柴胡舒肝颗粒醇提工艺优选

吴晓明



柴胡舒肝颗粒醇提工艺优选

吴晓明

目的 通过正交实验优选舒肝颗粒柴胡醇提制备工艺。方法 采用高效液相色谱法测定柴胡中柴胡皂苷含量，以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的总含量及固形物提取率为考察指标，考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数4个因素对提取结果的影响。结果 醇提最佳工艺为7倍量70%乙醇，提取2次，每次1.5 h。结论 优选的提取工艺稳定、可行，适用于工业化生产。

正交试验；柴胡皂苷a；柴胡皂苷d；柴胡舒肝颗粒

0 引言

柴胡舒肝颗粒方系在《景岳全书》经典名方柴胡疏肝丸基础上形成的有效验方，由柴胡、香附、制何首乌、甘草等中药组成，具有调气疏肝，解郁散结，宁心安神的功能[1]，临床用于治疗肝郁伤神所致的焦虑和失眠，症见失眠多梦，精神抑郁或急躁易怒，胸胁苦满或胸膈不畅。方中柴胡为君药，柴胡皂苷是柴胡中的主要活性成分[2]，文献报道其含量与柴胡疏肝解郁的功效密切相关[2]。为提高产品的质量，本文通过正交实验，采用高效液相色谱法测定柴胡中柴胡皂苷含量，以柴胡皂苷a和柴胡皂苷d总量及固形物提取率为指标，对柴胡舒肝颗粒制备过程中的醇提部分的工艺进行了优选，为舒肝颗粒合理的工艺、可控的质量提供可靠依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 Agilent1100液相色谱仪(美国Agilent公司)；色谱分析柱汉邦Lichrospher C18柱(4.6 mm×250 mm；5 μm)；BT25S型电子分析天平(德国Sartoriuss公司)。

1.2 药品及试剂 柴胡皂苷a(批号：110777-200507)、柴胡皂苷d(批号：110778-200506)购自于中国药品生物制品检定所，供含量测定用；甲醇(南京化学试剂有限公司，色谱纯)；乙腈(美国天地)；饮片(经鉴定，符合《中国药典》2010年版一部要求)；重蒸去离子水(自制)。

2 方法和结果

2.1 提取方法 称取柴胡20 g，川芎10 g，加适量乙醇后按正交试验设计方法提取，过滤且合并滤液，提取液定容，备用。

2.2 固形物的制备 精密量取定容提取液100 mL，置于干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h，移至干燥器中，冷却30 min，迅速精密称定重量，计算固形物含量。

2.3 柴胡皂苷含量测定方法的建立

2.3.1 色谱条件 Lichrospher C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按表1进行梯度洗脱；检测波长为210 nm；流速0.8 mL/min。色谱图见图1。

表1 梯度洗脱表

2.3.2 对照品溶液的配制 精密称取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品适量，加50%甲醇溶解制成每毫升含有柴胡皂苷a 220 μg、柴胡皂苷d 201 μg的对照品溶液，备用。

图1 对照品与供试品HPLC图

2.3.3 供试品溶液的配制 按照正交试验安排的试验设计进行试验，精密称取柴胡等饮片，饮片加入适量相对应浓度乙醇，回流提取，合并滤液，滤液定容，取样，滤液过0.45 μm滤膜，备用。

2.3.4 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分别置于5 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成不同浓度的对照品溶液，分别精密吸取10 μL，进样测定，以峰面积(Y)为纵坐标，对照品质量浓度(X，μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程柴胡皂苷a：Y=3.841 3 X-15.182，r=0.999 7，线性范围为24.2～220 μg/mL；柴胡皂苷d：Y=3.949 3 X-14.923，r=0.999 7，线性范围为20.1～201 μg/mL。

2.3.5 精密度试验 精密吸取上述不同对照品溶液10 μL，重复进样6次，依法测定，结果柴胡皂苷d和柴胡皂苷d对照品峰面积积分值RSD分别为1.12%、0.78%。表明精密度良好。

2.3.6 稳定性试验 取正交试验下5号样品储备液，过0.45 μm微孔滤膜，在0～24 h内按上述色谱条件测定。结果柴胡皂苷a的RSD为0.89%，柴胡皂苷d的RSD为0.46%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.7 重复性试验 取同一样品储备液，过0.45 μm微孔滤膜，按上述色谱条件进样测定，共6次，结果柴胡皂苷a的RSD为0.95%，柴胡皂苷d的RSD为0.65%，表明方法重现性良好。

2.3.8 加样回收率试验 精密量取正交试验下6号样品储备液2 mL，加入每毫升含有柴胡皂苷a 44 μg，柴胡皂苷d 40.2 μg的混合对照品溶液2 mL，定容，制成供试品溶液，按上述色谱条件下测定，计算加样回收率。结果柴胡皂苷a的平均回收率为98.71%，RSD=1.69%；柴胡皂苷d的平均加样回收率为95.81%，RSD=2.1%(n=6)。

2.4 实验设计及结果 根据处方中饮片主要成分的性质及预试验结果，采用回流的提取方法，影响醇提工艺的主要因素有乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取时间(C)、提取次数(D)。按正交试验设计L9(34)因素安排实验，以柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的总量及固形物含量为考察指标，因素水平见表2，试验结果见表3，方差分析见表4。

表2 因素水平表

根据柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的总含量及固形物为考察指标，以极差最低的因素提取时间作为误差项，进行方差分析。结果表明4个因素差异均无统计学意义(P>0.05)，影响因素的主次为乙醇浓度>乙醇用量>提取次数>提取时间。分析发现，乙醇浓度最低时，固形物含量最高，皂苷总量最低；乙醇用量最高时，固形物含量最高，皂苷总量低于第2水平，而且生产成本最高；提取时间对提取影响最小，各水平之间差距较小；提取次数越多，固形物含量越多，皂苷总量也越多，然而溶剂能耗消耗也最多。综合考虑皂苷总量、固形物含量及工业生产成本等因素，确定较优工艺为A2B2C2D2，即加入7倍量70%的乙醇，提取2次，每次1.5 h。

2.5 验证实验 为验证优选工艺的可靠性和重复性，取相应量饮片，按照正交试验所得出的较优工艺，进行工艺验证，平行3份，结果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d总量分别为71.936 4、69.347 8、70.189 5 mg，RSD为1.52%，固形物提取率分别为9.60%、9.67%、9.40%，RSD为1.22%，结果表明所得工艺稳定，合理可行。

表3 正交实验结果表

表4 方差分析表

3 讨论

柴胡皂苷类是柴胡中的主要有效成分，与柴胡疏肝解郁的功效密切相关。柴胡皂苷有皂苷a、皂苷c、皂苷d、皂苷b1、皂苷b2等[3]，其中皂苷a、皂苷d是药典规定评价柴胡饮片的指标，因此选择柴胡皂苷a和d为指标成分[4]，并以其总提取量作为工艺优选的依据。

国内文献常用正交设计优化法[5]选择较佳工艺，具有“均匀分散、整齐可比”的特点，其实验次数少，数据处理及操作均方便，应用已达到普及的程度，本文采用正交实验优化舒肝颗粒醇提工艺，优选的工艺稳定可行，适合工业化生产。

[1]蔡华,雷攀,杜士明,等.柴胡制剂的开发利用研究进展[J].中国药师杂志,2015,18(11):1963-1965.

[2]赵香妍,刘长利.中药柴胡的研究概况与发展趋势[J]时珍国医国药,2015,26(4):963-966.

[3]李军,姜华,张延萍,等.HPLC测定柴黄片中柴胡皂苷b1、b2的含量[J].中国药学杂志,2011,46(1):61-63.

[4]祝婧,钟凌云,龚千锋,等.HPLC法测定柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a、d的含量[J].江西中医药大学学报,2015,27(6):46-47.

[5]周旭,张兰,田原,等.正交设计法优选柴胡消瘿颗粒的乙醇提取工艺[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(2):20-23.

Optimization of ethanol-extraction technology for Chaihu shugan granule

WU Xiao-ming

(Changshu City Hospital of Traditional Chinese Medicine,Changshu 215500,China)

Objective To optimize the ethanol-extraction technology of Chaihu shugan granule by orthogonal design.Methods Alcohol extractrate and the total content of saikosaponin a and saikosaponin d were taken as the indexes for investigation,and orthogonal test was carried out to study the effects of four extracting factors (alcohol density,alcohol amount,extracting time and extracting times) on the extraction technology.Results The optimum extracting conditions were 7 times amounts of 70% alcohol,extracting for 3 times and 1.5 hours each time.Conclusion The process is efficient,stable and suitable for industrialized production.

Orthogonal design;Saikosaponin a;Saikosaponin d;Chaihu shugan granule

2016-04-22

常熟市中医院，江苏 常熟 215500

10.14053/j.cnki.ppcr.201611022