CIK治疗恶性肿瘤的疗效及相关肿瘤标志物的变化

刘 冰, 佟 瑞, 刘建瑞, 申方臣, 洪月光, 李光哲, 韩 冰

(河北省秦皇岛市中医医院, 河北 秦皇岛, 066000)



CIK治疗恶性肿瘤的疗效及相关肿瘤标志物的变化

刘 冰, 佟 瑞, 刘建瑞, 申方臣, 洪月光, 李光哲, 韩 冰

(河北省秦皇岛市中医医院, 河北 秦皇岛, 066000)

目的 探讨CIK治疗恶性实体肿瘤的疗效及相关肿瘤标志物的改变。方法 选择32例恶性实体肿瘤患者进行CIK治疗，观察治疗前后生活质量、客观疗效、肿瘤标志物及免疫指标的变化。结果 CIK治疗后患者卡氏评分(KPS)提高率59.4%, RR为46.9%, DCR为84.4%。治疗后，相关肿瘤标志物CEA、NSE、AFP、CA153、CA199、Fer检测值总体有所下降。CD3+较治疗前显著升高(P<0.05)。CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与治疗前相比无显著变化(P>0.05)。结论 CIK细胞治疗可提高恶性实体肿瘤患者的生存质量，但相关肿瘤标志物无明显变化。

恶性实体肿瘤; CIK细胞; 肿瘤标志物

肿瘤细胞免疫治疗是继手术、放疗和化疗之后的第4大肿瘤治疗技术[1-2]。其优势在于个体性、靶向性、高效性，治疗过程中痛苦小，安全性高，无毒副作用。1991年发现的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是一群异质细胞，兼具T淋巴细胞强大的抗癌活性和NK细胞的非MHC限制性杀死癌细胞特点[3-5]。目前在临床上已经用于治疗多种恶性实体肿瘤，以预防肿瘤复发转移，提高患者生存质量，并取得一定的临床疗效[6]。本研究探讨CIK细胞治疗恶性实体肿瘤的疗效及相关肿瘤标志物的改变，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集符合CIK治疗标准的2014年3月—2015年11月秦皇岛市中医医院肿瘤科住院患者32例，其中男14例，女18例。年龄38～67岁, 平均48.5岁。其中包括肺癌11例，肝癌9例，乳腺癌8例，直肠癌2例，结肠癌2例。纳入标准：32例患者均经影像学、病理学等方法确诊为实体肿瘤Ⅲ、Ⅳ期；KPS评分≥60分，预计生存期≥6个月；重要器官功能基本正常；无不可控的感染性疾病；无严重自身免疫性疾病；非妊娠或哺乳期妇女；治疗方案经患者及家属同意后，签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 CIK细胞培养制备：以肝素钠抗凝管抽取患者自身外周血50～100 mL, 送至生物治疗中心GMP实验室，用人外周血淋巴细胞分离液(购自天津灏洋生物制品科技)分离出外周血单个核细胞(PBMC), 洗涤后重悬于1640基础培养基，加入CIK-Ⅱ号试剂，置于37℃、5% CO2培养箱内培养。第2天加入CIK-Ⅲ号试剂，观察细胞生长状况，之后每隔2～3 d补液加入CIK-Ⅳ号试剂(所用CIK试剂均购自北京五康生物公司)，视细胞生长情况培养12～16 d。

1.2.2 CIK细胞质量监测：培养至14 d左右，检测细胞内毒素、细菌、真菌、支原体等指标；台盼蓝染色计算细胞活率大于95%; 检测分子标记表达水平，要求CD3+CD56+≥20%。

1.2.3 CIK细胞回输：将检测合格的CIK细胞用生理盐水洗涤2～3次，加入20%人血白蛋白3～5 mL, 重悬于200 mL生理盐水，在地塞米松使用15～20 min后，将CIK细胞悬液静脉回输给患者, 1次/d, 每次细胞数量约2×109, 连续输注3 d为1个疗程，预计治疗3个疗程。

1.3 观察指标及疗效

1.3.1 生活质量评价：应用卡氏评分(KPS)对CIK细胞治疗前后的患者进行生活质量评价。KPS评分提高10分或以上视为改善；变化不足10分视为稳定；降低10分或以上视为恶化。

1.3.2 客观疗效评定：所有患者治疗1个月后进行影像学复查，按实体瘤疗效评价标准(RECIST)进行评价。完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)和进展(PD)。有效率(RR) = (CR+PR)/总例数×100%, 疾病控制率(DCR) =(CR+PR+SD)/总例数×100% 。

1.3.3 肿瘤标志物的变化：分别抽取患者CIK治疗前1周、治疗后1个月的静脉血，进行相应肿瘤标志物检测，包括CEA、NSE、AFP、CA153、CA199、FER。

1.3.4 免疫指标检测：治疗前3 d及治疗后1个月分别应用流式细胞仪检测CIK治疗前后T细胞亚群的变化。

1.4 统计学方法

应用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析处理。计量资料以均数±标准差表示，采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

32例患者经CIK治疗后KPS升高10分及以上者19例，升高<10分8例，无变化2例，下降3例，提高率59.4%。观察治疗期间肿瘤患者的精神状态、睡眠质量、癌症疼痛、疲乏无力等指标改善情况, 62.5%(20/32)的患者表现为不同程度的改善，表明CIK治疗可以提高和改善肿瘤患者的生活质量。32例晚期肿瘤患者经过治疗后PR 15例, SD 12例, PD 5例, RR为46.9%, DCR为84.4%。

治疗后，相关肿瘤标志物CEA、NSE、AFP、CA153、CA199、Fer水平总体有所下降，但差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。应用流式细胞仪检测治疗前后T细胞亚群的变化，其中CD3+较治疗前显著升高(P<0.05)。CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与治疗前相比，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。32例肿瘤患者在CIK回输过程中及回输后出现发热3例，但体温均低于38.5 ℃。经对症治疗处理后，恢复正常。未见其他不良反应发生。

表1 CIK治疗前后肿瘤标志物的变化

表2 CIK治疗前后T细胞亚群变化

与治疗前比较, *P<0.05。

3 讨 论

肿瘤免疫细胞治疗是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗模式，它是运用生物技术将肿瘤患者自体或异体免疫细胞进行体外培养扩增，再回输给患者，来激发、增强肿瘤患者自身的免疫功能，从而达到杀伤肿瘤细胞，改善患者生存质量的目的。CIK细胞治疗是其中的一种，CIK增值能力强，杀瘤活性高，对肿瘤细胞的杀伤作用是LAK细胞的1 000倍，而对正常淋巴细胞和组织细胞无杀伤作用。目前CIK已在临床上应用于治疗多种恶性肿瘤[7-8], 预防肿瘤复发转移，改善患者生存质量，并取得一定临床疗效。CIK细胞治疗现已被认为是新一代过继细胞免疫治疗的重点方案之一。CIK细胞作用的主要机制如下[9-11]: 通过靶细胞表面分子与效应细胞的受体结合释放穿孔素等物质裂解肿瘤细胞而直接发挥杀伤作用；激活细胞毒样T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK)等，起到间接杀伤肿瘤细胞的作用；活化靶细胞凋亡基因，诱导肿瘤细胞凋亡。CIK细胞治疗的优点：杀瘤活力强，不需要依赖IL-2的介导，因此避免了IL-2带来的副作用及不良反应；对多重耐药的肿瘤细胞敏感；显效时间短，患者输入CIK后，短期内可改善食欲、睡眠、精神状态等方面，并减轻疼痛；治疗过程中，患者无明显痛苦和不适，安全可靠；由于CIK细胞溶瘤作用是非MHC限制性的，因此对多种肿瘤均有杀伤作用，相关研究[12-15]报道应用CIK治疗恶性实体肿瘤作用显著，临床效果较理想。

本研究选择本院恶性实体肿瘤患者32例进行CIK治疗，并从治疗前后的KPS评分、临床效果评估、肿瘤标志物改变、免疫指标变化等方面进行对比分析。结果显示经CIK治疗后，患者的KPS评分显著提高，治疗期间肿瘤患者的睡眠、疼痛、精神状态等多方面得到改善，表明CIK治疗可以减轻患者痛苦，提高肿瘤患者的生存质量。本研究重点观察了CIK治疗前后患者血清肿瘤标志物的改变，对治疗前1周及治疗后1个月的肿瘤标志物变化进行统计学分析，虽然相关肿瘤标志物值有所下降，但差异均无统计学意义(P>0.05)。其中4例(肝癌1例、肺癌1例、直肠癌2例)患者在CIK治疗后1周左右自行要求检测相应肿瘤标志物，作者意外发现4例患者在治疗后1周时，其肿瘤标志物均有不同程度的升高，分析其原因可能是该时间段CIK集中发挥杀伤裂解肿瘤细胞作用强，可能导致相关肿瘤标志物及其他未知指标的一过性升高。此外，本研究结果显示CIK治疗可提高各类肿瘤患者的T细胞亚群比例，特别是CD3+显著增高，提示CIK治疗可提高机体免疫辅助应答及调节能力。

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Efficacy of CIK cells in the treatment of patients with advanced malignant solid tumor and the changes of tumor markers

LIU Bing, TONG Rui, LIU Jianrui, SHEN Fangchen, HONG Yueguang, LI Guangzhe, HAN Bing

(QinhuangdaoHospitalofTraditionalChineseMedicine,Qinhuangdao,Hebei, 066000)

Objective To explore the curative effect of CIK cells on the treatment of patients with advanced malignant solid tumor and the changes of tumor markers. Methods A total of 32 patients with advanced malignant solid tumor were selected and treated with CIK therapy. The changes in the quality of life, tumor markers and immune indexes were observed before and after treatment. Results The raise ratio of KPS was 59.4% after CIK therapy. The response rate was 46.9% and the disease control rate was 84.4%. There were no significant changes in the tumor markers such as CEA, NSE, AFP, CA153, CA199, Fer after CIK therapy. The immune indexes of CD3+was significantly higher while levels of CD4+, CD8+, CD4+/CD8+had no significant changes after CIK cells treatment. Conclusion CIK cells treatment can significantly improve the survival quality in patients with malignant solid tumors, but there are no significant changes of the tumor markers.

malignant solid tumor; CIK cells; tumor markers

2016-09-26

河北省秦皇岛市科技局科研计划项目(201401A121)

韩冰

R 73

A

1672-2353(2016)23-029-03

10.7619/jcmp.201623009