兽用止痢散抗炎效果分析

胡冰野，保丹东

（1.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州省生化工程中心，贵州 贵阳 550025）

兽用止痢散抗炎效果分析

胡冰野1，保丹东2

（1.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州省生化工程中心，贵州 贵阳 550025）

为了研究止痢散抗炎的药理学作用，为最终的临床研究提供指导和借鉴意义。采用冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加、二甲苯致小鼠耳廓肿胀、等方法研究止痢散的抗炎作用。二甲苯致小鼠耳廓肿胀结果显示，与空白对照组相比：阳性组耳廓肿胀度极显著降低（P＜0.01），抑制率极显著增高（P＜0.01）；止痢散中、高剂量组耳廓肿胀度显著降低（P＜0.05），抑制率显著增高（P＜0.05）；其他各药物有一定抑制耳廓肿胀的作用，但不明显。冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加结果显示：阳性组抑制率最高为46.45%；止痢散中、高剂量组抑制率分别为6.45%、16.13%，表明止痢散中、高剂量组对毛细血管通透性有一定的抑制性，但作用不明显。结论显示：止痢散具有抗炎作用，抗炎作用明显。

兽用止痢散；消炎；抑制率

多叶勾儿茶，是一种勾儿茶属纲鼠李目双子叶植物，多叶勾儿茶全身可供药用，勾儿茶主要含有多种活性化学物质，有治疗风湿性关节炎、急性慢性气管炎、止咳化痰等功效，具有一定的抗炎作用。地榆，地榆属蔷薇目双子叶植物纲，微寒性，苦味酸涩，中医理论上归肝大肠经，主要含有皂苷，鞣质，黄酮类物质，功能凉血止血解毒敛疮。地偷抗炎作用的有效成分为3，3'，4-三-O-甲基并没食子酸，其抗炎作用明显［1］。乌药，山胡椒属毛茛目山双子叶植物纲，为常用传统中药，是重要的温胃理气止痛药之一，主要含有挥发油，异吡喹酮类生物碱，用于温中散寒，顺气止痛。乌药还具有抗病毒性作用。

动物新兽药止痢散主要组成是多叶勾儿茶辅以地榆、乌药等中草药组合的新复方中药制剂。民间长将三者进行配方使用，用于抗炎的效果是肯定的，但是其抗炎作用与效果只见于民间口头相传，缺乏足够的实验依据与书籍记载，因此本实验以此组方作为实验抗炎对象，通过对兽用止痢散进行抗炎药效学实验研究分析，为临床上广泛运用提供理论基础，同时为中药在抗炎方面提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 SPF级昆明小白鼠，体重20±2 g，购自解放军第三军医大学实验动物中心（动物许可证号：SCXK（渝）2012-0003），在贵州大学贵州省生化工程中心SPF级动物实验室（动物使用许可证号：SYXK（黔）2013-0001）饲养，试验过程中对动物的处理方法符合中华人民共和国科学技术部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见（2006）》的规定。

1.1.2 实验试剂 止痢散原药、多叶勾儿茶、地榆、乌药（均由贵州省农业科学院畜牧兽医研究所提供；）冰醋酸（安徽深蓝医疗科技有限公司）；生理盐水（北京科友佳生物技术有限公司）

1.1.3 药物保存 止痢散高剂量组按止痢散原药100 g +100 mL双蒸水稀释，止痢散中剂量组：按止痢散原药100 g+200 ml双蒸水稀释，止痢散低剂量组按止痢散原药100 g+900 mL双蒸水稀释；止痢散、多叶勾儿茶、地榆、乌药等药物均置于4摄氏度冰箱保存，使用时水浴加热到25摄氏度。

1.1.4 实验仪器 RE-52旋转蒸发器（上海生化仪器厂）；SBH-IIIA循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；电子天平（北京赛多利斯天平仪器厂）；KQ3200电热恒温水浴锅（北京医疗设备厂）；LS-B75立式压力蒸汽灭菌器（江阴滨江医疗设备厂）；DHG-9230A电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；0.5%伊文思兰生理盐水液（广州化学试剂厂，批号20101217）；分光光度计Thermo Multiskan GO全波长酶标仪（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）；打孔器（山东省医学科学院设备站生产）等。

2 实验方法

2.1 毛细血管通透实验

根据参考文献毛细血管实验分组［1-2］，将140只小鼠按随机次数分布表，随机分为7组，每组20只（雌雄各半），设生理盐水空白组、止痢散高、中、低剂量组，多叶勾儿茶+地榆组、多叶勾儿茶+地榆组+乌药组，阿司匹林阳性对照组。除空白对照组给予同体积的生理盐水外，灌胃给药，在正常饲养基础上连续用药5 d，给药体积0.2 mL/10 g。末次给药30 min后，予1%伊文思兰生理盐水溶液10 mL/kg 尾静脉注射后，随即予0.6%醋酸0.2 mL只腹腔注射。20 min后脱颈处死各组小鼠，剪开腹腔，用0.9%氯化钠注射液5 mL 冲洗腹腔数次收集洗涤液。将收集到的洗涤液置于离心机上，以4 000 r/min 离心速度，离心15 min，取上清液，用分光光度计在590 nm处比色测各组吸光度（OD）值［3］。得出吸光度（OD）值后通过计算得出各组小鼠伊文思蓝含量，并计算各组抑制率见图1。

抑制率（%）=（空白对照组伊文思蓝含量-给药组伊文思蓝）/空白对照组伊文思蓝含量×100%

2.2 二甲苯致耳廓肿胀实验

实验分组、给药同消炎实验，用灌胃针灌胃给药，连续用药5 d，给药体重0.02 mL/g，在最后一次给药后的1.2 h用致炎剂二甲苯均匀涂于小鼠右耳正反两面，每只小鼠0.03 mL左耳不涂作为对照［4-6］。40 min后脱臼处死小鼠并沿耳基线剪下左右两片耳朵，用8 mm 的打孔器分别在左右两片耳朵钻取相同部位，置于精密电子天平上称量，计算肿胀度和抑制率［7］。

肿胀度=（右耳质量-左耳质量/左耳质量）

抑制率（%）=［（对照组耳肿胀度-给药组耳肿胀度）/对照组耳肿胀度］×100%

3 结果

3.1 止痢散抗炎作用

3.1.1 止痢散对正常小鼠毛细血管通透性影响 结果如表1所示，与空白组相比阳性组伊文思蓝含量极显著减少（P＜0.01），OD590值显著降低（P＜0.01），止痢散高剂量组伊文思蓝含量显著减少（P＜0.05）。抑制率结果如表2所示，阳性组抑制率最高为46.45%；止痢散中、高剂量组抑制率分别为6.45%、16.13%，这一结果显示止痢散中、高剂量组对毛细血管通透性有一定的抑制性，但不明显。

3.1.2 止痢散对二甲苯致小鼠耳廓肿胀影响 结果如表3所示，与空白对照组相比阳性组耳廓肿胀度极显著降低（P＜0.01），抑制率极显著增高（P＜0.01）；止痢散中高剂量组耳廓肿胀度显著降低（P＜0.05），抑制率显著增高（P＜0.05）；其他各药物有一定抑制耳廓肿胀的作用，但不明显。

图1 伊文思蓝含量与OD值对照标准曲线图

表1 各组小鼠伊文思蓝含量和OD90值比较（n=20，±SE）

表1 各组小鼠伊文思蓝含量和OD90值比较（n=20，±SE）

组别 伊文思蓝含量 OD590值空白组 0.003 10±0.000 47 0.190 377低剂量组 0.003 11±0.000 39 0.206 110中剂量组 0.002 90±0.000 38 0.192 388高剂量组 0.002 60±0.000 45 0.172 021多地组 0.003 44±0.000 43 0.226 615多地乌组 0.002 95±0.000 35 0.195 498

表2 各组小鼠伊文思蓝含量及抑制率比较（n=20，±SE）

表2 各组小鼠伊文思蓝含量及抑制率比较（n=20，±SE）

注：*，**表示 P＜0.05，P＜0.01；△，△△与阳性组比P＜0.05，P＜0.01。

空白组 0.003 10±0.000 47 -阳性组 0.001 66±0.000 6 46.45%低剂量组 0.003 11±0.000 39 5.34%中剂量组 0.002 90±0.000 38 6.45%高剂量组 0.002 60±0.000 45 16.13%多地组 0.003 44±0.000 43 5.78%组别 伊文思蓝含量 抑制率（%）多地乌组 0.002 95±0.000 35 4.84%

表3 各组小鼠耳廓肿胀度比较（n=20，±SE）

表3 各组小鼠耳廓肿胀度比较（n=20，±SE）

注：*，**表示P＜0.05，P＜0.01；△，△△与阳性组比P＜0.05，P＜0.01。

组别 肿胀度（g） 抑制率（%）空白组 0.020 91±0.005 228 -阳性组 0.007 59±0.006 401** 63.70低剂量组 0.020 16±0.004 458 3.59中剂量组 0.018 75±0.003 379* 10.33高剂量组 0.018 09±0.005 974* 13.46多地组 0.019 98±0.004 208 4.45多地乌组 0.020 07±0.004 667 4.02

4 讨论

炎症是机体对于刺激的一种防御反应，表现为红、肿、热、痛和能障碍。实验常用物理、化学刺激法制造炎症动物模型来观察药物的抗炎作用，如外伤、高温、低温、紫外线或二甲苯、角叉菜胶等化学药物致炎［8］。炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应，根据其病程经过可分为急性炎症和慢性炎症。炎症早期由于炎症介质的刺激，血管扩张，血管内皮细胞间隙增大，血管壁通透性增高，炎症局部组织血管内的液体和细胞成分通过血管壁进入组织间质、体腔和黏膜表面，造成组织肿胀。因此，炎性渗出和组织肿胀是急性炎症早期的重要指标。本实验采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀急性炎症模型、冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高观察止痢散的抗炎效果。

影响炎症的因素有很多，炎症反应受到机体不同的影响和调节，不仅和体内细胞因子有关，还与机体所处的外界环境有关，在大量的抗炎实验中，通过观察二甲苯致小鼠耳廓肿胀急性炎症模型、冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高来判断实验药物的抗炎作用是一个比较可靠的方法。

因此，在本组实验的对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响以生理盐水为空白对照药、对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀模型中，以阿司匹林作为阳性对照药。目前阿司匹林是使用最为广泛的镇痛抗炎药。

本实验通过对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响和对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响实验来研究观察止痢散的抗炎作用［9］，结果表明，止痢散有一定的抗炎作用，但抗炎作用不显著。

［1］韦健全，罗莹，黄健，等.穿破石抗炎镇痛活性观察及最大给药量测定［J］.中成药，2011，（9）.

［2］张明发，沈雅琴.小檗碱的消炎镇痛作用［J］.天然产物研究与开发，1990.

［3］李效振，贾书红，张东升，等.中药复方宫炎净不同溶剂提取物对小鼠耳廓肿胀及毛细血管通透性的影响［J］.西北农业学报，2014，（2）.

［4］杨桂明，艾丹.白鲜皮抗炎有效部位的研究［J］.时珍国医国药，2010，（9）.

［5］鄂裘恺，谢焕松，周鸣鸣.芹菜素镇痛消炎作用研究［J］.辽宁中医药大学学报，2008，（10）：145-146.

［6］张颖，张立木，李同德，等.紫荆叶与紫荆皮消炎镇痛作用比较［J］.中国医院药学杂志，2011，（31）.

［7］李效振，贾书红，张东升，等.谷新利中药复方宫炎净不同溶剂提取物对小鼠耳廓肿胀及毛细血管通透性的影响［J］.西北农业大学报，2014，（23）.

［8］冯洁，周劲帆，覃富景，等.两面针根和茎抗炎镇痛不同部位活性比较研究［J］.中药药理与临床2011，（6）.

［9］杨何，蒋秀全.兽用止痢、止泻中草药新制剂的药理试验［J］.中兽医学杂志，2014，（10）.

（编辑：张淑凤）

R725.1

B

1006-799X（2016）10-0084-02

胡冰野（1993-），男，贵州正安人，本科在读，主要研究方向为动物医学。

贵州省重大专项（黔科合重大专项字［2013］6014）。