SCC患者外周血淋巴细胞亚群检测的意义及与预后相关性分析

石铁梅　徐靖宏　王玲　剡建平

SCC患者外周血淋巴细胞亚群检测的意义及与预后相关性分析

石铁梅徐靖宏王玲剡建平

目的 观察皮肤鳞状细胞癌（SCC）患者外周血淋巴细胞亚群的变化及其意义及与预后的关系，以探讨免疫机制在SCC发生、发展中的可能机制。方法 采用流式细胞仪对46例SCC患者外周血T淋巴细胞及NK、B淋巴细胞进行检测，并与46例健康对照组进行比较，同时所有SCC患者均行手术治疗，并随访2年，观察复发、转移情况，及与外周血淋巴细胞亚群的关系。结果 与对照组比较，SCC患者外周血中CD3+比值升高（P＜0.05），CD4+、NK细胞比例降低（P＜0.05，P＜0.01），B淋巴细胞、CD8+比例升高（P＜0.05，P＜0.01），CD4+/CD8+值降低（P＜0.05）；随着肿瘤增大，伴有淋巴结转移、分化程度降低以及浸润深度的增加，外周血中血CD3+、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞比例升高，CD4+T淋巴细胞、NK细胞比例以及CD4+/CD8+值降低（P＜0.05），随访2年后，共有4例发生复发和转移，Logistic回归分析提示CD4+、NK细胞比例和CD4+/CD8+值降低是SCC复发和转移的预测因素。结论 SCC患者存在免疫功能失调，可能与体液免疫亢进，细胞免疫功能受抑制有关，CD4+、NK细胞比例和CD4+/CD8+值可预测SCC的复发和转移。

皮肤鳞状细胞癌 淋巴细胞亚群 流式细胞仪 体液免疫 细胞免疫

皮肤鳞状细胞癌（skin squamous cell，SCC）是源于皮肤中角质形成细胞的恶性肿瘤，具体原因不明，现认为与SCC 发生有关的包括环境和宿主因素。环境因素包括日光、X线、砷和有致癌作用的碳氢化合物等；宿主因素包括年龄、皮肤色泽、自体免疫状态和某些基因的缺陷。本文通过观察SCC患者外周血淋巴细胞亚群的变化，探讨免疫机制在SCC发生和发展中的可能机制，以及与预后的相关性。

1　临床资料

1.1一般资料 选择2010年1月至2013年1月于浙江省新昌县人民医院的SCC患者46例，其中男28例，女18例；年龄50～80岁，平均年龄66.8岁。病程6个月～2年，12例患者伴有高血压或糖尿病；均经过手术切除，切缘均阴性，其中肿块大小1.0×1.0cm～8.0×7.0cm；高分化18例，中分化20例，低分化8例；10例有附近区域淋巴结转移，病理检查证实为SCC，皮肤癌局限于皮肤或皮下组织30例，浸润至深层组织16例；并选择同期在浙江省新昌县人民医院体检中心体检的46例体检者作为对照，两组间男女比例、年龄等一般情况差异无统计学意义（P＜0.05），具有可比性。排除标准：全身转移的SCC患者，其它肿瘤患者，严重肝肾功能不全，自身免疫性疾病及慢性感染等。

1.2方法 两组患者均于次日空腹采集静脉血2ml，6h内作染色处理，使用美国BD公司生产FACSCalibur流式细胞仪，报告CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞、CD16+占总淋巴细胞的百分比、CD4+/CD8+比值，上述操作过程中各试剂均由美国BD公司生产。

1.3统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件。计量资料以（±s）表示，两组间比较采用t检验，多因素分析采用Logistic回归分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1SCC患者外周血T淋巴细胞亚群和健康人员比较 见表1。

表1　两组间淋巴细胞亚群比较（±s）

表1　两组间淋巴细胞亚群比较（±s）

组别nCD3+(%)CD3+CD4+(%)CD3+CD8+(%)CD4+/CD8+NK(%)CD3-CD16+(%) SCC组46 56.41±10.931.42±8.831.60±7.41.12±1.21.63±1.327.63±11.0对照组4651.20±9.736.33±10.728.11±6.91.73±1.32.42±1.66.91±3.6 t值2.41712.39892.34622.30022.631912.13 P值0.01770.01850.02120.02380.010

2.2SCC患者淋巴细胞亚群与患者临床病理因素分析 将SCC患者的肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况、年龄、合并其它疾病情况与外周血淋巴细胞亚群进行分析，结果显示，随着肿瘤的增大、淋巴结转移、分化程度的降低及浸润深度的增加，外周血中血CD3+细胞比例升高（t值分别为2.3920，2.022，2.2615，2.0725，P＜0.05），CD4+T细胞降低（t值分别为2.6964，2.3019，2.4895，2.0981，P＜0.05），CD8+T细胞比例升高（t值分别为2.2458，2.0498，2.5355，2.217，P＜0.05），CD4+/CD8+值降低（t值分别为2.6135，2.0776，.22496，2.3245，P＜0.05），NK细胞比例降低（t值分别为1.9955，2.1455，2.2090，2.1659，P＜0.05），B淋巴细胞亚群比例升高（t值分别为2.2565，2.2886，2.0308，2.3045，P＜0.05）。

2.3淋巴细胞亚群与SCC复发及转移的相关性分析 所有SCC患者随访2年，其中4例发生转移和复发，1例在远处皮肤出现肿块、溃疡，经病理学检查证实为与原来SCC相同类型的病理类型，2例经影像学检查证实为肝脏和肺部转移，1例在原手术部位出现皮肤破溃，病理活检证实为SCC；以外周血CD3+、CD4+、CD8+、NK、B淋巴细胞比例，CD4+/CD8+值等指标为自变量作为预测SCC复发和转移的备选危险因素，以SCC复发和转移为应变量，采用Logistic回归分析进行筛选，结果显示，CD4+、NK细胞比例和CD4+/CD8+值降低是SCC复发和转移的危险因素（P＜0.05）。

3　讨论

近几年来国内外多项研究表明，恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群有明显变化，CD4+T细胞减少，CD8+T细胞增多，CD4+/CD8+比值下降或倒置，且这种变化随着肿瘤的进展愈加明显。其中CD4+T 淋巴细胞能促进效应细胞抗肿瘤作用，CD8+T淋巴细胞则主要起免疫抑制作用［1］，CD4+/CD8+是反应机体免疫平衡状况的敏感指标，在正常生理状况下，该比值相对恒定［2］，当CD8+细胞数量增加，功能亢进时，机体的体液免疫剂细胞免疫均受到抑制［3］；肿瘤通过表达、释放某种肿瘤抗原或其他可溶性物质诱导激活CD8+T细胞，从而参与机体的免疫抑制［4］。另一类免疫细胞NK细胞是机体中对肿瘤细胞具有高度细胞毒性作用的淋巴样细胞，是一种广谱的杀伤细胞，可直接发挥抗肿瘤效应，并通过分泌细胞因子调节免疫应答［5］，对阻止肿瘤生长起重要作用。而B细胞主要介导体液免疫，与NK细胞协同在清除突变细胞和病毒感染细胞中发挥重要作用。目前对于肝癌、肺癌、消化道恶性肿瘤、鼻咽癌、乳腺癌等恶性肿瘤的免疫机制研究较多，而对于SCC研究较少。

SCC多认为与以下因素明显相关：（1）紫外线。（2）化学因素。（3）癌前期皮肤病。（4）瘢痕、外伤及其他慢性皮肤病。（5）免疫抑制等。朱明芳等［6］报道1例寻常性银屑病继发多发性皮肤鳞状细胞癌患者，认为长期不规则使用免疫抑制剂治疗银屑病可能是多发性皮肤鳞癌的诱发因子，提示免疫功能异常可能在SCC的发生方面起着一定作用。Sakai等［7］研究发现，2，2-二羟甲基丁酸（DMBA）诱导的鼠面颊部SCC中，随着DMBA摄入量的增加和时间的延长，CD4+T细胞减少，CD8+T细胞增多，提示随着肿瘤的进展，免疫抑制作用逐渐增强。本文中，所有入院病例病程均在6个月至2年，病程长，且随着淋巴结转移、浸润深度的增加、肿块的增大等因素，CD4+T细胞减少，CD8+T细胞增多，CD4+/ CD8+降低，考虑与过度免疫抑制有关。另有报道，异常的T细胞功能可导致继发的表皮角质细胞过度增生，从而出现不典型增生甚至恶变［8］；李敬果等［9］研究发现，CD3+T淋巴细胞在SCC组织中明显高于正常皮肤组织，提示肿瘤细胞启动机体细胞免疫应答机制，阻碍了肿瘤细胞分裂、增殖，延缓了肿瘤进展。本资料中，SCC患者外周血T细胞功能异常，CD3+T淋巴细胞总量较对照组升高，考虑与刺激表皮角质过度增生及启动免疫应答机制有关；而NK细胞百分比明显降低，说明肿瘤患者NK细胞免疫功能明显受损；同时CD4+T细胞、CD4+/CD8+比值下降，CD8+T细胞明显高于对照组，说明SCC患者存在细胞免疫功能下降，B淋巴细胞升高，提示体液免疫的亢进，与文献报道相符［10］。另外，46例SCC患者在手术切除病灶后随访2年后有4例发生复发和转移，明显高于SCC10年3%的复发转移率，考虑与患者就诊晚、未及时随诊、肿瘤恶性程度高等有关，同时多因素回归分析提示CD4+T细胞、NK细胞及CD4+/CD8+比值下降是预测SCC复发和转移的危险因素，考虑机体免疫功能受到抑制有利于SCC患者发生转移和复发。

总之，SCC患者存在着免疫机制的异常，通过研究SCC患者外周血淋巴细胞亚群表达情况可能有助于进一步了解皮肤恶性肿瘤发生、发展的机制，并在评估预后方面具有一定价值，但由于本资料入选例数较少，随访时间较短，故外周血淋巴细胞亚群是否有更大的临床意义，仍需进一步研究。

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Objective To observe the alteration of peripheral blood lymphocyte subsets in patients of skin squamous cell carcinoma（SCC）and analysis the correlation between prognosis，in order to investigate the immune mechanism in the development of SCC occurred，the possible mechanism. Methods Peripheral blood T-lymphocyte subgroups and NK cells，B-lymphocyte subgroups from 46 patients with SCC were detected by flow cytometry instrument；46 healthy persons were detected as a control group. All the SCC patients were treated by surgery，followed-up of 2 year，and observed the recurrence，metastasis，and the relationship with the peripheral blood lymphocyte subsets. Results Compared with control group，the CD3+ratio increased in peripheral blood of patients with SCC（P＜0.05），the CD4+and NK cells ratio decreased（P＜0.05，P＜0.01），the ratio of B lymphocyte，CD8+（P＜0.05，P＜0.01）increased，the value of CD4+/CD8+decreased（P＜0.05）.Accompanied by the increase of tumor size，Infiltrating depth and lymph node transfer，decrease of differentiation degree，the CD4+、NK cells ratio and CD4+/CD8+decreased，the B lymphocyte，CD8 + cells ratio increased（P＜0.05）；After 2 years followed-up，4 cases recurrenced and metastasized，Logistic regression analysis suggested the reduction of proportion of CD4+and NK cells and CD4+/CD8+values was a predictor of SCC recurrence and metastasis. Conclusion The disorders of immune function in patients with squamous cell carcinoma existed，may be related to the humoral immune hyperfunction，suppression of cellular immune function. The proportion of CD4+and NK cells and CD4+/ CD8+values may predict recurrence and metastasis of SCC.

Skin squamous cell carcinoma Lymphocyte subsets Flow cytometry instrument Humoral immune Cellular immune

312500 浙江省新昌县人民医院（石铁梅 王玲 剡建平）

310003 浙江大学医学院附属第一医院（徐靖宏）