绝经期子宫内膜息肉组织中基质金属蛋白酶-9及环氧化酶-2的表达及其相关性

张 艳 夏 颖 王 琳

(复旦大学附属华东医院妇科，上海 200040)



绝经期子宫内膜息肉组织中基质金属蛋白酶-9及环氧化酶-2的表达及其相关性

张 艳 夏 颖 王 琳

(复旦大学附属华东医院妇科，上海 200040)

目的 探讨绝经期子宫内膜息肉(EP)组织中基质金属蛋白酶(MMP)-9及环氧化酶(COX)-2表达及两指标的相关性。方法 选取未使用任何激素类药物治疗的绝经前、后EP患者、正常子宫内膜(对照组)各30例。采用免疫组化法检测在绝经前后EP及正常子宫内膜组织中MMP-9及COX-2蛋白的表达，并分析两指标的相关性。结果 MMP-9、COX-2在绝经前EP组织中表达分别为83.33%(25/30)、57.67%(17/30)，均明显高于对照组的26.67%(8/30)、20.00%(6/30)(χ2=19.461、8.531，P<0.05)；在绝经后EP中表达分别为73.33%(22/30)、47.67%(13/30)，均明显高于对照组的30.00%(9/30)、16.67%(5/30)(χ2=11.279、5.079，P<0.05)；MMP-2与COX-2在绝经前后EP组织中呈正相关(r=0.383，P=0.037)。结论 MMP-9和COX-2 在绝经期EP组织高表达，且呈正相关，这两种蛋白酶可能参与绝经期EP的形成。

绝经期；MMP-9；COX-2；EP

研究表明，多数子宫内膜息肉(EP)患者发病年龄在40岁以上，绝经期发病率最高〔1～3〕。EP的发病机制和病因不明确，有研究发现基质金属蛋白酶(MMP)-9和环氧化酶(COX)-2在人类多种肿瘤组织中均有高表达，且MMP-9和COX-2共同协同降解细胞外基质〔4，5〕。但MMP-9和COX-2对EP形成的作用却少有报道。本课题分析绝经期未使用过任何激素类药物治疗的良性EP患者MMP-9及 COX-2的表达，探究其在EP形成的作用。

1 资料与方法

1.1 资料来源 选取我院2015年1～12月未使用过任何激素类药物治疗的绝经前EP患者30例、绝经后EP患者30例。纳入标准：患者因绝经后出血或B超检查发现宫内异常回声入院检查，经宫颈宫腔镜诊断为EP，行EP切除手术(息肉长径为0.5～2.5 cm)。另外选取绝经期子宫内膜正常者60例，其中绝经前、绝经后各30例，且均未用过任何激素类药物治疗。本次实验通过医院伦理委员会审核批准，入选的病患均已签署知情同意书。

1.2 方法 采用兔抗人COX-2单克隆抗体和兔抗人MMP-9单克隆抗体、即用型二步法免疫组化检测盒均购自北京中杉生物科技有限公司。COX-2、MMP-9工作浓度均为 1∶100。术后立即采取活组织，以10%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋。将石蜡块进行4 μm厚连续切片，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，经多聚赖氨酸防脱片处理和微波抗原热修复预处理后，采用免疫组化 SP法染色，二氨基联苯胺显色，常规脱水、透明及封片。具体步骤按说明书操作以磷酸盐缓冲液代替一抗作空白对照。

1.3 结果判定 COX-2的阳性信号为细胞质内出现棕黄色颗粒，在细胞核和细胞膜上无明显染色。用已知阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。每张切片随机选择5个20×10高倍视野，采用半定量方法分析。取5个视野所见的阳性细胞百分比的平均值记分，细胞数全部为阴性反应记为0分；<10%的细胞数呈阳性反应记为1分；10%～50%的细胞数呈阳性反应记为2分；51%～80%的细胞数呈阳性反应记为3分；>80 % 的细胞数呈阳性反应记为4分；染色强度记分，阴性染色记为0分；弱阳性染色记为1分；中度阳性染色记为2分；强阳性染色记为3分。每例组织细胞的评分以这两项者之积表示，0 分为(-)，1～4 分为(+)，5～8 分为()，9～12分为()。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件。两样本率的比较采用χ2检验；两指标相关性分析采用Spearman系数检验。

2 结 果

2.1 MMP-9、COX-2在绝经前EP和正常子宫内膜组织中的表达 MMP-9、COX-2在绝经前EP组织中表达分别为83.33%(25/30)、57.67%(17/30)，均明显高于对照组的26.67%(8/30)、20.00%(6/30)(χ2=19.461、8.531，P<0.05)，见表1。

2.2 MMP-9、COX-2在绝经后EP和正常子宫内膜组织中的表达 MMP-9、COX-2在绝经后EP中表达分别为73.33%(22/30)、47.67%(13/30)，均明显高于对照组的30.00%(9/30)、16.67%(5/30)(χ2=11.279、5.079，P<0.05)，见表2。

2.3 MMP-9和COX-2蛋白在绝经前、后EP组织中的相关性分析 MMP-2与COX-2在绝经前、后EP组织中呈正相关(r=0.383，P=0.037)，见表3。

表1 MMP-9及COX-2在绝经前EP和正常子宫内膜组织的表达(n=30，n)

表2 MMP-9及COX-2在绝经后EP和正常子宫内膜组织中的表达(n=30，n)

表3 MMP-2与COX-2在绝经前、后EP组织表达的相关性(n)

3 讨 论

雌激素与EP有密切的联系〔6～8〕，但是进入绝经期的妇女，随着卵巢功能的衰退，女性患者体内雌激素水平下降，EP的高发生率却持续保持不变〔9〕。MMPs是一种依赖锌离子蛋白酶家族，在细胞外基质的降解、促进新生血管等生理作用扮演者重要的角色。当出现恶性肿瘤浸润和扩散时，MMP-9也发挥作用。它作用于Ⅳ型胶原蛋白和纤维结合素，进一步使上皮下基底膜组织和血管降解。已有研究证明在子宫内膜周期性破坏和重建中，MMP-9在子宫内膜有表达。COX是一种膜结合蛋白，可代替COX和过氧化物酶的作用。它一般以COX-1和COX-2这有两种异构体形式存在。其中COX-2有诱性表达的作用，它诱导细胞因子、生长因子、促癌剂等表达〔10〕。COX-2参与细胞增殖，促进细胞凋亡等生理过程。当细胞出现损伤或炎症增生时，COX-2表达上调，刺激新血管增生。

本研究说明MMP-9和COX-2在正常子宫内膜中存在高表达状态，预示MMP-9和COX-2的异常表达可能是EP形成的重要因素。有研究表明雌激素水平的高低可以影响MMP-9和COX-2的表达〔11，12〕。本文发现MMP-9和COX-2的表达略有降低，推测MMP-9和COX-2在绝经期EP组织异常表达可能与激素水平有关，因此在绝经后MMP-9和COX-2的表达作用变弱。进一步相关性分析发现，MMP-9和COX-2在EP形成中具有协同作用，随着MMP-9水平的升高，COX-2水平逐渐升高。可能是因为子宫内膜中COX-2增加，促进细胞因子的产生，进而使MMP-9的水平提高，加速肿瘤炎症细胞的转移和浸润，使EP增生加重。Chimal-Ramirez等〔13〕研究证实MMP-9和COX-2在肿瘤与细胞间质中起到桥梁作用，他们互相协同为炎症反应提供条件。EP是慢性子宫内膜炎的一种，是炎性的未成熟子宫内膜〔14，15〕。在EP形成的过程中，由于MMP-9降解细胞外基质，因此使肿瘤转移和侵袭的速度加快。此时炎症COX-2基因出现上调，细胞为了响应可溶性因子以增加胶原降解，使富含肿瘤细胞迁移能力增加，抗细胞凋亡，启动血管再生因子，局部血管和结缔组织增生。MMP-9和COX-2的协同作用提高使恶变率，加重EP患者病情。

1 Lasmar BP，Lasmar RB.Endometrial polyp size and polyp hyperplasia〔J〕.Int J Gynaecol Obstet，2013；123(3)：236-9.

2 Elfayomy AK，Soliman BS.Risk factors associated with the malignant changes of symptomatic and asymptomatic endometrial polyps in premenopausal women〔J〕.J Obstet Gynaecol India，2015；65(3)：186-92.

3 唐志坚，周 蓉，鲍冬梅，等.子宫内膜息肉恶变42例临床分析〔J〕.中华妇产科杂志，2014；49(3)：204-7.

4 Lazar L，Loghin A，Bud ES，etal.Cyclooxygenase-2 and matrix metalloproteinase-9 expressions correlate with tissue inflammation degree in periodontal disease〔J〕.Rom J Morphol Embryol，2015；56(4)：1441-6.

5 高 锋，冯一中.COX-2、MMP-9和CD31在非小细胞肺癌的表达及其意义〔J〕.江苏医药，2014；40(9)：1067-70.

6 孙雪竹，卢美松，李 萌，等.子宫内膜息肉研究进展〔J〕.现代生物医学进展，2015；15(5)：985-7.

7 Indraccolo U，Di Iorio R，Matteo M，etal.The pathogenesis of endometrial polyps：a systematic semi-quantitative review〔J〕.Eur J Gynaecol Oncol，2013；34(1)：5-22.

8 Bueloni-Dias FN，Spadoto-Dias D，Nahas Neto J，etal.Predictive factors for occurrence of endometrial polyps in postmenopausal women〔J〕.Rev Bras Ginecol Obstet，2014；36(11)：489-96.

9 Seckin B，Ozgu-Erdinc AS，Dogan M，etal.The utility of endometrial thickness measurement in asymptomatic postmenopausal women with endometrial fluid〔J〕.J Obstet Gynaecol，2016;36(2):230-3.

10 Pinheiro A，Antunes A Jr，Andrade L，etal.Expression of hormone receptors，Bcl2，Cox2 and Ki67 in benign endometrial polyps and their association with obesity〔J〕.Mol Med Rep，2014；9(6)：2335-41.

11 张 涛，张诗琳，杨鹤鸣，等.雌激素对结肠癌肝转移细胞增殖与凋亡及MMP-9表达的影响〔J〕.中华临床医师杂志(电子版)，2013；7(1)：96-9.

12 陈嵘袆，张金娥，阿彩岭，等.雌激素化小鼠念珠菌性阴道炎模型中COX-2，TSLP的表达及其意义〔J〕.中国皮肤性病学杂志，2012；26(7)：584-7，590.

13 Chimal-Ramirez GK，Espinoza-Sanchez NA，Utrera-Barillas D，etal.MMP1，MMP9，and COX2 expressions in promonocytes are induced by breast cancer cells and correlate with collagen degradation，transformation-like morphological changes in MCF-10A acini，and tumor aggressiveness〔J〕.Biomed Res Int，2013；2013：279505.

14 van Hanegem N，Prins MM，Bongers MY，etal.The accuracy of endometrial sampling in women with postmenopausal bleeding：a systematic review and meta-analysis〔J〕.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2015；197：147-55.

15 李红梅，张 洁，王秀艳.宫腔镜治疗子宫内膜息肉切除术108例临床分析〔J〕.重庆医学，2013；42(3)：339-41.

〔2015-11-13修回〕

(编辑 袁左鸣)

夏 颖(1971-)，女，硕士，副主任医师，主要从事妇科肿瘤方面的研究。

张 艳(1980-)，女，硕士，主治医师，主要从事妇科肿瘤方面的研究。

R711.32

A

1005-9202(2016)22-5700-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.096