药，陈皮为臣药，故按照芍药苷、橙皮苷、出膏率的权重系数分别为0．5，0．3，0．2进行综合加权评分。正交试验结果见表3，方差分析见表4。

2．3．3 结果分析

由表3可见，影响提取效果的各因素作用主次为C＞A＞B，得到的最佳提取工艺为A3B3C3。由表3可见，A，B，C因素均无显著性差异，从生产上节约能源和时间的角度考虑，选定A2B2C2为最佳提取工艺，即加10倍量水，提取2次，每次1 h。

表1 风芍六君子汤提取工艺加样回收试验结果（n＝9）

表2 水煎工艺因素水平设计

2．4 优选工艺验证试验

称取处方量1／10的药材3份，按优选提取工艺条件提取，测定芍药苷、橙皮苷、出膏率，结果见表5。可见，优选工艺稳定、合理、可行。3批样品含量测定结果见表6。

表3 水提提取工艺正交试验结果

表4 正交试验综合评分方差分析

表5 优选工艺验证试验结果

3 讨论

本方的君药为白芍，臣药为陈皮，而2010年版《中国药典（一部）》把芍药苷、橙皮苷分别作为白芍和陈皮质量控制的指标。前期配伍试验显示，在配伍前后，白芍中的芍药苷、陈皮中的橙皮苷与单煎相比，含量明显发生了变化。因此认为，芍药苷和橙皮苷是本方中的特征性成分，可作为提取工艺考察的指标性成分。

表6 风芍六君子汤提取工艺芍药苷、橙皮苷含量测定结果(n＝3)

在流动相的选择中，考察了甲醇－水、乙腈－水、甲醇－磷酸水、乙腈－磷酸水4种，最后选择乙腈－磷酸水作为流动相，分离效果好。

[1]陈文莉．肠易激综合症（IBS）的中医治疗五法[J]．山西中医学院学报，2005，6（2）：23－24．

[2]王永炎，严世芸．实用中医内科学[M]．上海：上海科学技术出版社，2009：109－120．

[3]陈业光．高效液相色谱法测定陈香露百露片中陈皮苷含量[J]．中国药业，2008，17（5）：21－22．

[4]王 建，刘金花，时亚杰．反相高效液相色谱法测定胃灵颗粒中芍药苷含量[J]．中国药业，2015，24（1）：45－46．

[5]杨 玲，杨 浩．高效液相色谱法测定宫炎康颗粒中芍药苷含量[J]．中国药业，2014，23（10）：42－43．

[6]谭 丹，朱 迪，陆 苑，等．益肾养元颗粒中陈皮的鉴别和橙皮苷含量的测定[J]．贵阳医学院学报，2015，40（10）：1 036－1 039．

[7]仇 雪．陈皮中陈皮素和橙皮苷含量测定[J]．亚太传统医药，2015，11（7）：19－20．

Optim ization of Fengshao Liujunzi Decoction Extraction Technology by Orthogonal Design

Li Boqun1，Liu Jun2，Chen Shaocheng3，Peng Teng4，Huang Daoqiu1，Xue Mei2
（1．Chongqing Three Gorges Central Hospital，Chongqing，China 404000； 2．Beibei Traditional Chinese Medical Hospital，Chongqing，China 400711；3．Chongqing Second Normal University，Chongqing，China 400067； 4．Chengdu University of TCM，Chengdu，Sichuan，China 611137）

Ob jective To optimize the extracting technology for Fengshao Liujuzi Decoction．M ethods Orthogonal design method was used to detect the content and the ratio of extraction of peoniflorin，aurantiamarn in Fengshao Liujuzi Decoctionm，and to design the best extracting method according to the results．Resu lts The best extracting method was 10 times of water，decocted for 2 times，and 1 h for each time．Conclusion The optimized extracting method is effective and cheap，easy to operate，and highly efficient．

orthogonal design；Fengshao Liujunzi Decoction；peoniflorin；aurantiamarin；extracting technology

TQ 461；R284．1；R282．71

A

1006－4931(2016)06－0026－04

李柏群（1971－），女，大学本科，副主任中药师，研究方向为中药制剂的开发，（电子信箱）bqlicn＠163．com；陈绍成（1965－），男，硕士研究生，主任药师，研究方向为中药制剂及其标准，本文通讯作者，（电子信箱）csc1966109＠sohu．com。

2015－07－28；

2015－10－23)

重庆市2010年科技攻关项目，项目编号：CSTC，2010AC5095。