黄连与不同药物配伍对生物碱溶出率的影响

呼梅，宋英，谈静，林智

·炮制制剂·

黄连与不同药物配伍对生物碱溶出率的影响

呼梅，宋英，谈静，林智

目的：考察糖郁舒颗粒中黄连与不同药物配伍对生物碱溶出率的影响。方法：将处方中药材分别与黄连配伍，每组药材加水煎煮，用高效液相色谱法测定水煎液中小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀四种生物碱总含量。结果：黄连单独提取所测得四种生物碱总含量最高，其它依次是黄连与陈皮；黄连与茯苓；黄连与酸枣仁；黄连与柏子仁；黄连与石菖蒲；黄连与竹茹；黄连与川芎；黄连与甘草；黄连与枳实；黄连与鸡血藤；黄连与首乌藤。结论：处方中其它药材均对黄连生物碱溶出率都有一定影响，其中藤本类药材对生物碱溶出率影响最大。

黄连；生物碱；糖郁舒颗粒

糖郁舒颗粒是四川省中医院研发的院内制剂，由黄连、枳实、川芎、首乌藤等十二味药物组成，具有清热化痰，开窍安神的功效。用于痰热上扰的抑郁、焦虑、失眠、眩晕等症及糖尿病并发上述症的治疗。黄连为方中君药，主要含小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马丁等多种生物碱[1]。预实验中按拟订工艺路线，制成合剂，药液澄清度差，放置后易产生沉淀，经测定指标成分四种生物碱总含量较低，约为28 %。考虑复方配伍对黄连有效成分的溶出有影响，将方中药物拆分成12组分，各组分用高效液相色谱法[2～4]测定小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀四种生物碱总含量进行比较研究，为制订合理的提取工艺及剂型提供参考。

1 仪器与试药

美国Agilent1100HPLC色谱仪，惠普化学工作站，DAD检测器；电子分析天平（SARTΟRIUS Bp211D）；乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为重蒸馏水；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检验，纯度：86.8 %，批号：110713-200911）。

2 试验方法

2.1 色谱条件

色谱柱：依利特Hypersil BDS（4.6 mm×150 mm，5 µm），以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为A∶B（93:7） [A为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（50:50）（每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4 g，再以磷酸调节PH值为4.0）；B为水]；检测波长345 nm；柱温：30 ℃；理论板数盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；进样量：5 μL。

2.2 对照品溶液制备

精密称定盐酸小檗碱对照品10.74 mg（纯度为86.8 %），置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（0.3729 mg．mL-1）。

2.3 药材供试液的制备

取黄连饮片粉末（过二号筛）约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1:100）的混合溶液50 mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过（0.45 µm），取续滤液，即得。

2.4 供试品溶液的制备

按原处方中各味药的比例，准确称取黄连4.00 g（12份）、陈皮8.96 g、枳实9.00 g、川芎9.02 g、石菖蒲9.00 g、柏子仁9.99 g、酸枣仁12.01 g、甘草3.00 g、竹茹9.01 g、茯苓9.97 g、首乌藤15.03 g、鸡血藤15.12 g。其中黄连一份单独煎煮，余下11份分别与剩余11味饮片配对煎煮，每组药材煎煮2 次，每次加10倍量水，每次1 小时，滤过，合并滤液，浓缩至100 mL，静置放冷后，观察产生沉淀现象，并将各组药液离心，分别取上清液1 mL于10 mL量瓶中，加盐酸-甲醇（1:100）溶液至刻度，混匀，微孔滤膜（0.45 µm）滤过，取续滤液为供试品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.5 标准曲线的绘制

精密量取盐酸小檗碱对照品溶液（0.7649 mg．mL-1）0.1 mL置20 mL量瓶中，精密量取1 mL、2 mL、5 mL、10 mL分别置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，精密吸取各对照品溶液5 µl进样，以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，得回归方程：Y=2165.6X-2.8153，r=1.0000。结果表明，盐酸小檗碱在0.01912 ug～3.825 ug范围内，有良好的线性关系。盐酸小檗碱HPLC图，见图1。

3 试验结果

精密吸取各供试品溶液、盐酸小檗碱对照品溶液各5 ul，注入高效液相色谱仪，测定，记录峰面积，采用外标一点法，以盐酸小檗碱对照品的峰面积为对照，计算四种生物碱总含量。黄连饮片的四种生物碱总含量为99.58 mg．g-1，12 份样品经测定，四种生物碱溶出率结果见表1、图1。

表1 12份混合溶液沉淀现象和四种生物碱总含量测定结果(n=3)

4 讨论

实验表明，首乌藤、鸡血藤、枳实对黄连生物碱的溶出影响较大，仅为单独水煎液溶出率的6%～7%，参考相关文献[5～6]，推测可能是藤本类、果实中鞣质等成分与生物碱反应，产生沉淀，影响了黄连生物碱的溶出率。本实验甘草对黄连生物碱的溶出率影响没有鞣质类药材影响大，与文献报道[7]甘草的酸性成分对黄连生物碱的溶出影响较大不符，可能是糖郁舒颗粒中甘草用量小，这与临床实际应用情况吻合。该制剂采用黄连单独水煎，浓缩浸膏与其它药材提取浸膏混合制颗粒，成品黄连四种生物碱总量的溶出率为69%，高于混合水煎合剂的28%。

本实验还用盐酸-甲醇（1:100）溶液作为溶媒，测定了乌藤、鸡血藤、枳实与黄连水煎液中沉淀物的生物碱含量，未测得。有文献报道[8]葛根芩连汤水煎液沉淀物在人工胃液中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的含量与上清液的含量相当，沉淀物中药根碱的含量明显大于上清液。这可能是黄连与不同物质形成的生物碱沉淀复合物的溶解性和可逆性不同，这需要作进一步的研究。

[1]高学敏主编,中药学[M].中国中医药出版社,2007:97-99.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:285～286

[3] 王知青,尹华,许丛辉,等. 高效液相色谱法测定三黄散瘀巴布剂中盐酸小檗碱的含量[J]. 中华中医药杂志,2011,11:2690-2692.

[4] 邓六勤,钟鸣. RP-HPLC法测定黄连上清片中盐酸小檗碱、盐酸药根碱和盐酸巴马汀的含量[J]. 中国药房,2011,16:1514-1516.

[5] 徐嘉,杨铭,严蓓华,等.清胃散君药黄连分煎合煎对盐酸小璧碱和黄芬昔含量的影响[J]. 中国临床药学杂志, 2012,21(2):112-114

[6] 梁光义,高言明,贺祝英,等.三黄泻心汤合煎与分煎样品中盐酸小檗碱含量比较研究时珍国医国药[J]. 2011,22(4):86-787

[7] 郑亚玉,梁光义,钟正灵,等.当归六黄汤分煎样品与合煎样品中阿魏酸、盐酸小檗碱、黄芩苷含量的比较[J].时珍国医国药. 2010, 21(1) : 16.

[8] 郭友立(导师：谭晓梅).葛根芩连汤沉淀物溶出度及盐酸小檗碱、葛根素配伍肠吸收变化的研究[D].广州:南方医科大学,2010.

（责任编辑：傅舒）

Impacts of combination of Huanglian with different herbs on alkaloid dissolution rate

HU Mei, SONG Ying, TAN Jing, LIN Zhi// (Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine , Chengdu 610072, Sichuan)

Objective: To study the impacts of combination of Huanglian with different herbs in Tangyushu Granule on alkaloids dissolution rate. Method: The herb in Tangyushu Granule was combined respectively with Huanglian and decocted. Then the total content of berberine, epiberberine, coptisine and palmatine in decoction was measured with high performance liquid chromatography. Result: The total content of four alkaloids was highest in Huanglian decoction, followed by Huanglian with Chenpi, Huanglian with Fuling, Huanglian with Suanzaoren, Huanglian with Boziren, Huanglian with Shichangpu, Huanglian with Zhuru, Huanglian with Chuanxiong, Huanglian with Gancao, Huanglian with Zhishi, Huanglian with Jixueteng, and Huanglian with Shouwuteng. Conclusion: All the other herbs in the prescription affect the alkaloid dissolution rate of Huanglian. Among them, herbs belong to vine plants exert the most influence.

Huanglian; alkaloid; Tangyushu granule

R283.3

A

1674-926X(2016)04-004-02

四川省科技厅支撑计划项目（2012SZ0188）

成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072

呼梅（1969年12月），女，硕士，研究方向为中药制剂、临床药学。

Tel:18980660650 Email:humei1222@sina.com

2015-10-13