蒸馏—气相色谱法测定血液中乙醇含量方法的研究

王 冰，王希明

（1.甘肃省张掖市公安局，甘肃 张掖 734000；2.甘肃省张掖市疾病预防控制中心，甘肃 张掖 734000）

蒸馏—气相色谱法测定血液中乙醇含量方法的研究

王 冰1，王希明2

（1.甘肃省张掖市公安局，甘肃 张掖 734000；2.甘肃省张掖市疾病预防控制中心，甘肃 张掖 734000）

采用蒸馏法处理样品，气相色谱检测血液中乙醇含量，无需顶空等特殊设备。在 0～160mg/100mL,浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，严格控制蒸馏速度，平均回收率97%，RSD：5.0%～10.6%，平均7.6%，特异性高，方法快速、简易可靠，具有良好的通用性。

血液蒸馏；气相色谱；乙醇检测

开展生物材料中酒精含量的测定，为公安执法有着重要的作用。血液中乙醇含量检测，采用自动顶空进样气相色谱法最佳[1]，但需要专门仪器，自动顶空进样装置，成本高实用性有限，手动顶空进样体积大[2]，操作难度大，精密度差，色谱耗材大，应用受限。我们根据实验室的实际条件，采用直接蒸馏法处理样品气相色谱法检测，开展血液乙醇含量测定方法的研究，实验研究完善了检测方法。检出限、精密度和准确度完全符合检验的要求。

1 原理

乙醇具有挥发性。血液中的乙醇通过加热蒸馏，从试样中蒸发出来，再通过冷却收集蒸馏液，用带有氢火焰检测器的气相色谱仪进行测定，乙醇的响应值（峰面积）与蒸馏液中乙醇的浓度呈正比例关系，应用标准系列，以试样的峰面积与标准系列比较，计算出血液中乙醇含量。

2 材料与方法

2.1 仪器与试剂

气相色谱仪：东西电子GC4011A，氢火焰离子化检测器；色谱柱：不锈钢柱,长2m，内径2mm，内装GDX-102，80～100目；全玻璃磨口蒸馏器500mL；10mL刻度离心管，微量注射器。乙醇；色谱纯；乙醇标准液（1mL=50mg）：称取乙醇2.5000g，于50mL溶量瓶，用纯水稀释至刻度。

2.2 色谱条件

柱温150℃，汽化室170℃，检测器190℃。空气：0.2Pa，氢气0.08Pa，氮气0.21Pa。

2.3 检测步骤

样品处理，取血样2～5mL，加入蒸馏瓶中，加水50mL，置电热板上，连接好冷凝管和冷凝水，中温加热蒸馏，小心控制加热温度防溢出。准确收集馏液10mL，馏液待测定用。另取25mL溶量瓶6个，分别加入乙醇标准液 （1mL=50mg）0.0，0.10，0.20，0.40，0.50，0.80mL，用纯水稀释至刻度。乙醇浓度分别为0.0，20，40，80，100，160mg/100mL。仪器预热各项条件稳定后，分别吸取标准系列和样品蒸馏液进样，进样量1ul。用标准系列浓度和相应的峰面积制作标准曲线，计算出回归方程。以样品保留时间定性，用峰面积代入回归方程计算出血液中乙醇含量。

2.4 计算

式中：X——样品乙醇浓度mg/100mL；

C——样品蒸馏液乙醇浓度mg/100mL；

V——血液取样量mL。

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择

用正交设计方法选择柱温、汽化室温度和载气流量的最佳条件，以柱温150℃，汽化室170℃，检测器190℃，氮气0.21Pa灵敏度最高。

3.2 样品蒸馏时间的确定

样品加热蒸馏时会产生大量气泡，很容易溢出，所以要严格控制好温度，主要依所用电热器及工作经验加以控制，以不溢出为准。经蒸馏收集馏出液10mL后，再继续收集馏出液1mL左右于另一容器中，首先用0.1%重铬酸钾检验，不能使其退色，再与

样品相同条件下进样1ul，在已知保留时间内没有峰出现。同样在不同时间中测定10个样品，均没有色谱峰出现，说明取样品2～5mL，蒸馏收集馏出液10mL，样品血液中的乙醇完全被蒸出。

3.3 方法特异性

收集10份前两天确认没有喝酒人的血液，取2～5mL蒸馏，收集蒸馏液10mL，在上述条件下分别进样1ul，5min内无峰出现。说明采用血液直接蒸馏方法具有很高的特异性，在本方法条件下，血液经蒸馏没有其他干扰物质。采用蒸馏法分离样品是传统的实验技术，所用仪器设备简单，实用。

3.4 方法线性试验

对标准系列连续测定3次，每天1次，结果见表1，相关系数r＞0.9991。

表1 线性试验结果

3.5 回收率试验

取血液样品6份，分别取2—5mL加入蒸馏瓶中，分别加入乙醇标准液(1mL=50mg)蒸馏，收集蒸馏液10mL，取1ul进样测定，结果见表 2，回收率在86%～106%之间，平均回收率为97%。

表2 回收率试验结果

3.6 精密度试验

取3份血液样品，取2～5ml双份蒸馏，收集蒸馏液10mL,分别进样3次，结果见表3。精密度(RSD)为5.0%～10.6%，平均值为7.6%，符合标准要求。

表3 精密度试验结果

人体血液中乙醇是由于喝酒直接吸收入血产生的，大量的乙醇主要作用是起一种中枢神经系统抑制剂的作用[3]，血液中乙醇浓度很低（10mg/ 100mL）时察觉不出什么影响，直到血液中乙醇浓度很高（500mg/100mL）时，最终严重地抑制呼吸，并引起死亡。人体对乙醇的耐受性具有较大的个体差异。研究报导，血液中乙醇浓度10～50mg/ 100mL时，人的精神愉悦，抑制作用减弱，注意力和判断力降低；血液中乙醇浓度50～100mg/100mL时，表现为兴奋，镇静、肌肉协调能力减弱，敏感反应能力降低；血液中乙醇浓度 150～300mg/ 100mL时，人的精神错乱，定向力消失，感觉障碍，失去平衡能力，语言含糊；血液中乙醇浓度250～400mg/100mL时，表现为木僵，对外界刺激的反应能力显著降低，肌肉共济失调明显，大小便失禁，昏睡；血液中乙醇浓度10～50mg/100mL时，人昏迷，完全失去知觉，抑郁反射，低常体温，呼吸性和循环性虚脱，死亡。

3.7 样品检验

从2004年开始，检测交警送的当事人血液中乙醇含量836份，乙醇含量在0～450mg/100mL，没有出现当事人不服的情况。参照美国国家乙醇和药物安全委员会和美国医学会代表机构规定，从交通事故中责任分析研究，暂定血液乙醇浓度＜20mg/ 100mL未喝酒，血液乙醇浓度＞20mg/100mL已喝酒，血液乙醇浓度＞100mg/100mL，已喝醉。

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