防治黄瓜细菌性角斑病药剂筛选

冯 翔，江 念,陈耀兵,*,郑小江*

(1.长江大学 农学院，湖北 荆州 434000；2.湖北民族学院 生物科学与技术学院，湖北 恩施 445000)



防治黄瓜细菌性角斑病药剂筛选

冯 翔1，江 念2,陈耀兵1,2*,郑小江2*

(1.长江大学 农学院，湖北 荆州 434000；2.湖北民族学院 生物科学与技术学院，湖北 恩施 445000)

采用抑菌圈法对市场上常见的9种杀细菌剂进行室内毒力测定，并进行田间防效试验，以期筛选出有效药剂.试验结果表明：6种化学药剂中，5%噻霉酮水剂和0.3%四霉素水剂对黄瓜细菌性角斑病的抑制效果较好,其他4种药剂则效果较差.3 种生物药剂中，10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂对黄瓜细菌性角斑病的抑制效果较好，其他2种药剂则效果较差.田间试验中，10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂1 500倍液和20%春雷霉素水剂42 g/hm2的防效较好，其防效分别为82.74%和72.38%.0.3%四霉素水剂和33.5%喹啉铜悬浮剂则效果较差.所以，防治黄瓜细菌性角斑病推荐使用10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂.

杀菌剂；黄瓜细菌性角斑病；抑菌圈法

黄瓜细菌性角斑病在全世界爆发，造成了巨大的经济损失.而目前农药市场上防治细菌病害的杀菌剂较多，选择随意性大，所以，筛选高效、环保、生态友好的杀细菌剂十分必要.冬季气温低，光照时间短，黄瓜生长又需要较高的温度，在冬季日光温室种植黄瓜时，为了保持日光温室的温度，其放风时间相对较短，日光温室中的湿度增大，黄瓜细菌性角斑病的发生危害也较重.黄瓜细菌性角斑病一旦发生危害，可造成黄瓜叶片上产生水浸状的斑点，直接影响叶片的光和面积，当病害危害严重时，可造成整片叶片的枯死.因此，如何防治好黄瓜细菌性角斑病是保证黄瓜高产的重要措施之一[1-3].黄瓜细菌性角斑病为丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种，属薄壁菌门假单胞菌属.该菌属好气性，不耐酸性环境， 生长适温24～28℃[4].防治黄瓜细菌性角斑病药剂筛选病害流行规律：病原细菌在种子内外越冬，或随病残体遗落在土壤中越冬，病土和带病种子成为翌年病害的初侵染来源，适温(24～28℃)高湿的天气有利于感病；品种间抗病性有差异.温度22～30℃，相对湿度70%以上的环境条件，易造成该病害发生和流行[5-6].

黄瓜细菌性角斑病是继黄瓜霜霉病、枯萎病和白粉病之后，又一个对黄瓜生产危害性很大的病害.该病在保护地及露地生产中均有发生,且以露地危害最重.此病在华北、东北及华中地区发生较多，造成严重减产[7-8].近年来随着黄瓜种植面积的不断扩大，江汉地区病势逐年上升，减产达60%以上，有些地区达80%以上，只在早期有所收获.目前在黄瓜霜霉病、枯萎病、内生长霉菌和白粉病的抗病育种分别已取得了可喜的成果,而在黄瓜细菌性角斑病的抗病育种方面发展较慢，在之前的研究中，有农业研究者对黄瓜角斑病做出过化学防治，但是所筛选的药剂效果已经达不到现在的生物防治和低毒的要求，而且关于现在的新型药剂防治方面报道也较少[9-13].本文对黄瓜细菌性角斑病分别采用无公害的生物制剂和低毒的化学药剂进行室内毒力测定并进行室外防效实验，目的是为了筛选出防治黄瓜细菌性角斑病的有效药剂.

表1 9种供试杀菌剂

表2 9种杀菌剂的不同质量浓度

1 材料与方法

1.1 供试菌种

黄瓜细菌性角斑病病菌(Bacterial angular leaf spot of Cucumber)，自湖北省荆州市荆州区李埠镇白荷村采集黄瓜细菌性角斑病叶片，经过常规组织分离法分离，按照柯赫氏法则进行验证，分离后转接到LP培养基上置于4℃冰箱中保存备用.

1.2 供试药剂

9种供试杀菌剂见表1.

1.3 试验方法

1.3.1 室内毒力测定 试验采用抑菌圈法.采用干热法灭菌玻璃器皿(165℃恒温2 h).

制作LB 培养基.1 L烧杯里倒入800 mL的无菌水，酵母提取物5 g，蛋白胨10 g，NaCl 10 g，混合摇匀，定容至1 L，用NaoH，调节pH至7.4，然后平均分装到5个烧杯内，在每个烧杯里加入少量琼脂，将瓶口用棉花和报纸密封，湿热灭菌(121℃，20 min).先按照试验设计配置单个药剂的最高浓度，然后成倍稀释药剂，每种药剂每个浓度取3mL，每种药剂共5个浓度，并设蒸馏水为空白对照.杀菌剂的不同质量浓度见表2.

统计数据，根据不同浓度的药剂处理对菌落的生长抑制结果，用DPS数据分析处理软件对表3进行一元回归统计分析，以浓度的对数值为自变量x，以抑菌率的几率值为y值，得出表4的毒力回归方程，并求出EC50和各自的相关系数.

1.3.2 田间药效试验 试验药剂：根据室内毒力测试结果选取10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂1 000倍液、10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂3 000倍液、0.3%四霉素水剂4.5 g/hm2、20%春雷霉素水剂42 g/hm2、20%春雷霉素水剂63 g/hm2、33.5%喹啉铜悬浮剂300 g/hm2、33.5%喹啉铜悬浮剂420 g/hm2，进行田间防效试验，使用清水作为空白对照.

实验对象：黄瓜细菌性角斑病

作物及品种：超优1号黄瓜

作物栽培及环境条件：试验在李埠镇李埠村进行.试验地面积为1 000 m2，试验田系常年蔬菜种植基地.土壤质地为粘土，pH值呈中性、土壤肥力中等.按常规方法进行田间管理.

试验共设5个处理，每个处理4次重复，共20个小区.试验小区采用随机区组排列，每个小区面积25 m2.2015年7月12日第1次用药，第2次施药7 月18日，共用药2次.采用3WBD-16型背负式电动喷雾器在微风情况下喷雾，喷雾均匀周到，喷雾容量450 kg/hm2.试验过程中不使用其他药剂.末次药后10 d调查试验结果，每小区随机取5 点调查，每点调查2株全部叶片，按叶片上病斑占整个叶面积的百分率分级.计算病叶率、病情指数及防治效果，数据采用Duncan新复极差法进行显著性比较.

分级标准为：

0 级——无病斑；

1 级——病斑面积占整个叶面积的5%以下；

3 级——病斑面积占整个叶面积的6%～10%；

5 级——病斑面积占整个叶面积的11%～20%；

7 级——病斑面积占整个叶面积的21%～50%；

9 级——病斑面积占整个叶面积的50%以上；

病情指数= ∑(病叶数×相对级数)/(调查总叶数×总级数)；

防治效果(%)= (对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数.

表3 9种杀菌剂对黄瓜细菌性角斑病病菌的生长抑制效果

2 结果与分析

2.1 9 种杀菌剂对黄瓜细菌性角斑病病菌的抑制作用

从表3可知，9 种杀菌剂在适当的浓度梯度下对黄瓜角斑病病菌有一定的抑制作用.其中，当浓度仅为4亿个/L的时候，10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂的抑菌率已经达到79.12%；20%春雷霉素水剂的抑菌率最低，当浓度为4 000 mg/L时为45.83%.9种杀菌剂对黄瓜细菌性角斑病病菌的抑制效果见表3.

2.2 9 种供试药剂对黄瓜细菌性角斑病病菌的毒力

从表4可知：6 种化学药剂中，5%噻霉酮水剂和0.3%四霉素水剂对黄瓜细菌性角斑病的抑制效果较好，抑制中浓度EC50分别为8.56 mg/L和10.38 mg/L；其他4 种药剂则效果较差，20%乙蒜素乳油、8%辛菌胺醋酸盐水剂、33.5%喹啉铜悬浮剂和20%春雷霉素水剂的抑制中浓度EC50分别为55.20 mg/L、799.50 mg/L、2 583.91 mg/L和4741.43 mg/L.3种生物药剂中，10 亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂对黄瓜细菌性角斑病的抑制效果较好，抑制中浓度为3.12亿个/L，其他2种药剂则效果较差，25亿芽孢/克坚强芽孢杆菌可湿性粉剂和100亿芽孢/克解淀粉芽孢杆菌可湿性粉剂的抑制中浓度EC50分别为304.25亿个/L和984.27亿个/L.

2.3 田间防效试验

由表5可见，10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂1 500倍液、20%春雷霉素水剂63 g/hm2对黄瓜角斑病具有非常好的效果，其防效分别达到83%和72.38%，相对于其他药剂差异极显著(P=0.01)，防治效果显著.0.3%四霉素水剂和33.5%喹啉铜悬浮剂的防治效果略低，在实际情况允许的情况下可以加大剂量.0.3%四霉素水剂、10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂、33.5%喹啉铜悬浮剂和20%春雷霉素粒剂在试验剂量范围内对黄瓜生长安全.

表4 9种杀菌剂对黄瓜细菌性角斑病病菌的毒力回归方程

表5 杀菌剂第2次喷药10 d后对黄瓜细菌性角斑病的防治效果

注：字母不同表明有显著性差异.含有相同之母表示之间差异不明.

3 结论与讨论

室内毒力测定结果表明，6种化学药剂中，5%噻霉酮水剂和0.3%四霉素水剂对黄瓜细菌性角斑病的抑制效果较好，抑制中浓度EC50分别为8.56 mg/L和10.38 mg/L；其他4种药剂则效果较差，20%乙蒜素乳油、8%辛菌胺醋酸盐水剂、33.5%喹啉铜悬浮剂和20%春雷霉素水剂的抑制中浓度EC50分别为55.20、799.50、2 583.91 mg/L和4 741.43 mg/L.3 种生物药剂中，10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂对黄瓜细菌性角斑病的抑制效果较好,抑制中浓度为3.12亿个/L，其他2种药剂则效果较差,抑制中浓度为304.25亿个/L和984.27亿个/L.在田间药效试验结果中，10 亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂1500倍液和20%春雷霉素水剂42 g/hm2的防效较好，其防效分别为82.74%和72.38%.0.3%四霉素水剂和33.5%喹啉铜悬浮剂则效果较差.出于高效且无公害考虑，从田间试验和室内毒力测定相结合可以推测出，防治黄瓜细菌性角斑病推荐使用10亿芽孢/克多粘芽孢杆菌可湿性粉剂1 500倍液效果较佳.20%春雷霉素水剂在室内毒力测定中效果一般，而在田间防效中却效果较好，原因可能是：春雷霉素对土壤微生物数量的影响对土壤中的细菌、真菌和放线菌产生刺激作用，对土壤呼吸作用产生刺激效应以及对土壤酶活性的影响，对土壤中脲酶活性表现出显著的刺激效应.从而有预防、治疗、生长调剂功能.因此，建议在黄瓜细菌性角斑病发生前期使用，如果黄瓜细菌性角斑病已经发生，建议增加剂量.

[1] 王平,樊金娟,刘长远,等.黄瓜细菌性角斑病的分子检测[J].中国农学通报，2012,25:150-153.

[2] UNDERWOOD W.The Pseudomonas syringae type III effector tyrosine phosphatase HopAo1suppresses innate immunity inArabidopsis thaliana [J].Plant Journal,2007,52:658-672.

[3] ZHOU J M.Pseudomonas syringae Effector AvrPto Blocks Innate Immunity by TargetingReceptor Kinases. Curr Biol. [J].Curr Biol,2008,18:74-80.

[4] 吴炳芝,段文学,张景春,等.保护地黄瓜细菌性角斑病、霜霉病化学防治配套技术研究[J].北方园艺,2001(4):31-33.

[5] 赵先丽,孙军德,程海涛，等.黄瓜细菌性角斑病的拮抗细菌筛选初报[J].沈阳农业大学学报,2005(3):95-97.

[6] 易金全,韦红,钟承茂.5种药剂防治黄瓜细菌性角斑病药效试验[J].植物医生，2015(3):30-31.

[7] 张惠淳,杨金琛,王立石,等.乙蒜素乳油防治黄瓜细菌性角斑病[J].吉林蔬菜，2007(2):40-41.

[8] 阎瑞英,高雪莲.黄瓜细菌性角斑病的药剂防治[J].甘肃农业科技,1989(5):33-34.

[9] 张俊,刘继荣.6种药剂防治黄瓜细菌性角斑病田间药效比较试验[J].安徽农学通报,2008(15):205-206.

[10] 王道青，郭庆海，张秀成，等.新药剂防治小麦白粉病筛选[J].安徽农业科学,2015,43(29):135-136.

[11] 谭定凤.2种杀菌剂对黄瓜林霜霉病田间药效评价[J].安徽农业科学,2014，42(13)：3889-3890.

[12] 高玉亮，缪作清，孙漫红，等.延边地区抑制黄瓜枯萎病菌土壤放线菌的调查研究[J].延边大学农学学报,2015，37(4)：321-325.

[13] 贺字典，赵春明，谢新宇，等.黄瓜内生木霉菌对尖孢镰孢菌黄瓜专业型(Eusariumorysporumf.sp.cucumerinum)抵制作用[J].河北科师范学院学报，2015，29(1)：1-5.

责任编辑：高 山

Electing Pesticide about Prevention and Treatment of Bacterial Angular Leaf Spot of Cucumber

FENG Xiang1,JIANG Nian2,CHEN Yaobing1.2*,ZHENG Xiaojiang2*

(1. College of Agriculture,Yangtze University，Jingzhou 434000，China;2.School of Biological Science and Technology，Hubei University for Nationalities，Enshi 445000，China)

In this paper,the inhibition zone method was used to measure the toxicity of 9 kinds of fungicides in the market,and a field control test was conducted to screen the effective fungicides.The results showed that: in the six kinds of chemical agents,5% thiamethoxam mildew agent and 0.3% aqueous solution of tetramycin have better effect on the bacterial angular leaf spot of cucumber effect,the other 4 kinds of drugs are less effective.And in the 3 kinds the wettable powder of one billion bacillus / gram of bacillus subtilis has better inhibitory effect on the cucumber bacterial angular leaf spot disease,but the effect of the other 2 kinds of drugs is poor.In the field experiment,one billion spores / g bacillus polymyxa wet powder 1 500 times fluid and 20% kasugamycin 42 g/hm2have better control effect, whose effect was 82.74% and 72.38% respectively.And the 0.3% four drug agent and 33.5% suspension of coppe have a less effect.Therefore,one billion bacillus / gram of bacillus subtilis is recommended in the prevention and treatment of bacterial angular leaf spot of cucumber

fungicides;bacterial angular leaf spot of cucumber;inhibition zone method

2016-06-21.

湖北省自然科学基金创新群体项目(2009CDA115).

冯翔(1992- )，男，硕士生，主要从事蔬菜作物病虫害的研究;*

*共同通信作者:郑小江(1958- )，男，教授，主要从事野生植物资源保护与利用的研究.

1008-8423(2016)03-0337-04

10.13501/j.cnki.42-1569/n.2016.09.024

S435.6

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